一种结合CTGF的融合蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种融合蛋白，所述的融合蛋白由抗人CTGF的抗体与人二型TGF

【技术实现步骤摘要】
一种结合CTGF的融合蛋白及其应用


[0001]本专利技术属于蛋白质
，具体涉及一种结合CTGF的融合蛋白及其应用。

技术介绍

[0002]CTGF(Connective Tissue Growth Factor)也称为CCN2或结缔组织生长因子，是细胞外基质相关肝素结合蛋白的CCN家族的细胞质蛋白。CTGF作为参与TGF
‑
β(Transforming Growth Factor
‑
β)信号的辅因子，可诱导成纤维细胞成为肌成纤维细胞，其沉积胶原蛋白，最终导致器官瘢痕形成和功能障碍。
[0003]组织、血液或玻璃体液中的CTGF水平已被证明与许多疾病中的纤维化和及其严重程度相关。TGF
‑
β和CTGF的这两个分泌因子被广泛认为是纤维化发生的通用介质。TGF
‑
β主要通过Smad和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)两条途径发挥抑制细胞增殖、促进细胞外基质积聚的功能。TGF
‑
β1可以诱导其他细胞因子合成，如血小板衍生生长因子、肿瘤坏死因子、成纤维细胞生长因子等，并通过这些因子进一步促进心肌纤维化的发展[1]。当肾小管间质发生纤维化时，细胞外基质沉积增多，这是导致慢性肾功能衰竭的原因之一。肾间质纤维化是各种肾脏疾病发展到肾衰竭的共同途径及病理基础。持续的肝损伤会导致肝脏大面积纤维化而引起肝硬化。肾间质纤维化与肝纤维化时，TGF
‑
β也起到了很重要的作用。TGF
‑
β是CTGF的强力诱导剂，大多数模型假定CTGF作为TGF
‑
β活性的下游介质，而其他研究支持TGF
‑
β和CTGF各自的促纤维化活性之间的相互依赖(interdependent)，而不仅仅是有次序性(sequential relationship)的依赖关系[2]。现有的一些动物数据显示了TGF
‑
β和CTGF在成纤维化反应的发生和维持过程中的具有协同作用。
[0004]在US20040248206A1、US20140343258A1、US201214367081、US201213385320、CN109402127A、CN109824777A、CN104011206A专利中指出了使用抗CTGF抗体或者干扰RNA等生物制品用于纤维化类疾病比如肺纤维化、肝纤维化、癌症、眼科疾病等领域的治疗应用。纤维化疾病是一种多细胞因子共同介导的纤维细胞变异、组织增生的疾病，比如在肺纤维化过程中TGF
‑
β、PDGF和IGF
‑
1都是致纤维化的生长因子，在早期分泌增多，同时启动肺纤维化的过程，形成不可逆性肺损伤。
[0005]目前该领域仍需要提供新的分子实体进一步优化疾病的治疗方法。
[0006][1](丁文金等."TGF
‑
β1在不同原因致心肌纤维化中的作用."科技导报2(2016):221
‑
225.)
[0007][2](Jos
éꢀ
G.Abreu,et al."Connective
‑
tissue growth factor(CTGF)modulates cell signalling by BMP and TGF
‑
β."Nature Cell Biology 4.8(2002):599
‑
604.；Oganesian,A.,Y.Zhu,and L.J.Sandell."Type IIA procollagen amino propeptide is localized in human embryonic tissues."Journal of Histochemistry&Cytochemistry 45.11(1997):1469
‑
1480.

技术实现思路

[0008]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种新型的双功能融合蛋白，该蛋白可以同时结合CTGF与TGF
‑
β。令人意外的是，本专利技术的融合蛋白经过一步纯化后即可获得纯度极高(100％)的目的蛋白，同时在实验中发现即使采用很低的剂量(1mg/kg)进行药物治疗也可以大大降低实验动物肺纤维化的程度。
[0009]术语解释
[0010]本专利技术中，除非另行规定，结合本专利技术使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。此外，除非上下文另有要求，单数术语应包括复数，并且复数术语应包括单数。
[0011]与重组DNA、寡核苷酸合成、组织培养和转化(例如电穿孔、脂质体转染)、酶促反应和纯化技术结合使用的示例性技术是本领域已知的。许多这样的技术和程序描述于，例如，Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual(第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.(1989))，以及其他许多地方。另外，用于化学合成、化学分析、药物制备、配制和递送、以及患者治疗的示例性技术也是本领域已知的。
[0012]在本申请中，除非另有说明，“或”的使用意味着“和/或”。在多个从属权利要求的情况下，仅仅在替代方案中使用“或”引用一个以上的前述独立或从属权利要求。
[0013]如本文所述，任何浓度范围、百分比范围、比率范围或整数范围应被理解为包括所述范围内的任何整数的值，并且在适当时包括其分数(诸如整数的十分之一和百分之一)，除非另外指明。
[0014]单位、前缀和符号均以它们的国际单位制(SI)公认的形式表示。数值范围包括定义该范围的数字。在本文中提供的小标题不是本公开的不同方面的限制，可以通过整体上参考本说明书来获得这些方面。
[0015]除非另外指明，正如根据本公开所使用的，以下术语应理解为具有以下含义：
[0016]“抗体”是指至少包含重链的互补决定区CDR1、CDR2和CDR3并且至少包含轻链的CDR1、CDR2和CDR3的分子，同时，还包括骨架区FR1、FR2、FR3和FR4，其中该分子能够与抗原结合。抗体这一术语包括但不限于能够结合抗原的片段，例如Fv，单链Fv(scFv)、Fab、Fab
’
、和(Fab
’
)2。术语抗体还包括但不限于嵌合抗体、人源化抗体和各种物种如小鼠、人、食蟹猴、羊驼等的抗体。
[0017]在一些实施方案中，抗体包含重链可变区和轻链可变区。在一些实施方案中，抗体包含至少一条包含重链可变区和至少一部分重链恒定区的重链、以及至少一条包含轻链可变区和至少一部分轻链恒定区的轻链。在一些实施方案中，抗体包含两条重链和两条轻链，其中每条重链包含重链可变区和至少一部分重链恒定区，并且，其中每条轻链包含轻链可变区和至少一部分轻链恒定区。包括例如包含所有六个CDR(三个重链CDR和三个轻链CDR本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，其特征在于，所述的融合蛋白由抗人CTGF的抗体与人二型TGF
‑
β受体胞外段通过接头连接形成，所述的融合蛋白接头选用(G
x
S
y
)
n
接头，其中x为0、1、2、3、4、5，y为0、1、2、3、4、5，n为0、1、2、3、4、5。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述的抗人CTGF的抗体的轻链可变区CDR选自SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.10；或者所述的抗人CTGF的抗体的重链可变区CDR选自SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.18；其中SEQ ID NO.15中的氨基酸C是可以被替换的，优选的氨基酸C可以被替换成氨基酸S、Y、F。3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述的抗人CTGF的抗体的轻链可变区选自SEQ ID NO.11或SEQ ID NO.12，或者与SEQ ID NO.11或SEQ ID NO.12有至少90％一致性的氨基酸序列。4.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，所述的抗人CTGF的抗体的重链可变区选自SEQ ID NO.19或SEQ ID NO.20，或者与SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：张鹏，马琳，郭树华，
申请(专利权)人：苏州普乐康医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：