含有NLRP7纯和突变的复发性葡萄胎患者特异性诱导多能干细胞系及构建方法技术

本发明专利技术公开了一种含有NLRP7纯和突变的复发性葡萄胎患者特异性诱导多能干细胞系及构建方法。首先收集NLRP7基因突变患者的外周血，然后分离和培养外周血单个核细胞，最后非整合病毒方法重编程为诱导干细胞，获得含有NLRP7突变的复发性葡萄胎患者特异性诱导多能干细胞。该诱导多能干细胞表达多能性分子标记，有形成畸胎瘤三个胚层分化的能力，通过突变检测、STR鉴定明确其患者来源，为NLRP7突变相关疾病的发病机制研究和治疗探索提供干细胞模型。型。型。

【技术实现步骤摘要】
含有NLRP7纯和突变的复发性葡萄胎患者特异性诱导多能干细胞系及构建方法


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种含有NLRP7纯和突变(c.1261C>T)的复发性葡萄胎患者特异性诱导多能干细胞系及其构建方法。

技术介绍

[0002]葡萄胎是一种异常的人类妊娠，以绒毛间质水肿同时缺乏胚胎发育或异常胚胎发育为特征。根据大体、镜下病理特点、核型分析以及临床表现，可以将葡萄胎分类为完全性葡萄胎和部分性葡萄胎。遗传学研究发现双亲来源的葡萄胎是一种特殊类型，约占完全性葡萄胎的20％，与家族复发性葡萄胎相关，多因基因突变导致，其中最主要的突变基因就是NLRP7，约占全部复发性葡萄胎的48
‑
80％。
[0003]NLRP家族属于胞浆组合蛋白，包括三个结构：分别是PYD区域、NACHT区域和LRR区域。NLRP7，又名NALP7、PYPAF3、NOD12、PAN7、CLR19.4，该基因位于人类常染色体19q13.42上，是NLRP家族14个成员之一，表达于滋养细胞、卵巢、睾丸、心脏、肺脏、肝脏等器官。到本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种含有NLRP7纯和突变的复发性葡萄胎患者特异性诱导多能干细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)无菌条件下收集NLRP7基因突变患者的静脉血，该NLRP7突变的患者是NLRP7基因1261位的碱基由C突变为T，纯和突变；(2)分离和培养外周血单个核细胞；(3)采用非整合病毒方法将步骤(2)得到的单个核细胞重编程为诱导干细胞，获得含有NLRP7突变的复发性葡萄胎患者特异性诱导多能干细胞。2.根据权利要求1所述的含有NLRP7纯和突变的复发性葡萄胎患者特异性诱导多能干细胞系的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)具体为：收集静脉血后采用密度梯度离心方法，去除血浆和红细胞，获得外周血单个核细胞；使用PBS洗涤，重悬于CD34阳性细胞扩增培养基中悬浮培养6
‑
8天；所述的扩增培养基由StemSpanTM SFEM II 500ml加入StemSpanTM CD34
+
Expension Supplement 10ml和1
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双抗(青链霉素混合液)组成。3.根据权利要求1所述的含有NLRP7纯和突变的复发性葡萄胎患者特异性诱导多能...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱建华，宫庭钰，黄波，
申请(专利权)人：浙江大学医学院附属第一医院，
类型：发明
国别省市：