腺相关病毒对CLN3多核苷酸的递送制造技术

本公开涉及对蜡样脂褐质沉积症神经元3(CLN3)多核苷酸的重组腺相关病毒(rAAV)递送。本公开提供了rAAV和使用所述rAAV对神经元蜡样脂褐质沉积症或CLN3

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】腺相关病毒对CLN3多核苷酸的递送
[0001]本申请要求于2019年2月4日提交的美国临时专利申请第62/800,911号的优先权，所述美国临时专利申请通过引用整体并入本文。
[0002]通过引用对序列表的并入
[0003]本申请含有作为公开的单独部分的计算机可读形式的序列表(文件名：53576_SeqListing.txt；26，705字节
‑
于2020年1月31日创建的ASCII文本文件)，所述申请通过引用整体并入本文。


[0004]本公开涉及对蜡样脂褐质沉积症神经元3(CLN3)多核苷酸的重组腺相关病毒(rAAV)递送。本公开提供了rAAV和使用rAAV用于神经元蜡样脂褐质沉积症(NCL)或CLN3
‑
巴藤病的CLN3基因疗法的方法。

技术介绍

[0005]神经元蜡样脂褐质沉积症(NCL)是一组严重的神经退行性疾病。
[0006]CLN3基因的突变导致幼年NCL或CLN3
‑
巴藤病(Kitzm
ü
等人，《人类分子遗传学(Human Molecular Genetics)》2008；17(2)：303
‑
312；Munroe等人，《美国人类遗传学杂志(Am J Hum Genet.)》1997；61：310
‑
316)，也被称为Spielmeyer
‑
Sjogren
‑
Vogt病。突变干扰溶酶体贮积清除过程。此时，已经描述了67种引起疾病的突变。然而，85％的患者是1.02kb缺失的纯合子，导致外显子7和外显子8的缺失。在患者中发现的CLN3突变主要导致蛋白质(battenin)的丰度或功能降低。
[0007]CLN3
‑
巴藤病的典型发病年龄在4岁到7岁之间，具有潜在的但快速进展的视力丧失。患有幼年NCL的儿童在数月内从视力正常变为失明，但在若干年之后可以维持明暗感知。认知和运动衰退通常在接下来(7岁到10岁)伴随行为问题，如好斗性(8岁到10岁)，并且然后癫痫发作(10岁到12岁)。帕金森氏病(Parkinsonian)的特征发展在11
‑
13岁之间。在疾病的后期阶段，已经报道了个体中的心脏传导异常。在患有CLN3
‑
巴藤病的个体中存在高表型变异性，但是所有患者都具有共同的低视力或进行性失明。此外，已经在82名患者中验证的统一巴藤病评定量表(UBDRS)的物理分量表示出了每年稳定并且可测量的下降2.86点(2.27
‑
3.45，p＜0.0001)。从症状发作到寿命结束，平均存活期通常为15年。
[0008]CLN3
‑
巴藤病的治疗措施范围广泛，旨在努力减轻疾病。这些包含如靶向AMPA受体的EGIS
‑
8332和他仑帕奈(talampanel)等药物疗法；允许通读过早停止突变的药物；有助于分解积累的存储材料(半胱胺酒石酸氢盐(cystagon)/半胱胺(cysteamine))的药物；以及甚至免疫抑制疗法(霉酚酸酯(mycophenolate)、泼尼松龙(prednisolone))。还评估了酶替代和干细胞疗法。虽然已经研究了许多治疗方法，但很少有人在临床环境中进行评估。没有可用于减缓进展或治愈疾病的方法。患者和家属依靠治疗来改善症状和姑息治疗。
[0009]Cln3
Δex7/8
小鼠模型创建于21世纪初，用于模仿CLN3
‑
巴藤病患者中最常见的致病突变：从CLN3基因中消除外显子7和8的大约1kb突变(Cotman等人，《人类分子遗传学》2002；
11(22)：2709
‑
2721；Mole等人，《欧洲儿科神经学杂志(Eur J Paediatr Neurol.)》2001；5：7
‑
10)。所述突变在85％的患者中以纯合方式发现，并且在另外15％的患者中作为杂合突变与另一个等位基因上的点突变组合发现。预测外显子丢失会产生移码突变，导致活性丧失或降低的截短的蛋白质产物(Lerner等人，《细胞(Cell)》1995年9月22日；82(6)：949
‑
57；Kitzm
ü
ller等人，《人类分子遗传学》2008年1月15日；17(2)：303
‑
12)。在最初的研究中，Cotman等人证明了CLN3
Δex7/8
小鼠模型成功地概括了CLN3疾病的若干个方面。CLN3
Δex7/8
动物在不同时间点在神经系统中积累自发荧光储存材料和ATP合酶亚单位C，并且在10个月大时开始在脑中展现出星形胶质细胞反应性。随后的研究详述了小脑中谷氨酸受体功能的改变，与加速旋转棒测定中的运动缺陷相对应(Cotman等人，《人类分子遗传学》2002；11(22)：2709
‑
2721)。在行为方面，Cln3
Δex7/8
小鼠已经在年轻和成熟时间点进行了表征，其中在初生的和年轻成年小鼠中观察到神经发育运动迟缓，并且在10个月到12个月大时观察到步态和后肢紧扣的缺陷(Cotman等人，《人类分子遗传学》2002；11(22)：2709
‑
2721；Os
ó
rio等人，《基因大脑和行为(Genes Brain Behav.)》2009年4月；8(3)：337
‑
345)。CLN3
Δex7/8
小鼠似乎没有显现出功能性视觉障碍，但与12个月大的小鼠对照相比存在轻微的存活缺陷(Cotman等人，《人类分子遗传学》2002；11(22)：2709
‑
2721；Seigel等人，《分子和细胞神经科学(Mol Cell Neurosci.)》2002年4月；19(4)：515
‑
27)。总之，携带最常见人类突变的Cln3
Δex7/8
小鼠模型展现出与CLN3
‑
巴藤病一致的许多细胞和行为变化，使其成为用于测试疗法的合适模型。
[0010]因此，本领域仍然有治疗CLN3
‑
巴藤病的需求。

