用于治疗实体癌症和微生物感染的方法和组合物技术

本发明专利技术提供了包含编码细胞因子信号传导抑制因子4（SOCS4）或其功能性片段的外源性多聚核苷酸片段的重组病毒，其中一旦在细胞中复制该重组病毒表达SOCS4或该功能性片段。本发明专利技术还提供了重组溶瘤病毒用于制备癌症的治疗药物和病毒感染的副作用的治疗药物的应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗实体癌症和微生物感染的方法和组合物
本专利技术涉及用于治疗微生物感染和实体癌症的方法和组合物，并且尤其涉及表达SOCS4的重组病毒及其使用方法。
技术介绍
HSV-1感染包括呼吸道在内的各种各样的粘膜组织，并且已经报道的是HSV-1诱导的肺炎是由于炎症反应而不是病毒本身的直接细胞病理效应。这种不受控的炎症反应是促炎性细胞因子的过量释放的结果，这被称为“细胞因子风暴”，其最初被用于描述流感诱导的细胞因子在短时间内过量产生，其与不受控的促炎性反应和重要的免疫病理学以及严重疾病的结局相联系。不幸的是，对参与细胞因子风暴的分子、细胞因子对发病机制的贡献、以及预防或减轻症状的治疗策略的了解仍然是不足的。被基因工程化来选择性地在癌细胞中复制并杀死癌细胞的溶瘤病毒（OV），代表了抗肿瘤治疗的新方法。由于其基于机制的选择性、对于调节肿瘤细胞死亡的潜力以及在肿瘤位点表达额外的治疗性转基因的可能性，所以该方法是尤其具有吸引力的。考虑到溶瘤病毒被设计用于瘤内注射的事实，这种独特的癌症疗法通常与宿主的抗肿瘤免疫（免疫病毒疗法，immunovirotherapy）相结合。基于溶瘤HSV（oHSV）的1型单纯疱疹病毒（HSV-1），talimogenelaherparepvec（T-VEC,Imlygic）是FDA首次批准的OV。如其他OV候选者一样，针对oHSV的宿主反应是复杂的、多方面的、并且通过宿主免疫力和肿瘤微环境进行调节；此外，各种免疫和炎症反应可以既是有利的又是有害的，并且通过OV递送至特定器官（例如肺）诱导的细胞因子风暴是日益被认识到的损害之一。细胞因子风暴伴随的肺损伤的进展随后已经在各种病毒、细菌或真菌感染中被报道。一致的观察表明，细胞因子风暴的概念是更加复杂的，但当前对促进细胞因子风暴的机制的了解仍然有限，并且对控制在适当细胞因子释放和细胞因子过量产生之间的平衡的对策仍然相对未开发。
技术实现思路
本专利技术的第一个方面涉及包含编码细胞因子信号传导抑制因子4（SOCS4）或其功能性片段的外源性多聚核苷酸片段的重组病毒，其中一旦在细胞中复制，该重组病毒表达SOCS4或该功能性片段。在一些实施方式中，重组病毒是携带编码细胞因子信号传导抑制因子4（SOCS4）或其功能性片段的外源性多聚核苷酸片段的重组溶瘤病毒，并且该病毒在其中复制的细胞是肿瘤细胞。在一些实施方式中，重组病毒是携带编码细胞因子信号传导抑制因子4（SOCS4）或其功能性片段的外源性多聚核苷酸片段的重组病毒载体，并且该病毒在其中复制的细胞是正常细胞。本专利技术的另一方面涉及用于在对象中治疗癌症或者用于在对象中减少或消除溶瘤病毒疗法的副作用的方法，其包含向该对象施用治疗上有效量的重组溶瘤病毒，其中该重组溶瘤病毒包含编码细胞因子信号传导抑制因子4（SOCS4）或其功能性片段的外源性多聚核苷酸片段，并且一旦在癌细胞复制，该重组溶瘤病毒表达SOCS4或该功能性片段。本专利技术的另外的方面涉及用于在对象中减少或消除微生物感染治疗的副作用的方法，其包含向该对象施用治疗上有效量的重组病毒载体，该载体包含编码细胞因子信号传导抑制因子4（SOCS4）或其功能性片段的外源性多聚核苷酸片段，其中一旦在正常细胞复制，该重组病毒表达SOCS4或该功能性片段。在本专利技术中，我们已经构建了具有SOCS4蛋白插入片段（proteininsert）的HSV株（HSV-SOCS4）以研究其在控制对细胞因子风暴的诱导中的影响。本专利技术研究了几种起关键作用的代表性细胞因子，包括MCP-1、IL-1β、TNF-α、IL-6和IFN-γ，并且发现在被HSV-SOCS4感染的小鼠中的它们的浓度远低于在被HSV-1(F)感染的小鼠中的浓度，并且HSV-SOCS4小鼠示出轻微肺损伤、体重减轻较少以及100%的存活率。本专利技术提供了调控由溶瘤病毒疗法诱导的细胞因子风暴的有前景的技术方案。从下文的本专利技术的详细阐述中，本专利技术的其他方面将是容易知道的。附图说明图1：HSV-SOCS4重构的示意图。（A）将经确认的SOCS4基因连接到在ClaI/AccI和NotI处的pNEWUL骨架位点。（B）从pNEWUL中切割在pNEWUL骨架的BglII和PacI之间的序列（包括UL3、UL4和SOCS4），并在相同位点将其克隆到质粒Pko5.1中。图2：HSV-SOCS4重构的PCR确认。（A）条带1示出来自pReveiver-M02的SOCS4（1397bp）的PCR产物。（B）从重构病毒中提取DNA以进行PCR用于最终的确认，在1000bp至2000bp之间的条带示出了：UL49（1492bp）、UL3（1319bp）和SOCS4（1397bp）。图3：在来自被PBS、HSV-1-F或HSV-SOCS4感染的小鼠的BALF中的细胞因子产量。在感染后第1、3和7天收集来自小鼠（n=6）的BALF以进行ELISA测定。（A）在整个三天的时间里，与从HSV-SOCS4小鼠中检测到MCP-1的浓度相比，从HSV-1-F小鼠中检测到的显著更高浓度的MCP-1。HSV-1-F小鼠的MCP-1产量在第7天下降，但在HSV-SOCS4小鼠中仅示出可忽略的差异。（B）与HSV-SOCS4小鼠相比，在第1天和第3天观察到HSV-1-F小鼠中的IL-1β水平升高，但在第7天没有观察到。HSV-1-F小鼠的IL-1β的产量示出上升趋势-下降趋势曲线。（C）在HSV-1-F小鼠和HSV-SOCS4小鼠之间的TNF-α水平差异明显，并且HSV-1-F小鼠中测试到的最高的TNF-α水平是在第1天，然后其下降。（D）在第1、3和7天，与从HSV-1-F小鼠中测试到的IL-6水平相比，从HSV-SOCS4小鼠中测试到明显更低水平的IL-6，并且对于两组来说在第7天均增加了产量。（E）HSV-1-F小鼠的IFN-γ产量远高于来自HSV-SOCS4小鼠的IFN-γ产量，并且其在第3天增加并在第7天保持在高水平。作为阴性对照的模拟小鼠（NC）没有诱导可评估数量的细胞因子。*表示p值＜0.05。图4：在来自被PBS、HSV-1-F或HSV-SOCS4感染的小鼠血清中的细胞因子的产量。在感染后第1、3和7天收集来自每只小鼠的血清以进行ELISA测定。（A）在第1天，与从HSV-SOCS4小鼠中检测到的MCP-1的浓度相比，从HSV-1-F小鼠中检测到显著更高浓度的MCP-1，并且HSV-1-F小鼠中的其产量连续地下降，但HSV-SOCS4小鼠中其仅在第7天下降。（B）HSV-1-F和HSV-SOCS4小鼠的IL-1β值在第1天和第3天是相似的，但HSV-1-F小鼠在第7天示出了强烈的上调，因此发现了在两组小鼠之间的极大的差异。（C）HSV-1-F小鼠和HSV-SOCS4小鼠之间的TNF-α水平差异是明显的，并且在第7天示出HSV-1-F小鼠的TNF-α水平最高。（D）在整个三天时间里，与从HSV-1-F小鼠中测试到的IL-6水平相比，从HSV-SOCS4小鼠中测试到明显更低水平的IL-6。HSV-1-F小鼠中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组病毒，其包含编码细胞因子信号传导抑制因子4（SOCS4）或其功能性片段的外源性多聚核苷酸片段；其中一旦在细胞中复制，所述重组病毒表达SOCS4或所述功能性片段。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种重组病毒，其包含编码细胞因子信号传导抑制因子4（SOCS4）或其功能性片段的外源性多聚核苷酸片段；其中一旦在细胞中复制，所述重组病毒表达SOCS4或所述功能性片段。


