一种高谷氨酸驴胶原活性肽的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种高谷氨酸驴胶原活性肽的应用，属于功能产品开发技术领域。本发明专利技术采用复合酶解、亲和柱层析的方法从驴胶原蛋白中分离获得高谷氨酸驴胶原活性肽，相对于甘氨酸，谷氨酸的比例达50～75％，具有强金属螯合能力，对亚铁离子的螯合活性为4.7～32.8μg/mg，对钙离子的螯合活性为0.9～24.6μg/mg，对锌离子的螯合活性为1.2～23.2μg/mg。通过将驴胶原活性肽与金属离子螯合，得到了一种驴胶原肽铁螯合物，其对缺铁性贫血具有明显的改善作用，同时可增强机体免疫水平。本发明专利技术制备得到的高谷氨酸驴胶原活性肽可以用于生产保健品、食品及药品，营养价值高，具有补血益气、滋阴润燥、抗衰老、增强免疫力等多种功效，为促进传统驴胶原产品的多样化及品质提升开辟了新途径。途径。途径。

【技术实现步骤摘要】
一种高谷氨酸驴胶原活性肽的应用


[0001]本专利技术涉及一种高谷氨酸驴胶原活性肽的应用，属于功能产品开发


技术介绍

[0002]人体的生长代谢与各种必需元素的存在息息相关，元素摄入的不足、过量或不平衡都会不同程度地引起机体生理功能的异常或发生疾病。近年来，包括硫酸亚铁、碳酸钙、和氯化锌在内的无机金属盐成为常见的元素补充剂。然而，这些无机金属补充剂往往会在碱性肠环境中形成不溶物，严重影响人体的吸收利用率。研究人员一直在探求副作用小、生物利用率高的钙、铁、锌等营养强化剂。继以乳酸亚铁、葡萄糖酸锌为例的第二代有机金属补铁剂之后，出现的第三代氨基酸金属元素补充剂，如甘氨酸亚铁。它们稳定性好、可以增加矿物质在肠中的溶解度，被认为可潜在的促进金属离子的吸收，提高其生物利用度。但是，这些氨基酸螯合物成本高昂，并且会引起脂肪氧化具有副作用，功效不够明显。与氨基酸相比，肽的生物效价和营养价值比单一氨基酸更高。肽可以通过细胞旁路通道转运到肠上皮细胞中，不需要消耗能量，更易被机体吸收。肽可作为金属离子的运载体，与金属离子形成螯合物，充当保护金属离子的作用，同时促进金属离子的吸收。金属肽螯合物可避免直接吸收无机离子对胃肠道造成的损伤，同时保持金属离子的生理活性，增强钙、铁、锌离子的生物利用度。
[0003]肽的金属结合活性会受到蛋白酶的种类、肽的分子量、氨基酸组成和特定氨基酸含量的影响。谷氨酸作为二元羧基酸性氨基酸，富有螯合基团，具有较强的金属螯合活性，且可以保护肝脏，改善智力发育，两者的反应比甘氨酸与金属离子的螯合反应更加复杂。葛重宇等采用全自动氨基酸分析仪分别测定了18家企业阿胶中17种氨基酸的含量，结果显示，不同企业阿胶中各种氨基酸的含量有一定的差异，但均以甘氨酸含量最高、脯氨酸次之；其中相对于甘氨酸，谷氨酸的含量为37％～42％(葛重宇,庞慧,李楠,郑洁,何昌隆,杨欢,沈玉萍.18家企业阿胶中氨基酸的含量分析与比较研究[J].中国药房,2017,28(01):122
‑
126.)。
[0004]目前本领域现有技术中，对驴胶原肽生产加工仅仅是通过酶解和根据分子量大小进行超滤截留分离不同的肽段，即将胶原水解成小分子肽，以利于消化吸收，但所得肽含量低且功能性没有明显提高。专利CN 107904274 A提供了一种阿胶活性肽的制备方法，认为1000～2000Da的肽发挥主要活性作用。但单纯的肽不具备补血功效，从中药配位学说的角度看，忽视了传统阿胶以混合膳食(如阿胶糕)的形式服用，其在消化过程中肽与金属离子的协同作用。

