抗体佐剂缀合物制造技术

本发明专利技术提供了一种免疫缀合物，所述免疫缀合物包含：抗体构建体，所述抗体构建体包含抗原结合结构域和Fc结构域；佐剂部分；以及连接子，其中每个佐剂部分经由所述连接子与所述抗体共价结合。还描述了用本发明专利技术的所述免疫缀合物治疗癌症的方法。物治疗癌症的方法。

【技术实现步骤摘要】
抗体佐剂缀合物
[0001]本申请是申请日为2017年7月7日、申请号为201780042417.6(国际 申请号为PCT/US2017/041268)的专利技术申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及一种抗体佐剂缀合物。

技术介绍

[0003]现在公认的是肿瘤生长需要获得促进免疫逃逸的突变。即使如此，肿 瘤发生会导致突变抗原或新抗原的积累，这些抗原在离体刺激后容易被宿 主免疫系统识别。免疫系统无法识别新抗原的原因和方式开始被阐明。 Carmi等人的开创性研究(Nature，第521卷：第99
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104页，2015年)表 明，经由抗体
‑
肿瘤免疫复合物将新抗原递送至活化的树突细胞可以克服免 疫忽视。在这些研究中，经由肿瘤内注射来同时递送肿瘤结合抗体和树突 细胞佐剂获得了强烈的抗肿瘤免疫。为了达到难以接近的肿瘤并扩大癌症 患者和其他受试者的治疗选择，需要用于递送抗体和树突细胞佐剂的新组 合物和方法。

