当前位置: 首页 > 专利查询>湖南大学专利>正文

一种免疫药物及其在肿瘤免疫治疗中的应用制造技术

技术编号:29050186 阅读:54 留言:0更新日期:2021-06-26 06:12
本发明专利技术首先提供一种免疫药物,所述免疫药物为包含特异性结合蛋白和核酸适配体的双特异性免疫药物,且二者之间使用直接或间接的方式连接,特异性结合蛋白本身为蛋白质结构,核酸适配体本身为核酸结构,特异性结合蛋白用于与免疫细胞受体或靶细胞受体特异性结合,相应核酸适配体用于与靶细胞受体或免疫细胞受体特异性结合。本发明专利技术还提供一种免疫药物在肿瘤免疫治疗中的应用。本发明专利技术拓宽了免疫治疗药物的类型,由目前的双特异性抗体演化为DNA参与的嵌合形式。本发明专利技术以核酸适配体作为靶细胞识别元件,依靠其靶向范围广,能够程序性组装成纳米结构的优势,实现靶向多种类型的肿瘤细胞,并提升其与肿瘤细胞结合的亲和力和特异性。性。性。

【技术实现步骤摘要】
一种免疫药物及其在肿瘤免疫治疗中的应用


[0001]本专利技术涉及肿瘤免疫治疗药物
,具体提供了一种介导T细胞靶向杀伤肿瘤细胞的新型免疫治疗药物、其制备方法及其在肿瘤免疫治疗中的应用。

技术介绍

[0002]癌症免疫治疗能激活患者的免疫系统,以防止癌症的免疫逃避,在长期减少癌症转移和复发方面有很大的潜力。与传统的化疗或放疗不同,肿瘤免疫治疗在肿瘤治疗中具有更高的选择性和更低的毒性,同时通过免疫记忆提供了长期的免疫。最近研究表明,T细胞可以通过结合肿瘤特异性抗原的双特异性分子来重新定向识别和消除肿瘤。其中由于双特异性T细胞接合(Bispecific T

cell engager,BiTE)抗体介导杀伤时能够绕过MHC限制选择性杀死肿瘤细胞等优势引起了人们的特别关注。BiTE本质为一个多肽链,包含两个不同抗体的单链(sc)Fv结构域,其中一个单链抗体结构域用来识别任何T细胞上表达的CD3e,另一个单链抗体用来结合肿瘤细胞表达的肿瘤相关抗原。尽管它们取得了显著的成功,但由于BiTE属于蛋白类药物,用于治疗不同肿瘤细胞的BiTE必须依靠现有的DNA序列进行基因工程改造,该过程不仅耗时耗力且其稳定性和活性无法得到保证。同时无法快速根据病人实际情况实现定制化医疗。此外,体内是多细胞环境,肿瘤细胞与正常细胞表面分子类型相同,仅有表达量的差异,目前由于BiTE结构组成固定,致使其免疫治疗过程中会杀伤正常细胞,存在一定的副作用。从这个角度来看,核酸适配体(aptamer)可以解决现有BiTE存在的问题。适配体被称为“化学抗体”,因其体积小,易于制备,且具有良好的靶向性,因此被认为是肿瘤靶向治疗的理想选择。以此扩大癌症治疗范围,加快药物生成研发过程。另外核酸适配体还能够依靠碱基互补配对原则与其他DNA在试管中快速组装成DNA纳米结构。DNA纳米结构因其可编程性、易修饰性和高生物相容性广泛应用于生物医学领域。且其不同结构能结合不同数目的核酸适配体,从而能提高肿瘤识别能力,减少免疫治疗副作用。
[0003]因此本领域迫切需要开发出一种利用核酸识别肿瘤细胞表面分子的免疫药物,用于解决现有免疫疗法研发费时费力,治疗对象有限且有副作用的问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术中,用核酸适配体替代目前BiTE中一个抗体结构域用于识别肿瘤细胞表面分子,我们研发得到的抗体

核酸嵌合体作为一种新型双特异性药物能够解决现有技术中的问题。
[0005]因此,本专利技术首先提供一种免疫药物,所述免疫药物为包含特异性结合蛋白(11)和核酸适配体(12)的双特异性免疫药物(1),且特异性结合蛋白(11)和核酸适配体(12)之间使用直接或间接的方式连接,所述特异性结合蛋白(11)本身为蛋白质结构,所述核酸适配体(12)本身为核酸结构,所述特异性结合蛋白(11)用于与免疫细胞受体或靶细胞受体特异性结合,相应地,所述核酸适配体(12)用于与靶细胞受体或免疫细胞受体特异性结合。
[0006]在一种具体的实施方式中,所述特异性结合蛋白(11)和核酸适配体(12)之间连接
有共价连接蛋白(13)和共价连接DNA(14),所述共价连接蛋白(13)与特异性结合蛋白(11)连接,所述共价连接DNA(14)直接或间接与核酸适配体(12)连接,且共价连接蛋白(13)和共价连接DNA(14)之间共价结合。
[0007]在一种具体的实施方式中,所述共价连接DNA(14)与核酸适配体(12)之间还连接有连接结构,所述连接结构同样由核苷酸构成。
[0008]在一种具体的实施方式中,所述共价连接蛋白(13)为HUH家族蛋白,优选DCV蛋白。
[0009]在一种具体的实施方式中,所述免疫药物中含有一个核酸适配体(12)或多个相同或不同的核酸适配体(12),优选所述免疫药物中含有3~100个相同或不同的核酸适配体。
[0010]在一种具体的实施方式中,所述特异性结合蛋白(11)为αCD3。
[0011]在一种具体的实施方式中,所述核酸适配体(12)为sgc8、TE02、SYL3C、MUC1以及C

