用于治疗家族性高胆固醇血症的基因疗法制造技术

描述了可用于治疗患有家族性高胆固醇血症的人类患者的方案。此类方案包括共施用皮质类固醇与包括LDLR的复制缺陷型重组腺相关病毒(rAAV)的悬浮液。毒(rAAV)的悬浮液。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗家族性高胆固醇血症的基因疗法


[0001]本专利技术涉及一种用于治疗家族性高胆固醇血症(FH)，并且具体地纯合性FH(HoFH)的基因疗法。

技术介绍

[0002]家族性高胆固醇血症(FH)是由影响LDL受体(LDLR)功能的基因的突变引起的有生命危险的病症(Goldstein等人《遗传性疾病的代谢基础和分子基础中的家族性高胆固醇血症(Familial hypercholesterolemia,in The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease)》,C.R.Scriver等人编辑.2001,麦格劳
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希尔信息服务公司(McGraw
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Hill Information Services Company):纽约(New York).第2863页到第2913页(2001))。据估计，>90％的分子确诊FH的患者携带编码LDLR(LDLR，MIM 606945)的基因中的突变。剩余的患者携带三个另外的基因上的突变：编码载脂蛋白(apo)B的APOB(MIM 107730)、编码原蛋白转换酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型(PCSK9)的PCSK9(MIM 607786)和编码LDLR衔接蛋白1的LDLRAP1(MIM 695747)。后者是与隐性性状相关联的唯一基因突变。纯合性通常是由相同基因的2个等位基因中存在的突变赋予的；然而已经报告了具有双杂合的患者的案例(两种杂合突变，两种不同基因中各一个)。基于杂合性FH的的患病率介于500中有1个与200中有1个之间(Nordestgaard等人《欧洲心脏病杂志(Eur Heart J.)》,2013.34(45):第3478页到90a页(2013)，Sjouke等人《欧洲心脏病杂志》,(2014))，估计世界范围内有7,000到43,000的人患有纯合性FH(HoFH)。
[0003]突变LDLR等位基因的表征已经揭示了包含有缺失、插入、错义突变和无义突变的各种突变(Goldstein等人2001)。已经报告了超过1700种LDLR突变。这种基因型的异质性导致受体生化功能的可变结果，所述可变结果以四个一般组进行分类。1类突变与不可检测蛋白质相关联并且通常是由基因缺失引起的。2类突变导致蛋白质细胞内加工的异常。3类突变特异性影响结合配体LDL，并且4类突变编码不在被膜小窝中聚集的受体蛋白。基于使用患者培养的成纤维细胞评估的残留LDLR活性，突变还被分类为受体阴性(<2％的LDLR残留活性)或受体缺陷型(2％到25％的残留活性)。受体缺陷型患者的平均LDL
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C水平较低并且心血管病程恶性程度较低。
[0004]由于LDL受体功能受损，患有HoFH的患者的未经过治疗的血浆总胆固醇水平通常大于500mg/dl，从而造成过早和侵袭性动脉粥样硬化，这经常在20岁之前导致心血管疾病(CVD)并且在30岁之前导致死亡(Cuchel等人《欧洲心脏病杂志》,2014.35(32):第2146页到第2157页(2014)，Goldstein等人2001)。因此对这些患者尽早开始积极的治疗是必要的(Kolansky等人2008)。可用的选择是有限的。他汀类药物被认为是药物治疗的一线药物。即使用最大剂量，在大部分患者中观察到仅仅10％到25％的LDL
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C血浆水平降低(Marais等人《动脉粥样硬化(Atherosclerosis)》,2008.197(1):第400
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6页(2008)；Raal等人《动脉粥样硬化》,2000.150(2):第421
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8页(2000))。在他汀类药物疗法中添加胆固醇吸收抑制剂依泽替米贝(ezetimibe)可能导致LDL
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C水平进一步降低10％到20％(Gagne等人《循环
(Circulation)》,2002.105(21):第2469
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2475页(2002))。降低胆固醇药物(包含胆酸螯合剂、烟酸、贝特类药物(fibrate)和普罗布考(probucol))的使用在前他汀类时代已成功应用，并且可以被认为实现了在HoFH中进一步减少LDL
