用于多特异性抗体递送的细胞膜包覆型纳米适配子及应用制造技术

技术编号:32029120 阅读:8 留言:0更新日期:2022-01-27 12:47
本发明专利技术涉及一种用于多特异性抗体递送的细胞膜包覆型纳米适配子及应用。所述细胞膜包覆型纳米适配子包括纳米颗粒和包覆所述纳米颗粒的细胞膜,所述细胞膜为表达FcγR的细胞膜,所述FcγR能与所递送的特异性抗体结合,所述特异性抗体具有一种或多种。本发明专利技术的细胞膜包覆型纳米适配子可以快速、高效、可控地定向结合两种以上特异性抗体,生物相容性和靶向性好,制备简便,可以应用于为包括肿瘤、自身免疫疾病等多种疾病制备免疫治疗药物中,具有巨大的临床应用潜能。的临床应用潜能。

【技术实现步骤摘要】
用于多特异性抗体递送的细胞膜包覆型纳米适配子及应用


[0001]本专利技术涉及医药
,特别是涉及一种用于多特异性抗体递送的细胞膜包覆型纳米适配子及应用。

技术介绍

[0002]从90年代起,单克隆抗体已经成为临床以及商业上成功的药物品类,可以用于多种疾病治疗,如肿瘤、炎症以及自身免疫疾病等。
[0003]单克隆抗体与其他小分子药物等相比,更具有特异性高、依从性好等特点。临床上已经发展了超过550种抗体,据预测到2020大约有70种单克隆抗体将进入市场治疗各种疾病。虽然单克隆抗体类药物展现了巨大的商业价值和广阔的临床应用前景,但是其中很多单克隆抗体存在临床响应率低、毒副作用大等问题。
[0004]为了进一步提高抗体药物的临床应用率,双特异性抗体/多特异性抗体被开发出来用于克服单克隆抗体不足的问题。双特异性抗体具有两个或者多个抗原结合片段,可以桥连效应细胞和靶细胞,也可以作用于多个靶标等,在治疗上既可以提高响应率,又可以降低毒副作用。例如,2014年FDA批准用于B细胞前体急性淋巴性白血病治疗的Blinatumomab是一种CD19/CD3双特异性抗体,其能够同时结合B淋巴母细胞表面的CD19和T细胞表面的CD3,桥接两种细胞同时激活T细胞杀伤肿瘤细胞。到目前为止,已有20多个不同的商业化技术平台可用于双特异性抗体的创建和开发,2种双特异性抗体已上市,超过85种用于临床发展。双特异性抗体/多特异性抗体在显著增效的同时也存在一些问题,生产过程复杂且成本高、对病灶部位主动靶向差等。

技术实现思路

[0005]基于此,本专利技术的目的是提供一种可以快速、高效、可控地定向结合两种以上特异性抗体的细胞膜包覆型纳米抗体递送平台(以下称为纳米适配子)。
[0006]具体技术方案如下:
[0007]一种用于多特异性抗体递送的细胞膜包覆型纳米适配子(Cell membrane

based nanoparticles,CMNP),其包括纳米颗粒和包覆所述纳米颗粒的细胞膜,所述细胞膜为表达FcγR的细胞膜(Cell membrane,CM),所述FcγR能与所递送的特异性抗体结合,所述特异性抗体具有一种或多种。
[0008]本专利技术的另一目的是提供一种上述纳米适配子的制备方法,包括以下步骤:
[0009](1)制备表达FcγR的细胞膜,再进行超声,得到表达FcγR的细胞膜囊泡;
[0010](2)将步骤(1)所述细胞膜囊泡(Cell membrane vesicles,CMV)与所述纳米颗粒混合,得到细胞膜包覆型纳米适配子。
[0011]本专利技术的另一目的是提供一种多特异性抗体递送系统(CMNP

IgG),包括上述的细胞膜包覆型纳米适配子,以及特异性抗体。
[0012]本专利技术的另一目的是提供一种所述多特异性抗体递送系统的制备方法,包括以下
步骤:将上述的细胞膜包覆型纳米适配子与所述特异性抗体混合。
[0013]本专利技术的再一目的是提供一种上述的细胞膜包覆型纳米适配子或多特异性抗体递送系统在制备免疫治疗药物中的应用。
[0014]与现有技术相比,本专利技术具有以下有益效果:
[0015]本专利技术首次构建得到一种通用型的细胞膜包覆型纳米抗体递送平台(纳米适配子),其保留有结合抗体的天然连接基团FcγR,可以快速、高效、可控地定向结合于1种或多种类型的治疗性单克隆抗体的Fc段,从而实现了纳米抗体的多价态、多特异性、多功能的特点,并具有良好的生物相容性和靶向性。本专利技术首次将这种细胞膜包覆型纳米抗体递送平台创造性地应用于为包括肿瘤、自身免疫疾病等多种疾病制备免疫治疗药物中,具有巨大的临床应用潜能。
[0016]本专利技术所述的细胞膜包覆型纳米抗体递送平台是通过受体配体相互作用的方式结合抗体,其不影响抗体药物Fab段的结构和功能,制备简便,为联合抗体治疗的发展提供了一种全新思路的简便结构设计。
附图说明
[0017]图1为流式表征IFN

