包含用于结合结构域和可分泌肽的基因的重组载体制造技术

本公开提供了经修饰的重组逆转录病毒，其包含编码具有异源分泌信号的蛋白质、含有可操作地连接至异源多核苷酸的2A

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含用于结合结构域和可分泌肽的基因的重组载体
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2018年11月13日提交的美国临时申请序列号No.62/760,912和2019年8月29日提交的美国临时申请序列号No.62/893,673的优先权，其公开内容通过引用并入本文。
[0003]参考序列表
[0004]本申请与电子格式的序列表一起提交。序列表以名为Sequence
‑
Listi ng_ST25.txt的文件提供，创建日期为2019年11月13日，大小为408,816字节。序列表的电子格式信息通过引用整体并入本文。


[0005]本公开涉及病毒载体。本公开还涉及此类病毒载体用于在细胞中递送和表达异源核酸的用途及其表达和分泌。

技术介绍

[0006]将基因和异源核酸递送至细胞和受试者的有效方法已经成为研究人员进行科学开发以及对疾病和病症进行可能治疗的目标。

技术实现思路

[0007]本公开提供了包含2A
‑
肽盒的病毒，所述2A
‑
肽盒在2A
‑
肽下游和待分泌的异源基因上游含有分泌肽编码序列。进一步的实施方式包含异源基因，其编码抗体、单链抗体或其它抗体相关结构、衍生自非免疫球蛋白支架蛋白的结合蛋白等。在进一步的实施方式中，抗体相关肽或非免疫球蛋白结合蛋白包含导致结合蛋白多聚化的序列，以提供对靶标实体的更高结合亲和力。又进一步的实施方式包括包含异源基因的病毒，所述异源基因在待分泌的异源基因产物的上游具有对病毒和基因的异源分泌信号。
[0008]本公开进一步描述了免疫球蛋白(Ig)和非免疫球蛋白(非
‑
Ig)支架蛋白的多肽亚基，每个亚基包括抗原结合结构域、多聚化结构域(例如二聚化、三聚化和五聚化结构域)和任选的IgG Fc结构域的融合多肽，其能够形成稳定的同源蛋白和二聚蛋白。非
‑
Ig支架蛋白的寡聚复合物也可通过单个或多个Gly
‑
Ser接头形成。
[0009]本公开包括工程化的Ig支架蛋白，其包括来源于人类、小鼠、骆驼(骆驼科)、鲨鱼和牛的重链可变结构域(Curr Opin Struct Biol.2017Aug；45:10
‑
16.doi:10.1016/j.sbi.2016.10.019，通过引用并入本文)、(Nat Biotechnol.2017Dec 8；35(12):1115
‑
1117.doi:10.1038/nbt1217
‑
1115，通过引用并入本文)，以及非
‑
Ig支架蛋白(参见，例如：Skrlec et al.,Trends Biotechnol.,33(7):408
‑
18,Jul.2015；和Simeon&Chen Protein&Cell 9:2
‑
14,2018；两者通过引用并入本文)，其包括Adnectins、亲合体(Affibodies)、Affilins、Affimers、抗运载蛋白(Anticalins)、Atrimers、Avimers、Centryrins、DARPins、Bynomers、Cys
‑
knots、Kunitz结构域、OBodies、Pronectins、Tn3s、Hcks、NPHP1s、Tecs、
Amphs、RIMBP#3、IRIKS、SNX33、Eps8L1、FISH#5、CMS#1和OSTF1，所有这些都可以可操作地连接到人类IgG Fc的N
‑
末端部分，从而允许单体或寡聚支架蛋白通过二硫键形成而二聚化，以形成高度复杂的寡聚蛋白。
[0010]提供了有用于通过病毒载体递送的癌症免疫疗法的组合物和方法，所述病毒载体包括逆转录病毒复制载体和逆转录病毒非复制载体、其它病毒载体、溶瘤病毒载体和非病毒表达载体。
[0011]在一个实施方式中，非
‑
Ig支架是人类来源的，以使抗
‑
支架蛋白免疫应答最小化。
[0012]在一个实施方式中，非
‑
Ig支架蛋白的抗原特异性结合亚基用作激动剂或拮抗剂，其靶向CTLA
‑
4、PD
‑
1、PDL1、GITR、ICOS、LAG
‑
3、TIM
‑
3、OX40、CD40L、CD137/4
‑
1BB、CD27、TIGIT、VISTA、BTLA、IL
‑
2Rα、IL
‑
2Rβ、IL
‑
2Rγ、IL
‑
15Rα、IL
‑
15Rβ、或IL
‑
15Rγ,CD19、CD20、间皮素、神经节苷脂GD2、成纤维细胞相关蛋白FAP、BCMA、CD3、FOXP3、IL
‑
12Rα或β、CD47、SIRPα、CD94/NKG2、CD244/2B4、腺苷受体A2A、EGFR、EGF、VEGFR、VEGF、PDGFR、PDGF、HGFR/MET、HGF、IGF
‑
IR、IGF
‑
1、HER
‑
1、HER
‑
2、HER
‑
