【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及通过将dna质粒和其他载体非内吞的递送至供体细胞中来制备治疗性细胞外囊泡(ev)，特别是外泌体的方法，所述ev包含功能性信使rna(mrna)、microrna(mir)、短发夹rna(shrna)、蛋白质和其他生物分子，其方式是由递送引起的强烈刺激触发供体细胞在细胞内产生大量的囊泡，而dna质粒和载体的非内吞递送会引起细胞质内快速rna转录和蛋白质翻译，使这些功能性生物分子在作为ev从供体细胞分泌出来前内源性地封装在囊泡中。
技术介绍
1、细胞外囊泡(extracellular vesicle，ev)包括外泌体、微囊泡和其他囊泡，可由多种细胞分泌。在人体中，1ml血液中有>10e12个ev，它们也存在于其他体液中。外泌体为一种纳米囊泡(40-150nm)，而微囊泡的大小为<100nm至>1微米不等。它们包含编码和非编码rna及其片段、dna片段、蛋白质和其他与细胞有关的生物分子。ev及它们的生物分子内容物已被提出作为疾病诊断的生物标记。此外，它们对于肿瘤微环境和循环中的细胞间通讯也具有重要意义。
...【技术保护点】
1.一种大量制备含有高拷贝功能性核酸和其他生物分子的治疗性细胞外囊泡(EV)的方法，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述纳米通道的直径在50-900nm之间。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述质粒和载体转录mRNA、microRNA、shRNA和其他RNA，和引起蛋白质和其他生物分子在转染细胞中的翻译。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述由转染细胞分泌的多个EV包含转录的mRNA、microRNA、shRNA和其他RNA、和翻译的蛋白质和其他生物分子。
5.根据前述权利要求中任一...
【技术特征摘要】
1.一种大量制备含有高拷贝功能性核酸和其他生物分子的治疗性细胞外囊泡(ev)的方法，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述纳米通道的直径在50-900nm之间。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述质粒和载体转录mrna、microrna、shrna和其他rna，和引起蛋白质和其他生物分子在转染细胞中的翻译。
4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述由转染细胞分泌的多个ev包含转录的mrna、microrna、shrna和其他rna、和翻译的蛋白质和其他生物分子。
5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将增强热休克蛋白和其他促进转染细胞中的囊泡形成和胞吐作用的蛋白的表达的方式添加到系统中；其中所述方式包括细胞的热休克处理，或在细胞培养基中添加热休克蛋白。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将增强促进转染细胞外泌体形成的蛋白的表达的方式添加到系统中；其中所述方式包括共转染cd63、cd9和其他dna质粒。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将多个dna质粒和其他载体连续地递送至转染细胞，以促进rna/蛋白质靶标的共定位和ev分泌。
8.根据前述权利要求中任一项所...
【专利技术属性】
技术研发人员：L·J·李，J·施，Z·杨，
申请(专利权)人：俄亥俄州创新基金会，
类型：发明
国别省市：
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