技术实现思路

[0011]本文提供了使用重组AAV进行CLN3基因疗法的方法和产品。
[0012]本文提供了编码CLN3多肽的重组腺相关病毒9(rAAV9)，其包括rAAV9基因组，所述rAAV9基因组以5
′
到3
′
的顺序包括：P546启动子和编码所述CLN3多肽的多核苷酸。在一些实施例中，所述rAAV9基因组包括自身互补型基因组。在一些实施例中，所述rAAV9基因组包括单链基因组。
[0013]提供了自身互补型重组腺相关病毒9(scAAV9)，其编码SEQ ID NO：1中所示的CLN3多肽，其中所述scAAV9的基因组以5
′
到3
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种编码CLN3多肽的自身互补型重组腺相关病毒9(scAAV9)，其包括scAAV9基因组，所述scAAV9基因组以5'到3'的顺序包括：包括SEQ ID NO:3的核苷酸序列的P546启动子；以及编码SEQ ID NO:1的所述CLN3多肽的多核苷酸。2.根据权利要求1所述的scAAV9，其中所述scAAV9基因组以5'到3'的顺序包括：包括SEQ ID NO:3的核苷酸序列的P546启动子；SV40内含子；以及编码SEQ ID NO:1的所述CLN3多肽的多核苷酸。3.根据权利要求1所述的scAAV9，其中所述scAAV9基因组以5'到3'的顺序包括：包括SEQ ID NO:3的序列的P546启动子；编码SEQ ID NO:1的所述CLN3多肽的多核苷酸；以及牛生长激素多腺苷酸化polyA序列。4.根据权利要求1到3中任一项所述的scAAV9，其进一步包括两个AAV末端反向重复序列。5.根据权利要求1到4中任一项所述的scAAV9，其中编码所述CLN3多肽的所述多核苷酸包括与SEQ ID NO:2至少90％相同的序列。6.根据权利要求1到4中任一项所述的scAAV9，其中编码所述CLN3多肽的所述多核苷酸包括SEQ ID NO:2的核酸序列。7.根据权利要求1到6中任一项所述的scAAV9，其中所述scAAV9基因组包括与SEQ ID NO:4至少90％相同的核酸序列8.根据权利要求1到6中任一项所述的scAAV9，其中所述scAAV9基因组包括与SEQ ID NO:4至少95％相同的核酸序列。9.根据权利要求1到6中任一项所述的scAAV9，其中所述scAAV9基因组包括SEQ ID NO:4的核酸序列。10.根据权利要求1到9中任一项所述的scAAV9，其中所述AAV末端反向重复序列是AAV2末端反向重复序列。11.根据权利要求1到10中任一项所述的scAAV9，其中所述rAAV9基因组包括单链基因组。12.一种核酸分子，其包括：第一AAV末端反向重复序列；包括SEQ ID NO:3的序列的P546启动子；编码SEQ ID NO:1的CLN3多肽的核酸序列；以及第二末端反向重复序列。13.根据权利要求12所述的核酸分子，其包括：第一AAV末端反向重复序列；包括SEQ ID NO:3的核苷酸序列的P546启动子；SV40内含子；编码SEQ ID NO:1的所述CLN3多肽的核酸序列；以及第二AAV末端反向重复序列。14.根据权利要求12所述的核酸分子，其包括第一AAV末端反向重复序列；包括SEQ ID NO:3的核苷酸序列的P546启动子；编码SEQ ID NO:1的所述CLN3多肽的核酸；牛生长激素多腺苷酸化polyA序列；以及第二AAV末端反向重复序列。15.根据权利要求12到14中任一项所述的核酸分子，其中编码所述CLN3多肽的所述核酸包括与SEQ ID NO:2至少90％相同的序列。16.根据权利要求12到14中任一项所述的核酸分子，其中编码所述CLN3多肽的所述核酸包括SEQ ID NO:2的核酸序列。17.根据权利要求12到16中任一项所述的核酸分子，其包括与SEQ ID NO:4的核酸序列至少90％相同的核酸序列
