靶向EGFR的免疫缀合物制造技术

本发明专利技术提供了式(I)的免疫缀合物：

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶向EGFR的免疫缀合物相关申请的交叉引用本专利申请要求2018年8月29日提交的美国临时专利申请第62/724,550号的权益，所述美国临时专利申请通过引用以其整体并入本文。以电子方式提交的材料通过引用并入通过引用以其整体并入本文的是随本文同时提交的并且如下确定的计算机可读的核苷酸/氨基酸序列表：创建于2019年8月22日的名称为“744859_ST25.txt”的一份5,795字节ASCII(文本)文件。专利技术背景现在已充分认识到，肿瘤生长需要获得促进免疫逃避的突变。即使如此，肿瘤发生导致突变的抗原或新抗原的积累，所述突变的抗原或新抗原在离体刺激后容易被宿主免疫系统识别。开始阐明为什么免疫系统不能识别新抗原以及免疫系统如何无法识别新抗原。Carmi等人的开创性研究(Nature,521:99-104(2015))已经表明，可以通过经由抗体-肿瘤免疫复合物将新抗原递送至活化的树突状细胞来克服免疫忽视。在这些研究中，经由瘤内注射同时递送肿瘤结合抗体和树突状细胞佐剂导致稳健的抗肿瘤免疫。需要用于递送抗体和树突状细胞佐剂的新的组合物和方法，以便到达难以接近的肿瘤和/或扩大癌症患者和其它对象的治疗选择。本专利技术提供了这样的组合物和方法。
技术实现思路
本专利技术提供了下式的免疫缀合物：或其药学上可接受的盐，其中下标r是1至10的整数，下标n是约2至约50的整数，“Adj”是佐剂部分，以及“Ab”是具有结合表皮生长因子受体(“EGFR”)的抗原结合结构域的抗体构建体。本专利技术还提供了下式的免疫缀合物：或其药学上可接受的盐，其中下标r是1至10的整数，下标n是约2至约50的整数，以及“Ab”是具有结合EGFR的抗原结合结构域的抗体构建体。本专利技术提供了包含多种本文所述的免疫缀合物的组合物。本专利技术提供了用于治疗和/或治愈对象中的癌症的方法，其包括向有需要的对象施用治疗有效量的本文所述的免疫缀合物或组合物。附图简述图1是肿瘤体积相对于天数的图，其说明了本专利技术的免疫缀合物能够充当有效的抗肿瘤治疗，如通过治疗结肠直肠癌的人类肿瘤模型COLO205所表现出的。图2是肿瘤体积相对于天数的图，其说明了本专利技术的免疫缀合物能够充当有效的抗肿瘤治疗，如通过治疗肺腺癌的人类肿瘤模型HCC827所表现出的。图3是倍数变化相对于浓度的图，其显示了免疫缀合物1和免疫缀合物2引起骨髓活化，如CD40上调所示。图4是倍数变化相对于浓度的图，其显示了免疫缀合物1和免疫缀合物2引起骨髓活化，如CD86上调所示。图5是倍数变化相对于浓度的图，其显示了免疫缀合物1和免疫缀合物2引起骨髓分化，如CD16下调所示。图6是倍数变化相对于浓度的图，其显示了免疫缀合物1和免疫缀合物2引起骨髓活化，如CD123上调所示。专利技术详述一般性本专利技术提供了下式的免疫缀合物：或其药学上可接受的盐，其中下标r是1至10的整数，下标n是约2至约50的整数，“Adj”是佐剂部分，以及“Ab”是具有结合表皮生长因子受体(“EGFR”)的抗原结合结构域的抗体构建体。与常规抗体缀合物相比，本专利技术的抗体-佐剂免疫缀合物显示出优异的药理学特性，所述抗体-佐剂免疫缀合物包含与佐剂部分连接的抗体构建体，所述抗体构建体具有结合EGFR的抗原结合结构域。基于聚乙二醇的连接物(“PEG连接物”)是优选的连接物，以提供免疫缀合物的充分纯化和分离，保持佐剂部分和抗体构建体的功能，以及产生免疫缀合物的理想药代动力学(“PK”)特性。本专利技术的抗体-佐剂免疫缀合物的另外的实施方案和益处将从本文的描述中显而易见。定义如本文所用，术语“免疫缀合物”是指经由连接物与佐剂部分共价结合的抗体构建体。如本文所用，短语“抗体构建体”是指包含(i)抗原结合结构域和(ii)Fc结构域的抗体或融合蛋白。如本文所用，术语“抗体”是指包含来自特异性结合和识别抗原的免疫球蛋白基因或其片段的抗原结合区(包括互补决定区(CDR))的多肽。公认的免疫球蛋白基因包括k、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因以及许多免疫球蛋白可变区基因。示例性免疫球蛋白(抗体)结构单位包含四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链对组成，每对具有通过二硫键连接的一条“轻链”(约25kDa)和一条“重链”(约50-70kDa)。每条链由称为免疫球蛋白结构域的结构域组成。根据大小和功能将这些结构域分类为不同的类别，例如轻链和重链上的可变结构域或可变区(分别为VL和VH)以及轻链和重链上的恒定结构域或恒定区(分别为CL和CH)。每条链的N末端限定了约100至110个或更多个氨基酸的可变区，称为互补位(paratope)，主要负责抗原识别，即抗原结合位点。轻链被分类为k或λ。重链被分类为γ、μ、α、δ或ε，其依次定义了免疫球蛋白类别，分别为IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。IgG抗体是由四条肽链组成的约150kDa的大分子。IgG抗体含有两条相同的约50kDa的γ类重链和两条相同的约25kDa的轻链，因此是四聚体的四级结构。两条重链通过二硫键彼此连接并且与轻链连接。所得的四聚体具有两个相同的半体(halves)，它们一起形成Y形。叉子的每一端含有相同的抗原结合位点。在人类中有四种IgG亚类(IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)，按照它们在血清中的丰度顺序命名(即IgG1是最丰富的)。通常，抗体的抗原结合区在与癌细胞结合的特异性和亲和力方面是最关键的。抗体可以作为完整的免疫球蛋白或作为通过用各种肽酶消化产生的许多充分表征的片段存在。因此，例如，胃蛋白酶消化铰链区中二硫键下方的抗体以产生F(ab)′2，F(ab)′2是Fab的二聚体，其本身是通过二硫键与VH-CH1连接的轻链。F(ab)′2可以在温和的条件下还原以断裂铰链区中的二硫键，从而将F(ab)′2二聚体转化为Fab′单体。Fab′单体基本上是具有部分铰链区的Fab(参见，例如，FundamentalImmunology(Paul,editor,7thedition,2012))。尽管就完整抗体的消化而言定义了各种抗体片段，但这样的片段可以通过化学方法或通过使用重组DNA方法从头合成。因此，本文使用的术语“抗体”也包括通过修饰完整抗体产生的抗体片段，或使用重组DNA方法从头合成的那些(例如单链Fv)，或使用噬菌体展示文库鉴定的那些(参见，例如McCafferty等人,Nature,348:552-554(1990))。术语“抗体”以最广泛的含义使用，并且具体地涵盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)以及表现出期望生物活性的抗体片段。本文使用的“抗体片段”及其所有语法变体定义为包含完整抗体的抗原结合位点或可变区的完整抗体的一部分，其中该部分不含完整抗体的Fc区的恒定重链结构域(即，CH2、CH3和CH4，取决于抗体同种型)。抗体片段的实例包括Fab、Fab′、Fab′-SH、F(a本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.下式的免疫缀合物：/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180829 US 62/724,5501.下式的免疫缀合物：