技术实现思路

[0005]针对目前存在的问题，本专利采用复合酶解和柱层析的方法，分离得到高谷氨酸驴胶原活性肽，氨基酸组成中，相对甘氨酸，谷氨酸的含量可达50～75％，肽含量达95～99％，具有强二价金属螯合能力，且在改善贫血、钙缺失、补充微量元素、提高机体免疫等方
面发挥优良功效。
[0006]本专利技术的目的在于提供一种高谷氨酸驴胶原活性肽、高谷氨酸驴胶原活性肽的制备方法及由此制备得到的驴胶原多肽金属螯合物，及其在改善贫血、元素补充和提高机体免疫方面的应用。为提高驴产业的经济价值、产品营养利用率、资源合理利用和开发新型膳食补充剂方面提供理论支持。
[0007]本专利技术提供了一种驴胶原蛋白肽，在所述驴胶原蛋白肽中，谷氨酸的含量为50～75％，相对分子质量为180～2000Da的肽占总驴胶原蛋白肽含量的70％以上，肽含量为95～99％。
[0008]本专利技术提供了制备权利要求1所述驴胶原蛋白肽的方法，包括以下步骤：
[0009](1)酶解消化：选用驴源性胶原蛋白，采用复合酶解技术进行体外消化，灭酶，离心后取上清液即为胶原多肽酶解液；
[0010](2)分离制备：将胶原多肽酶解液经过柱层析、洗脱液洗脱，分离出不同吸附强度的组分，收集吸附力强的肽组分，纳滤浓缩脱盐、冷冻干燥得到高谷氨酸驴胶原蛋白肽。
[0011]在一种实施方式中，步骤(1)所述的驴源性胶原蛋白为阿胶、驴皮、驴骨、驴蹄中的一种或多种。
[0012]在一种实施方式中，步骤(1)所述的复合酶解技术，为选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶中的两种或多种进行酶解。
[0013]在一种实施方式中，当所述酶为木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶时，采用分步酶解：酶解底物的浓度为5～10％，先向酶解体系中加入终浓度为1000～5000U/mL的木瓜蛋白酶，保持pH为7.0～9.0、温度40～60℃，酶解2～4h，再向酶解体系中加入终浓度为500～3000U/mL的碱性蛋白酶，保持pH为9.0～12.0、温度40～60℃，酶解2～4h。
[0014]在一种实施方式中，当所述酶为胃蛋白酶和胰蛋白酶时，采用分步酶解：酶解底物的浓度为5～10％，向酶解体系中加入终浓度为1000～3000U/mL的胃蛋白酶，保持pH为2.5～3.5、温度30～40℃，酶解2～4h，再向酶解体系中加入终浓度为300～600U/mL的胰蛋白酶，保持pH为6.0～8.0、温度30～40℃，酶解2～4h。
[0015]在一种实施方式中，当所述酶为中性蛋白酶和碱性蛋白酶时，采用分步酶解：酶解底物的浓度为5～10％，向酶解体系中加入终浓度为1000～3000U/mL的中性蛋白酶，保持pH为6.0～8.0、温度40～50℃，酶解2～4h，再向酶解体系中加入终浓度为2000～4000U/mL的碱性蛋白酶，保持pH为8.0～10.0、温度40～50℃，酶解2～4h。
[0016]在一种实施方式中，步骤(1)所述的灭酶温度为90～100℃，灭酶时间3～15min；所述的离心转速为6000～10000r/min，离心时间为1～30min。
[0017]在一种实施方式中，步骤(2)所述的柱层析，利用固定化金属亲和层析，介质基础包括琼脂糖、壳聚糖、葡聚糖。
[0018]在一种实施方式中，使用40％～80％的二甲基亚砜为洗涤剂，环氧氯丙烷为活化剂，活化温度为30～60℃，活化时间2～4h；亚氨基二乙酸为接枝配基，接枝温度50～70℃，时间8～16h。
[0019]在一种实施方式中，步骤(2)中所述分离出不同吸附强度的组分，收集吸附力强的肽组分具体为：先用缓冲液A洗脱至基线平稳，然后用缓冲液B(0.02mol/L磷酸氢二钠、0.05mol/L NaCl)洗脱强亲和能力的部分，即为吸附力强的肽组分。
[0020]在一种实施方式中，所述缓冲液A包含0.05
‑
0.1mol/L乙酸钠，0.05
‑
0.1mol/L NaCl。
[0021]在一种实施方式中，所述缓冲液B包含0.02
‑
0.1mol/L磷酸氢二钠、0.05
‑
0.1mol/L NaCl。
[0022]本专利技术提供了利用所述驴胶原肽制备得到的驴胶原肽金属螯合物，将驴胶原肽与金属离子螯合得到驴胶原肽金属螯合物。
[0023]本专利技术提供了制备本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种驴胶原蛋白肽，其特征在于，在所述驴胶原蛋白肽中，相对于甘氨酸，谷氨酸的含量为50～75％，相对分子质量为180～2000Da的肽占总驴胶原蛋白肽含量的70％以上，肽含量为95～99％。2.制备权利要求1所述驴胶原蛋白肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)酶解消化：选用驴源性胶原蛋白，采用复合酶解技术进行体外消化，灭酶，离心后取上清液即为胶原多肽酶解液；(2)分离制备：将胶原多肽酶解液经过柱层析、洗脱液洗脱，分离出不同吸附强度的组分，收集吸附力强的肽组分，纳滤浓缩脱盐、冷冻干燥得到高谷氨酸驴胶原蛋白肽。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的驴源性胶原蛋白为阿胶、驴皮、驴骨、驴牙、驴蹄中的一种或多种。4.利用权利要求1所述驴胶原肽制备得到的驴胶原肽金属螯合物，其特征在于，将所述驴胶原肽与金属离子螯合得到驴胶原肽金属螯合物。5.制备权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：成向荣，曹丛丛，管玲娟，毛嘉敏，程昱瑶，马家辉，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：