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C；然而所述降低胆固醇药物的使用受到耐受性和药物可获得性的限制。已经证明这种方法可减少CVD和全因死亡率(Raal等人《循环》,2011.124(20):第2202
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7页)。尽管实施了积极的多重药物治疗方法，但是HoFH患者维持升高的LDL
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C并且其平均预期寿命维持在大约32岁(Raal等人2011)。若干非药物性选项已经经过多年测试。手术干预如门腔静脉分流(Bilheimer《动脉粥样硬化》,1989.9(增刊1):第I158到第I163页(1989)；Forman等人《动脉粥样硬化》,1982.41(2
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3):第349到第361页(1982))和回肠分路(Deckelbaum等人《新英格兰医学期刊(N.Engl.J.Med.)》1977；296:465
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470 1977.296(9):第465到第470页(1977))只引起了局部与暂时的LDL
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C降低，并且现在被认为是不能成功的方法。原位肝移植已经展示出显著降低HoFH患者的LDL
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C水平(Ibrahim等人《心血管转化研究杂志(J Cardiovasc Transl Res)》,2012.5(3):第351
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8页(2012)；Kucukkartallar等人2《儿科移植(Pediatr Transplant)》,2011.15(3):第281
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4页(2011))，但缺点和风险限制了这种方法的使用，包含移植后手术并发症和死亡的高风险、供体的稀缺以及需要用免疫抑制疗法进行终身治疗(Malatack《儿科移植》,2011.15(2):第123
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5页(2011)；Starzl等人《柳叶刀(Lancet)》,1984.1(8391):第1382
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1383页(1984))。HoFH的现行护理标准包含脂蛋白单采术，所述脂蛋白单采术是一种净化LDL
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C中的血浆的物理方法，其可以暂时将LDL
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C降低超过50％(Thompson《动脉粥样硬化》,2003.167(1):第1到第13页(2003)；Vella等人《梅奥临床学报(Mayo Clin Proc)》,2001.76(10):第1039
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46页(2001))。治疗环节后LDL
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C在血浆中的迅速重新积累(Eder和Rader，《当前治疗趋势(Today's Therapeutic Trends)》,1996.14:第165
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179页(1996))需要每周或每两周进行单采术。尽管此程序可以本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于治疗家族性高胆固醇血症(FH)的方案，所述方案包括向患者施用包括重组腺相关病毒(rAAV)病毒颗粒的悬浮液，所述rAAV病毒颗粒包括包装在AAV8衣壳中的载体基因组，其中所述载体基因组包括AAV反向末端重复序列(ITR)和可操作地连接到肝脏特异性启动子的对人低密度脂蛋白(LDL)受体(hLDLR)进行编码的核酸序列，其中所述悬浮液以所述患者的每千克(kg)体重约2.5