3、CEA、EB
‑
D、TRAILR1/DR4、TRAILR2/DR5、外结构域B(ED
‑
B)、IL
‑
10和IL
‑
35。
[0013]在另一个实施方式中，非
‑
Ig支架蛋白的抗原特异性结合亚基用作激动剂或拮抗剂，其靶向白介素1至38中的至少一种，白介素1至38由大于60个现有成员组成；以及它们的受体，例如IL
‑
2家族的IL
‑
10和IL
‑
35受体，其由IL
‑
2、IL
‑
4、IL
‑
7、IL
‑
9、IL
‑
15和IL
‑
21组成(这些受体含有共同的细胞因子受体γ链(CD132、γc))；IL
‑
13R与IL
‑
4共享IL
‑
4Rα，IL
‑
4和IL
‑
13的受体由2个受体链组成
‑
IL
‑
4和IL
‑
13与IL
‑
4R结合，IL
‑
4R由IL
‑
4Rα(CD124)和IL
‑
13Rα1链组成，并且IL
‑
13R由2个亚基IL
‑
13Rα1和IL
‑
13Rα2组成，并且信号传导通过II型IL
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组的具有复制能力的逆转录病毒，包含：逆转录病毒GAG蛋白；逆转录病毒POL蛋白；逆转录病毒包膜；逆转录病毒多核苷酸，其包含在该逆转录病毒多核苷酸序列的3'端的长末端重复(LTR)序列、在该逆转录病毒多核苷酸的5'端的启动子序列、gag核酸结构域、pol核酸结构域和env核酸结构域，所述启动子适于在哺乳动物细胞中表达；盒，其包含2A肽或2A肽样编码序列，随后是可操作地连接于异源多核苷酸的分泌信号肽编码序列，其中所述盒位于3'LTR的5'端并且可操作地连接于编码所述逆转录病毒包膜的env核酸结构域的3'端；和在靶细胞中逆转录、包装和整合所必需的顺式作用序列。2.根据权利要求1所述的重组的具有复制能力的逆转录病毒，其中所述包膜选自双嗜性包膜、泛嗜性包膜、异嗜性包膜、10A1包膜、GALV包膜、狒狒内源性病毒包膜、RD114包膜、弹状病毒包膜、甲病毒包膜、麻疹包膜或流感病毒包膜中的一种。3.根据权利要求1所述的逆转录病毒，其中所述逆转录病毒多核苷酸序列由选自以下的病毒工程化：鼠白血病病毒(MLV)、莫洛尼鼠白血病病毒(Mo MLV)、猫白血病病毒(FeLV)、狒狒内源性逆转录病毒(BEV)、猪内源性病毒(PE RV)、猫源性逆转录病毒RD114、松鼠猴逆转录病毒、异嗜性鼠白血病病毒相关病毒(XMRV)、禽网状内皮组织增生病毒(REV)或长臂猿白血病病毒(GAL V)。4.根据权利要求1所述的逆转录病毒，其中所述逆转录病毒是γ逆转录病毒。5.根据权利要求1所述的逆转录病毒，其中所述靶细胞是哺乳动物细胞。6.根据权利要求1所述的逆转录病毒，其中所述2A肽或2A肽样编码序列编码含有序列SEQ ID NO：1的肽。7.根据权利要求1所述的逆转录病毒，其中所述2A肽或2A肽样编码序列编码SEQ ID No：55
‑
125中任一项的肽。8.根据权利要求1所述的逆转录病毒，其中，所述2A肽或2A肽样编码序列包含SEQ ID No：8
‑
19中任一项阐述的序列。9.根据权利要求1至8中任一项所述的逆转录病毒，其中所述异源多核苷酸＞500bp。10.根据权利要求1所述的逆转录病毒，其中所述异源多核苷酸包含至少2个编码序列。11.根据权利要求1所述的逆转录病毒，还包含第二盒，所述第二盒包含在所述盒下游的2A肽或2A肽样编码序列。12.根据权利要求1所述的逆转录病毒，其中所述分泌信号肽编码序列编码包含从SEQ ID NO：289
‑
301和302中选择的序列的肽。13.根据前述权利要求中任一项所述的逆转录病毒，其中所述异源多核苷酸编码与生物分子同源的抗体、抗体片段、scFv、抗原结合结构域或肽。14.根据权利要求1
‑
12中任一项所述的逆转录病毒，其中所述异源多核苷酸包含编码可操作地连接至异源蛋白或多肽的分泌信号肽的序列，其中所述异源蛋白或多肽选自前药活化酶、细胞因子、受体配体、免疫球蛋白来源的结合多肽、非免疫球蛋白结合多肽、以及它
们的任何组合，其中多个异源蛋白或多肽由2A或2A样肽分隔开。15.根据权利要求1
‑
12中任一项所述的逆转录病毒，其中所述逆转录病毒还包含第二盒，所述第二盒包含可操作地连接至所述盒下游的不同异源多核苷酸的内部启动子或基因表达元件。16.根据权利要求5所述的逆转录病毒，其中所述靶细胞选自肺癌细胞、结肠直肠癌细胞、乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、尿道癌细胞、子宫癌细胞、脑癌细胞、头颈癌细胞、胰腺癌细胞、黑素瘤细胞、胃癌和卵巢癌细胞。17.根据权利要求1所述的逆转录病毒，其中所述gag核酸结构域来源于γ逆转录病毒。18.根据权利要求17所述的逆转录病毒，其中所述gag核酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：艾米，
申请(专利权)人：索元生物医药美国有限公司，
类型：发明
国别省市：