一种从鲈鱼中提取活性蛋白肽的制备方法技术

本发明专利技术涉及生物酶解提取技术领域，尤其涉及一种从鲈鱼中提取活性蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：S1.原料处理：将鲈鱼的鱼皮剪去并将与鱼皮粘连的鱼肉也一同刮擦除去后洗净、剪碎，冷冻干燥后备用；S2.浸泡：将步骤S1处理后的鱼皮浸泡在质量浓度为5％～10％的氯化纳或碳酸钠溶液中，搅拌过滤后蒸馏水水洗，重复若干次；S3.酶解：将步骤S2得到的鱼皮加入蒸馏水，用碱性蛋白酶水解提取胶原蛋白肽，酶解温度为45℃～65℃，酶解时间为4h～5h，通过碱性蛋白酶酶解鲈鱼鱼皮制备胶原蛋白肽，通过控制酶解过程中的温度、时间、pH、加酶量和料液比5个因素对肽得率的影响，获得了制备鲈鱼皮胶原蛋白肽的最佳工艺条件，有效的提高了胶原蛋白肽的得率。肽的得率。肽的得率。

【技术实现步骤摘要】
一种从鲈鱼中提取活性蛋白肽的制备方法


[0001]本专利技术涉及生物酶解提取
，尤其涉及一种从鲈鱼中提取活性蛋白肽的制备方法。

技术介绍

[0002]胶原蛋白是一种生物性高分子物质，具有多种生物功能是动物结缔组织中扮演结合组织的角色。胶原蛋白是生物科技产业最具关键性的原材料之一，也是需求量十分庞大的最佳医用、保湿、修复、延缓衰老、营养等材料。是维持皮肤与组织器官形态、结构的主要成分，也是修复各损伤组织的重要原料物质。
[0003]过去获取天然胶原蛋白及其胶原肽的主要途径来源于畜禽动物皮组织，但由于相关畜类疾病和某些宗教信仰，也存在感染疯牛病和其它相关疾病的可能而限制了人们对陆生哺乳动物胶原蛋白及其制品的使用。现今正在逐步转向鱼类皮、鳞等胶原蛋白肽的方法，鱼胶原蛋白在一些方面明显优于陆生动物的胶原蛋白，比如具有低抗原性、低过敏性等特性，可能逐步替代陆生动物胶原蛋白。
[0004]世界上鲈鱼广泛运用于加工成各种水产制品，但是鱼皮处于加工后废弃物或低端水产制品处理，易造成资源浪费与环境污染，但鲈鱼的胶原蛋白含量并不低，所以如何实现鲈鱼中提取活性蛋白肽是一个有待解决的问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题克服现有的缺陷，提供一种从鲈鱼中提取活性蛋白肽的制备方法。
[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了如下的技术方案：一种从鲈鱼中提取活性蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
[0007]S1.原料处理：将鲈鱼的鱼皮剪去并将与鱼皮粘连的鱼肉也一同刮擦除去后洗净、剪碎，冷冻干燥后备用；
[0008]S2.浸泡：将步骤S1处理后的鱼皮浸泡在质量浓度为5％～10％的氯化纳或碳酸钠溶液中，搅拌过滤后蒸馏水水洗，重复若干次；
[0009]S3.酶解：将步骤S2得到的鱼皮加入蒸馏水，用碱性蛋白酶水解提取胶原蛋白肽，酶解温度为45℃～65℃，酶解时间为4h～5h，加酶量为6000U/g～ 10000U/g，料液比为1：(10～30)，通过添加调节液控制PH为8～11；
[0010]S4.灭酶：酶解结束后沸水浴加热，使酶失活；
[0011]S5.离心：离心得上清液即为胶原蛋白肽液；
[0012]S6.干燥：得鱼鳞胶原蛋白肽粉；
[0013]S7.煅烧：将步骤S5沉淀所得的残渣干燥、粉碎后置于马弗炉中在600～ 900℃煅烧0.5～1h，得到羟基磷灰石。
[0014]作为优选，在S5.离心和S6.干燥之间还设有S8.超滤：将离心得到的上清液进行超
滤分离，通过分子量≤10kDa的超滤膜，分离得到胶原蛋白肽液。
[0015]作为优选，所述步骤S3中酶解温度为60℃，酶解时间为3h，加酶量为 4800U/g，料液比为0.8：10，控制PH为8-9。
[0016]作为优选，步骤S3中PH调节液为0.01mol/LHCL或0.01mol/LNaOH溶液。
[0017]作为优选，步骤S5中离心时间10min，离心过程的转速为8000rpm。
[0018]作为优选，所述鲈鱼为河鲈、大口黑鲈和华鲈。
[0019]作为优选，所述碱性蛋白酶具体为以下至少一种的蛋白酶：真菌蛋白酶、细菌蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、组织蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶。