MET中的一种或多种。
[0012]在一种具体的实施方式中,所述共价连接DNA(14)的序列为aagtattaccagaaa。
[0013]本专利技术还提供一种如上所述免疫药物在肿瘤免疫治疗中的应用。
[0014]在一种具体的实施方式中,所述免疫药物在体内靶向抑制肿瘤细胞生长。
[0015]本专利技术还提供一种免疫药物的制备方法,所述免疫药物为包含特异性结合蛋白(11)和核酸适配体(12)的双特异性免疫药物(1),且特异性结合蛋白(11)和核酸适配体(12)之间间接连接,所述特异性结合蛋白(11)本身为蛋白质结构,所述核酸适配体(12)本身为核酸结构,所述特异性结合蛋白(11)用于与免疫细胞受体或靶细胞受体特异性结合,相应地,所述核酸适配体(12)用于与靶细胞受体或免疫细胞受体特异性结合;所述特异性结合蛋白(11)和核酸适配体(12)之间连接有共价连接蛋白(13)和共价连接DNA(14),所述共价连接蛋白(13)与特异性结合蛋白(11)直接或间接连接,所述共价连接DNA(14)直接或间接与核酸适配体(12)连接,且共价连接蛋白(13)和共价连接DNA(14)之间共价结合;所述制备方法包括如下步骤,
[0016]步骤A:制备得到含有所述特异性结合蛋白(11)和共价连接蛋白(13)的融合蛋白;
[0017]步骤B:制备得到含有所述核酸适配体(12)和共价连接DNA(14)的核酸结构;
[0018]步骤A和步骤B可以同时进行或者任意先后;
[0019]步骤C:将步骤A制备得到的融合蛋白和步骤B得到的核酸结构共同孵育,使得其中的共价连接蛋白(13)和共价连接DNA(14)共价结合,得到所述免疫药物。
[0020]在一种具体的实施方式中,首先全基因合成所述融合蛋白的核酸序列并构建重组质粒,再通过大肠杆菌原核表达有活性的融合蛋白。
[0021]在一种具体的实施方式中,步骤A后,还包括纯化所得的融合蛋白。
[0022]在一种具体的实施方式中,步骤B中,所述核酸结构还包括用于连接核酸适配体(12)和共价连接DNA(14)的连接结构,所述连接结构同样由核苷酸构成。
[0023]在一种具体的实施方式中,所述核酸结构包括单链适配体、Y型DNA纳米粒子和树枝状DNA纳米粒子中的任意一种,其中所述单链适配体中包含1个核酸适配体(12),所述Y型DNA纳米粒子中包含2个核酸适配体(12),所述树枝状DNA纳米粒子中包含3~100个核酸适配体(12),所述Y型DNA纳米粒子和所述树枝状DNA纳米粒子中包含的核酸适配体(12)均相同或不同。
[0024]在一种具体的实施方式中,通过无酶自组装过程制备Y型DNA纳米粒子,通过聚合
链式反应体外合成所述树枝状DNA纳米粒子。
[0025]在一种具体的实施方式中,所述孵育方本文档来自技高网
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种免疫药物,所述免疫药物为包含特异性结合蛋白(11)和核酸适配体(12)的双特异性免疫药物(1),且特异性结合蛋白(11)和核酸适配体(12)之间使用直接或间接的方式连接,所述特异性结合蛋白(11)本身为蛋白质结构,所述核酸适配体(12)本身为核酸结构,所述特异性结合蛋白(11)用于与免疫细胞受体或靶细胞受体特异性结合,相应地,所述核酸适配体(12)用于与靶细胞受体或免疫细胞受体特异性结合。2.根据权利要求1所述的免疫药物,其特征在于,所述特异性结合蛋白(11)和核酸适配体(12)之间连接有共价连接蛋白(13)和共价连接DNA(14),所述共价连接蛋白(13)与特异性结合蛋白(11)连接,所述共价连接DNA(14)直接或间接与核酸适配体(12)连接,且共价连接蛋白(13)和共价连接DNA(14)之间共价结合。3.根据权利要求2所述的免疫药物,其特征在于,所述共价连接DNA(14)与核酸适配体(12)之间还连接有连接结构,所述连接结...

【专利技术属性】
技术研发人员:聂舟唐瑞魏平付禹豪
申请(专利权)人:湖南大学
类型:发明
国别省市:

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1