技术实现思路

[0004]在第一方面，本专利技术提供了一种免疫缀合物，该免疫缀合物包含：(a) 抗体构建体，该抗体构建体包含(i)抗原结合结构域和(ii)Fc结构域；(b)佐 剂部分；以及(c)连接子，其中每个佐剂部分经由连接子与抗体构建体共价 结合。
[0005]在一些实施方案中，该免疫缀合物具有根据式I的结构：
[0006][0007]或其药学上可接受的盐，其中Ab为抗体构建体；A为抗体构建体中未修饰 的氨基酸侧链或抗体构建体中经修饰的氨基酸侧链；Z为连接部分；Adj 为佐剂部分；并且下标r为1至10的整数。
[0008]在相关方面，本专利技术提供了一种包含如本文所述的多个免疫缀合物的 组合物。
[0009]在另一方面，本专利技术提供了一种治疗癌症的方法。该方法包括向对其 有需要的受试者施用治疗有效量的根据本专利技术的免疫缀合物。
附图说明
[0010]当结合附图阅读时，根据以下详细描述可以最好地理解本专利技术。根据 惯例，附图的各种特征不按比例绘制。相反，为了清楚起见，各种特征的 尺寸被任意地扩大或缩小。
[0011]图1示出了官能化佐剂是骨髓细胞活化的有效诱导物。在37℃下，用 10倍系列稀
释的R848、化合物2或对照TLR激动剂刺激外周血抗原呈递 细胞(APC)。18小时后，经由流式细胞术分析细胞。数据表示为每个指示 标记的中值荧光强度；n＝3。
[0012]图2示出了官能化佐剂维持TLR激动剂活性。在融合到NF
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κB和 AP
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1结合位点的IFN
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β最小启动子控制下，HEK293细胞与人TLR7或 TLR8(上部两个图)或者鼠TLR7(下部图)以及诱导型分泌胚胎碱性磷 酸酶报告基因共转染。随后将细胞与2倍系列稀释的指定佐剂在37℃下孵 育12小时。加入碱性磷酸酶底物后，通过分光光度法(OD 650nm)测量活 性。
[0013]图3示出了经由液相色谱
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质谱法(LC
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MS)分析佐剂连接子化合物。
[0014]图4示出了与未缀合的抗体和佐剂相比，抗体
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佐剂缀合物在引发 APC活化方面更为优越，如CD40、CD86和HLA
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DR的表达所示。在CFSE标记的CD19+肿瘤细胞存在下，用利妥昔单抗
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SATA
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SMCC
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化合物 1(缀合的)、单独的利妥昔单抗(Ab)、单独的化合物1或利妥昔单抗+化 合物1(混合物)刺激人APC。18小时后，经由流式细胞术分析CD19
‑
人 APC；n＝3。P值≤0.05以＊表示，P值≤0.01以＊＊表示，P值≤0.001以＊＊＊表 示，P值≤0.0001以＊＊＊＊表示。
[0015]图5示出了与未缀合的抗体和佐剂相比，抗体
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佐剂缀合物诱导较低水 平的PD
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L1在人APC上表达。在CFSE标记的CD19+肿瘤细胞存在下， 用利妥昔单抗
‑
SATA
‑
SMCC
‑
化合物1(缀合的)、单独的利妥昔单抗 (Ab)、单独的化合物1或利妥昔单抗+化合物1(混合物)刺激人APC。18 小时后，经由流式细胞术分析CD19
‑
人APC；n＝3。P值≤0.05以＊表示，P 值≤0.01以＊＊表示，P值≤0.001以＊＊＊表示，P值≤0.0001以＊＊＊＊表示。
[0016]图6示出了抗体
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佐剂缀合物引发DC分化。在CFSE标记的肿瘤细胞 存在下，用2倍系列稀释的利妥昔单抗
‑
SATA
‑
SMCC
‑
化合物1(缀合 的)、单独的利妥昔单抗(Ab)、单独的化合物1或利妥昔单抗+化合物1 (混合物)刺激约95％单核细胞的人APC。18小时后，经由流式细胞术 分析CD19
‑
人APC；n＝3。P值≤0.05以＊表示，P值≤0.01以＊＊表示，P值 ≤0.001以＊＊＊表示，P值≤0.0001以＊＊＊＊表示。
[0017]图7示出了在引发人APC的炎性细胞因子的分泌方面，抗体
‑
佐剂缀 合物优于未缀合的抗体和佐剂的混合物。在固定的CFSE标记的肿瘤细胞 存在下，用2倍系列稀释的利妥昔单抗
‑
SATA
‑
SMCC
‑
化合物1(缀合 的)、单独的利妥昔单抗(Ab)、单独的化合物1或利妥昔单抗+化合物1 (混合物)刺激人APC。18小时后，经由细胞因子微珠阵列分析无细胞上 清液的细胞因子分泌；n＝3。P值≤0.05以＊表示，P值≤0.01以＊＊表示，P值 ≤0.001以＊＊＊表示，P值≤0.0001以＊＊＊＊表示。
[0018]图8A示出了具有可裂解连接子的免疫缀合物引发APC活化和DC分 化。在CFSE标记的肿瘤细胞存在下，用2倍系列稀释的利妥昔单抗
‑ꢀ
SATA
‑
SPDP
‑
化合物1(缀合的，可裂解)、单独的利妥昔单抗(Ab)、单独 的化合物1或利妥昔单抗+化合物1(混合物)刺激约95％单核细胞的人 APC。如MALDI
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TOF所确认，免疫缀合物(AAC
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可裂解)的药物与抗 体比率(DAR)为1.4。18小时后，经由流式细胞术分析CD19
‑
人APC (CD14和CD123)；n＝3。
[0019]图8B示出了具有可裂解连接子的免疫缀合物(AAC)引发APC活化和 DC分化。在CFSE标记的肿瘤细胞存在下，用2倍系列稀释的利妥昔单抗
ꢀ‑
SATA
‑
SPDP
‑
化合物1(缀合的，可裂解)、单独的利妥昔单抗(Ab)、单 独的化合物1或利妥昔单抗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种免疫缀合物，所述免疫缀合物包含：(a)抗体构建体，所述抗体构建体包含(i)抗原结合结构域和(ii)Fc结构域，(b)佐剂部分，其具有下式：其中每个J独立地为氢、OR4或R4；每个R4独立地为氢，或包含1至8个碳的烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、芳烷基或杂芳烷基基团；Q任选地存在并且是包含1至8个碳的烷基、杂烷基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、芳烷基或杂芳烷基基团；以及虚线表示所述佐剂附接至连接子(c)的附接点，以及(c)所述连接子，其中所述佐剂部分经由所述连接子与所述抗体构建体共价结合。2.根据权利要求1所述的免疫缀合物，其中所述抗原结合结构域与选自以下的抗原结合：CDH1、CD19、CD20、CD29、CD30、CD38、CD40、CD47、EpCAM、MUC1、MUC16、EGFR、VEGF、HER2、SLAMF7、PDGFRa、gp75、CTLA4、PD
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1、PD
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L1、PD
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L2、LAG
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3、B7
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H4、KIR、TNFRSF4、OX40L、IDO
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1、IDO
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2、CEACAM1、BTLA、TIM3、A2Ar、VISTA、CLEC4C(BDCA
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2，DLEC，CD303，CLECSF7)、CLEC4D(MCL，CLECSF8)、CLEC4E(Mincle)、CLEC6A(Dectin
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2)、CLEC5A(MDL
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1，CLECSF5)、CLEC1B(CLEC
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2)、CLEC9A(DNGR
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1)和CLEC7A(Dectin
‑
1)。3.根据权利要求1或2所述的免疫缀合物，其中所述抗原结合结构域与EGFR、HER2、PD
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L1、CD20或CD47结合。4.根据权利要求1至3中任一项所述的免疫缀合物，其中所述抗体构建体为抗体。5.根据权利要求4所述的免疫缀合物，其中所述抗体选自派姆单抗、纳武单抗、阿特珠单抗、avelumab、伊匹单抗、奥滨尤妥珠单抗、曲妥珠单抗、西妥昔单抗、利妥昔单抗、帕妥珠单抗、贝伐珠单抗、达雷木单抗、依那西普、奥拉单抗、埃罗妥珠单抗、margetuximab或其生物仿制药。6.根据权利要求4或5所述的免疫缀合物，其中所述抗体为曲妥珠单抗及其生物仿制药。7.根据权利要求4至6中任一项所述的免疫缀合物，其中所述抗体包括修饰的Fc结构域。8.根据权利要求7所述的免疫缀合物，其中(i)所述Fc结构域含有至少一个氨基酸插入、缺失或替代，和/或(ii)所述经修饰的Fc结构域为去糖基化的或非岩藻糖基化的。9.根据权利要求1
‑
8中任一项所述的免疫缀合物，其中所述免疫缀合物具有根据式I的结构：
或其药学上可接受的盐，其中Ab为具有为所述抗体构建体的氨基酸残基的抗体构建体；其中A为所述氨基酸残基中经修饰的或未修饰的侧链；Z为所述连接子；Adj为所述佐剂部分；并且下标r为1至10的整数。10.根据权利要求1
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8中任一项所述的免疫缀合物，其中所述免疫缀合物具有根据式II的结构：或其药学上可接受的盐，其中Ab为具有为所述抗体构建体的氨基酸残基的抗体构建体；其中A为所述氨基酸残基的赖氨酸侧链、硫醇修饰的赖氨酸侧链或半胱氨酸侧链；Adj为所述佐剂部分；下标r为1至10的整数；Z1选自
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【专利技术属性】
技术研发人员：迈克尔，
申请(专利权)人：博尔特生物治疗药物有限公司，
类型：发明
国别省市：