18.根据权利要求12到16中任一项所述的核酸分子，其包括与SEQ ID NO:4的核酸序列至少95％相同的核酸序列。19.根据权利要求12到17中任一项所述的核酸分子，其包括SEQ ID NO:4的核酸序列。20.根据权利要求15到20中任一项所述的核酸分子，其中所述AAV末端反向重复序列是AAV2末端反向重复序列。21.一种自身互补型重组腺相关病毒9(scAAV9)，其包括根据权利要求12到20中任一项所述的核酸分子。22.根据权利要求21所述的scAAV9，其中所述scAAV9包括单链基因组。23.一种rAAV颗粒，其包括根据权利要求12到20中任一项所述的核酸分子。24.根据权利要求23所述的rAAV颗粒，其中所述rAAV颗粒包括单链基因组。25.一种编码CLN3多肽的重组腺相关病毒9(rAAV9)病毒颗粒，其包括rAAV9基因组，所述rAAV9基因组以5'到3'的顺序包括：P546启动子和编码所述CLN3多肽的多核苷酸。26.根据权利要求25所述的rAAV9病毒颗粒，其中所述rAAV9基因组包括自身互补型基因组。27.根据权利要求25所述的rAAV9病毒颗粒，其中所述rAAV9基因组包括单链基因组。28.根据权利要求25到27中任一项所述的rAAV9病毒颗粒，其中所述rAAV9基因组以5'到3'的顺序包括：第一AAV末端反向重复序列；所述P546启动子；编码所述CLN3多肽的所述多核苷酸；以及第二AAV末端反向重复序列。29.根据权利要求25到28中任一项所述的rAAV9病毒颗粒，其中所述P546启动子包括与SEQ ID NO:3的核酸序列至少90％相同的序列。30.根据权利要求25到29中任一项所述的rAAV9病毒颗粒，其中所述CLN3多肽包括与SEQ ID NO:1的核酸序列至少90％相同的序列。31.根据权利要求25到30中任一项所述的rAAV9病毒颗粒，其中编码所述CLN3多肽的所述多核苷酸包括与SEQ ID NO:2的核酸序列至少90％相同的序列。32.根据权利要求25到31中任一项所述的rAAV9病毒颗粒，其中所述rAAV9基因组包括与SEQ ID NO:4的核酸序列至少90％相同的序列。33.根据权利要求25到31中任一项所述的rAAV9病毒颗粒，其中所述rAAV9基因组包括与SEQ ID NO:4的核酸序列至少95％相同的序列。34.根据权利要求28到33中任一项所述的rAAV9病毒颗粒，其中所述AAV末端反向重复序列是AAV2末端反向重复序列。35.根据权利要求25到34中任一项所述的rAAV9病毒颗粒，其中所述rAAV9基因组进一步包括SV40内含子。36.根据权利要求25到35中任一项所述的rAAV9病毒颗粒，其中所述rAAV9基因组进一步包括BGH poly
‑
A序列。37.一种核酸分子，其包括rAAV9基因组，所述rAAV9基因组以5'到3'的顺序包括：第一AAV末端反向重复序列；P546启动子；编码CLN3多肽的多核苷酸；以及第二AAV末端反向重复序列。38.根据权利要求37所述的核酸分子，其中所述rAAV9包括自身互补型基因组。39.根据权利要求37所述的核酸分子，其中所述rAAV9包括单链基因组。
40.根据权利要求37到39中任一项所述的核酸分子，其中所述rAAV...

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：俄亥俄州创新基金会，
类型：发明
国别省市：