或其药学上可接受的盐，其中下标r是1至10的整数，下标n是约2至约50的整数，“Adj”是佐剂部分，以及“Ab”是具有结合EGFR的抗原结合结构域的抗体构建体。


2.如权利要求1所述的免疫缀合物，其中所述佐剂部分是TLR7和/或TLR8激动剂。


3.如权利要求1或2所述的免疫缀合物，其中所述佐剂部分具有下式：



其中
J1是CH或N，
J2是CH、CH2、N、NH、O或S，
Q1具有下式：



T1、T2、T3和RH独立地具有下式：



每个V是任选存在的并且独立地是-O-、-S-、-NH-、-NR-或-CO-，
每个W是任选存在的并且独立地是直链或支链的、饱和或不饱和的二价C1-C8烷基，
每个X是任选存在的并且独立地是一个、两个、三个或四个二价环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，并且当存在多于一个的二价环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基时，所述多于一个的二价环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基被连接或稠合，其中连接的二价环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基通过键或-CO-连接，
每个Y是任选存在的并且独立地是-CO-或者直链或支链的、饱和或不饱和的二价C1-C8烷基，
每个Z是任选存在的并且独立地是-O-、-S-、-NH-或-NR-，
U是任选存在的并且是
每个R独立地是氢、卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、腈、-COOH或者直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烷基，

表示单键或双键，
波浪线表示Q1、T1、T2、T3和RH的连接点，
点(“·”)表示U的连接点，以及
虚线表示所述佐剂部分的连接点。


4.如权利要求3所述的免疫缀合物，其中所述佐剂部分具有下式：



其中
J2是CH2、NH、O或S，
Q1具有下式：



RH具有下式：



每个V是任选存在的并且独立地是-O-、-S-、-NH-、-NR-或-CO-，
每个W是任选存在的并且独立地是直链或支链的、饱和或不饱和的二价C1-C8烷基，
每个X是任选存在的并且独立地是一个、两个、三个或四个二价环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，并且当存在多于一个的二价环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基时，所述多于一个的二价环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基被连接或稠合，其中连接的二价环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基通过键或-CO-连接，
每个Y是任选存在的并且独立地是-CO-或者直链或支链的、饱和或不饱和的二价C1-C8烷基，
每个Z是任选存在的并且独立地是-O-、-S-、-NH-或-NR-，
U是任选存在的并且是
每个R独立地是氢、卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、腈、-COOH或者直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烷基，
波浪线表示Q1和RH的连接点，
点(“·”)表示U的连接点，以及
虚线表示所述佐剂部分的连接点。


5.如权利要求4所述的免疫缀合物，其中所述佐剂部分具有下式：



其中
J2是CH2、NH、O或S，
V是任选存在的并且是-O-、-S-、-NH-、-NR-或-CO-，
X是任选存在的并且是一个、两个、三个或四个二价环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，并且当存在多于一个的二价环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基时，所述多于一个的二价环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基被连接或稠合，其中连接的二价环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基通过键或-CO-连接，
Z是任选存在的并且是-O-、-S-、-NH-或-NR-，
条件是至少存在X或Z，
每个R独立地是氢、卤素(例如，氟、氯、溴或碘)、腈、-COOH或者直链或支链的、饱和或不饱和的C1-C4烷基，
每个n独立地是0至4的整数，以及
虚线表示所述佐剂部分的连...

【专利技术属性】
技术研发人员：迈克尔·N·阿隆索，埃德加·乔治·恩格尔曼，大卫·Y·杰克逊，亚瑟·李，雪莱·艾琳·阿克曼，
申请(专利权)人：博尔特生物治疗药物有限公司，莱兰斯坦福初级大学评议会，
类型：发明
国别省市：美国;US