[0020]本专利技术有益效果：本专利技术提取工艺简单，通过对提取工艺条件的优化，鲈鱼皮胶原蛋白肽的得率高。通过碱性蛋白酶酶解鲈鱼鱼皮制备胶原蛋白肽，通过控制酶解过程中的温度、时间、pH、加酶量和料液比5个因素对肽得率的影响，获得了制备鲈鱼皮胶原蛋白肽的最佳工艺条件，有效的提高了胶原蛋白肽的得率。
附图说明
[0021]图1是酶解温度对肽得率的影响；
[0022]图2是酶解时间对肽得率的影响；
[0023]图3是酶解pH对肽得率的影响；
[0024]图4是加酶量对肽得率的影响；
[0025]图5是料液比对肽得率的影响；
[0026]图6是不同分子量胶原蛋白多肽对O2-的清除作用比较；
[0027]图7是不同分子量胶原蛋白多肽对羟自由基(
·
OH)的清除作用比较；
[0028]图8是不同分子量胶原蛋白多肽对二苯代苦味酰基自由基(DPPH
·
)的清除作用比较。
[0029]具体实施方式
[0030]以下对本专利技术的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0031]S1.原料处理：将鲈鱼皮剪去并将与鱼皮粘连的鱼肉也一同刮擦除去后洗净、剪碎，冷冻干燥后备用。
[0032]S2.浸泡：将步骤S1处理后的鱼皮浸泡在质量浓度为5％～10％的氯化纳或碳酸钠溶液中，连接搅拌6h，过滤后蒸馏水水洗，重复3次。通过该步骤，可去除鱼皮中的非胶原蛋白。
[0033]S3.酶解：将步骤S2得到的鱼皮加入蒸馏水，用碱性蛋白酶水解提取胶原蛋白肽，酶解温度为45℃～65℃，酶解时间为4h～5h，加酶量为6000U/g～10000U/g，料液比为1：(10～30)，通过添加调节液控制PH为8～11。PH调节液为0.01mol/LHCL或0.01mol/LNaOH溶液。
[0034]S4.灭酶：酶解结束后沸水浴加热10min，使酶失活。
[0035]S5.离心：离心10min，转速8000rpm，制得上清液即为粗提取的胶原蛋白肽液。
[0036]S6.超滤：将离心得到的上清涂进行超滤分离，通过分子量≤10kDa的超滤膜，分离
得到胶原蛋白肽液。
[0037]S7.将步骤S6得到的胶原蛋白肽液冻干得到胶原蛋白肽粉末。
[0038]通过上述方法制备得到胶原蛋白肽液及胶原蛋白肽粉末。通过单因素及正交实验考察酶解温度、酶解时间、酶解pH、酶活、液料比对肽得率的影响。
[0039]一、单因素试验
[0040]1、酶解温度鲈鱼皮胶原蛋白肽制备的影响
[0041]固定液料比1:10，调节pH值为9.0(调节液为0.01mol/LHCl或 0.01mol/LNaOH溶液)，酶活4000U/g，酶解时间4h，分别在45℃、50℃、55℃、 60℃和65℃的温度条件下水解4h提取胶原蛋白肽。测定不同温度条件下的胶原蛋白肽得率，结果如图1所示。
[0042]从图1中可知，酶解温度对酶促反应速度具有两重影响，在同一时间条件下，伴随温度的升高，肽得率呈现先增加后下降的波动趋势，在45～50℃的温度范围内，反应温度的升高促使酶促反应速度加快，能高效酶解鲈鱼的鱼皮，在50℃时酶解程度达到最高。反应温度的升高也会导致酶的变性反应加剧，酶活下降使得酶解反应的水解度不断下降，因此当温度高于50℃时水解度开始下降，胶原蛋白肽得率降低。终上，最佳酶解温度为50℃。
[0043]2、酶解时间对鲈鱼皮胶原蛋白肽制备的影响
[0044]固定液料比1:10，调节酶解本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从鲈鱼中提取活性蛋白肽的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：S1.原料处理：将鲈鱼的鱼皮剪去并将与鱼皮粘连的鱼肉也一同刮擦除去后洗净、剪碎，冷冻干燥后备用；S2.浸泡：将步骤S1处理后的鱼皮浸泡在质量浓度为5％～10％的氯化纳或碳酸钠溶液中，搅拌过滤后蒸馏水水洗，重复若干次；S3.酶解：将步骤S2得到的鱼皮加入蒸馏水，用碱性蛋白酶水解提取胶原蛋白肽，酶解温度为45℃～65℃，酶解时间为4h～5h，加酶量为6000U/g～10000U/g，料液比为1：(10～30)，通过添加调节液控制PH为8～11；S4.灭酶：酶解结束后沸水浴加热，使酶失活；S5.离心：离心得上清液即为胶原蛋白肽液；S6.干燥：得鱼鳞胶原蛋白肽粉；S7.煅烧：将步骤S5沉淀所得的残渣干燥、粉碎后置于马弗炉中在600～900℃煅烧0.5～1h，得到羟基磷灰石。2.根据权利要求1所述的从鲈鱼中提取活性蛋白肽的制备方法，其特征在于：在S5.离心和S6.干燥之间还设有S8.超滤：...

【专利技术属性】
技术研发人员：付明龙，
申请(专利权)人：禾光堂生物科技无锡有限公司，
类型：发明
国别省市：