γ处理的RAW264.7细胞以及293T

FcγRI细胞的FcγRI表达情况;
[0018]图2为RAW264.7细胞膜囊泡(RAW264.7@CMV)以及293T

FcγRI细胞膜囊泡(293T

FcγRI@CMV)粒径以及分散情况;
[0019]图3为NP
PLGA
以及CMNP
PLGA
的粒径以及分散情况;
[0020]图4为NP
PCL
以及CMNP
PCL
的粒径以及分散情况;
[0021]图5为NP
PEG

PCL
以及CMNP
PEG

PCL
的粒径以及分散情况;
[0022]图6为NP
PEG

PLA
以及CMNP
PEG

PLA
的粒径以及分散情况;
[0023]图7为NP
PEG

PLGA
以及CMNP
PEG

PLGA
的粒径以及分散情况;
[0024]图8为CMNP的电镜观察结构;
[0025]图9为共聚焦观测CMNP的功能性细胞膜的包覆情况;
[0026]图10为CMNP上细胞膜蛋白以及功能性蛋白的表征(A、SDS

PAGE电泳分析NP
PLGA
、细胞膜以及CMNP的蛋白表达情况;B、Western blot检测细胞、细胞膜以及CMNP的功能性蛋白CD64(FcγRI)的表达情况);
[0027]图11为CMNP稳定性表征;
[0028]图12为CMNP与治疗性抗体结合的粒径以及分散情况;
[0029]图13为CMNP与治疗性抗体结合比例表征;
[0030]图14为激光共聚焦观察CMNP(αPD

1&αPD

L1)促进肿瘤细胞和T细胞相互作用观察图;
[0031]图15为Hoechst 33342释放法检测CMNP(αPD

1&αPD

L1)促进T细胞杀伤肿瘤细胞。
具体实施方式
[0032]本专利技术下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂,均为市售产品。
[0033]除非另有定义,本专利技术所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不用于限制本专利技术。
[0034]本专利技术的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形,意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步本文档来自技高网
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于多特异性抗体递送的细胞膜包覆型纳米适配子,其特征在于,其包括纳米颗粒和包覆所述纳米颗粒的细胞膜,所述细胞膜为表达FcγR的细胞膜,所述FcγR能与所递送的特异性抗体结合,所述特异性抗体具有一种或多种。2.根据权利要求1所述的细胞膜包覆型纳米适配子,其特征在于,所递送的特异性抗体与所述FcγR所识别的Fc段具有相同的种属来源;和/或,所述FcγR能与所递送的特异性抗体的Fc段结合。3.根据权利要求1所述的细胞膜包覆型纳米适配子,其特征在于,所述FcγR包括亚型FcγRI、FcγR
Ⅱ‑
A、FcγR
Ⅱ‑
B2、FcγR
Ⅱ‑
B1或FcγRⅢ。4.根据权利要求1~3任一项所述的细胞膜包覆型纳米适配子,其特征在于,所述表达FcγR的细胞膜为表达FcγR的免疫细胞膜或表达FcγR的非免疫细胞膜。5.根据权利要求4所述的细胞膜包覆型纳米适配子,其特征在于,所述表达FcγR的免疫细胞膜源自经细胞因子刺激后表达FcγR的免疫细胞,所述免疫细胞膜优选为巨噬细胞膜;和/或,所述表达FcγR的非免疫细胞膜源自通过表达FcγR的病毒或质粒转染后表达FcγR的非免疫细胞。6.根据权利要求1~3任一项所述的细胞膜包覆型纳米适配子,其特征在于,所述纳米颗粒为聚合物纳米颗粒;所述聚合物纳米颗粒优选为聚酯纳米颗粒。7.根据权利要求6所述的细胞膜包覆型纳米适配子,其特征在于,所述聚酯纳米颗粒的聚酯为脂肪族聚酯或聚乙二醇修饰的脂肪族聚酯;所述脂肪族聚酯优选为聚丙交酯、聚乙交酯、聚(乙交酯

co

丙交酯)和聚己内酯中的至少一种;所述聚乙二醇修饰的脂肪族聚酯优选为聚乙二醇修饰的聚丙交酯、聚乙二醇修饰的聚乙交酯、聚乙二醇修饰的聚(乙...

【专利技术属性】
技术研发人员:王均罗英丽许从飞沈松黄华曹志婷
申请(专利权)人:华南理工大学
类型:发明
国别省市:

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