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个基因组拷贝(GC)的所述rAAV病毒颗粒的剂量施用于所述患者，并且其中所述基因组拷贝通过优化的定量聚合酶链反应(oqPCR)或数字液滴聚合酶链反应(ddPCR)确定。2.根据权利要求1所述的方案，其进一步包括用类固醇治疗所述患者。3.根据权利要求1或2所述的方案，其中所述悬浮液是进一步包括调配缓冲液的水溶液，所述调配缓冲液包括磷酸盐缓冲盐水。4.根据权利要求1到3中任一项所述的方案，其中所述悬浮液包括浓度或效价为至少1
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GC/ml的所述rAAV病毒颗粒。5.根据权利要求1到4中任一项所述的方案，其中所述rAAV病毒颗粒至少约95％不含空衣壳。6.根据权利要求1到5中任一项所述的方案，其中所述rAAV病毒颗粒具有介于0:4到1:4之间的空衣壳与完整颗粒的比率，包含端点和其间的任何比率。7.根据权利要求1到6中任一项所述的方案，其中5
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GC/kg剂量的所述rAAV病毒颗粒将纯合性家族性高胆固醇血症(HoFH)的双敲除(DKO)LDLR
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Apobec
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小鼠模型中的基线胆固醇水平降低25％到75％。8.根据权利要求1到7中任一项所述的方案，其中所述肝脏特异性启动子是甲状腺素结合球蛋白(TBG)启动子。9.根据权利要求8所述的方案，其中所述TBG启动子是人TBG启动子。10.根据权利要求1到9中任一项所述的方案，其中hLDLR核酸序列包括SEQ ID NO:2或4的序列或SEQ ID NO:6的核苷酸(nt)969到nt 3551。11.根据权利要求1到10中任一项所述的方案，其中所述载体基因组进一步包括内含子、增强子和polyA信号中的一个或多个。12.根据权利要求11所述的方案，其中所述增强子是α1微球蛋白/双库尼茨抑制剂(bikunin)增强子(αmic/bik)增强子。13.根据权利要求11或12所述的方案，其中所述polyA信号是兔β球蛋白polyA。14.根据权利要求1到13中任一项所述的方案，其中所述载体基因组包括SEQ ID NO:6的核苷酸(nt)1到nt 3947的序列。15.根据权利要求1到14中任一项所述的方案，其中所述悬浮液进一步包括表面活性剂。16.根据权利要求15所述的方案，其中所述表面活性剂是泊洛沙姆。17.根据权利要求15或16所述的方案，其中所述表面活性剂以所述悬浮液的约0.0005％到约0.001％的浓度存在。18.根据权利要求1到权利要求17中任一项所述的方案，其中所述悬浮液的pH范围为6.5到8或7到7.5。19.根据权利要求1到权利要求18中任一项所述的方案，其中所述悬浮液进一步包括调
配缓冲液，所述调配缓冲液包括180mM NaCl、10mM磷酸钠和0.001％泊洛沙姆188，pH为7.3。20.根据权利要求1到19中任一项所述的方案，其中所述悬浮液通过外周静脉输注施用于所述患者。21.根据权利要求1到20中任一项所述的方案，其中所述患者是被诊断患有纯合性FH(HoFH)的人类患者。22.根据权利要求1到21中任一项所述的方案，其中所述患者用类固醇进行治疗。23.根据权利要求22所述的方案，其中所述患者用类固醇共疗法治疗约14周。24.根据权利要求22所述的方案，其中在施用所述rAAV悬浮液前一天(即，第
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1天)到所述rAAV给药后约第8周内以相当于约40毫克/天强的松的初始剂量的逐渐减量的剂量向所述患者施用所述类固醇。25.根据权利要求24所述的方案，其中对于第9周和第10周中的每周以10mg剂量减少/周并且对于第11周、第12周和第13周中的每周以5mg剂量减少/周向所述患者进一步施用所述类固醇，使得所述类固醇在第14周后停止，任选地，当所述患者接受约2.5
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GC/kg到7.5
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个基因组拷贝的剂量或本文提供的其它剂量时，还递送所述类固醇方案。26.根据权利要求22到25中任一项所述的方案，其中所述类固醇是强的松。27.一种用于治疗家族性高胆固醇血症(FH)的悬浮液，所述悬浮液包括重组腺相关病毒(rAAV)病毒颗粒，所述rAAV病毒颗粒包括包装在AAV8衣壳中的载体基因组，其中所述载体基因组包括AAV反向末端重复序列(ITR)和可操作地连接到肝脏特异性启动子的对人低密度脂蛋白(LDL)受体(hLDLR)进行编码的核酸序列，其中所述悬浮液适合于以患者的每千克(kg)体重约2.5
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个基因组拷贝(GC)的所述rAAV病毒颗粒的剂量施用于所述患者，并且其中所述基因组拷贝通过优化的...

【专利技术属性】
技术研发人员：D，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚州大学信托人，
类型：发明
国别省市：