2.如权利要求1所述的重组病毒，其中所述病毒是溶瘤病毒或病毒载体。


3.如权利要求2所述的重组病毒，其中所述溶瘤病毒是溶瘤1型单纯疱疹病毒（oHSV-1）。


4.如权利要求3所述的重组病毒，其中所述外源性多聚核苷酸片段位于oHSV-1的UL3和UL4基因之间。


5.如权利要求2所述的重组病毒，其中所述病毒载体来源于逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、单纯疱疹病毒、牛痘病毒、或杆状病毒。


6.如权利要求1所述的重组病毒，其中所述细胞是癌细胞。


7.如权利要求6所述的重组病毒，其中所述癌细胞是食道癌细胞、肺癌细胞、前列腺癌细胞、或膀胱癌细胞。


8.如权利要求1至7中任一项所述的重组病毒，其中所述SOCS4来自智人，其GenBank登记号为NC_000014.9，或与其有至少80%同一性的序列。


9.如权利要求1至8中任一项所述的重组病毒，其中所述病毒包含编码免疫刺激剂和/或免疫治疗剂的另外的外源性多聚核苷酸片段。


10.一种药物组合物，其包含权利要求1至9中任一项所述的重组病毒，以及药学上可接受的载体。


11.一种用于在对象中治疗癌症的方法，其包含向所述对象施用治疗上有效量的重组溶瘤病毒，其中所述重组溶瘤病毒包含编码细胞因子信号传导抑制因子4（SOCS4）或其功能性片段的外源性多聚核苷酸片段；并且一旦在癌细胞中复制，所述重组溶瘤病毒表达SOCS4或所述功能性片段。


12.如权利要求11所述的方法，其中所述溶瘤病毒是溶瘤1型单纯疱疹病毒（oHSV-1）。


13.如权利要求11或12所述的方法，其中所述癌细胞是食道癌细胞、肺癌细胞、前列腺癌细胞或膀胱癌细胞。


14.如权利要求11至13中任一项所述的方法，其中SOCS4来自智人，其GenBank登记号为NC_000014.9，或与其有至少80%同一性的序列。


15.如权利要求11至14中任一项所...

【专利技术属性】
技术研发人员：周国瑛，陈晓庆，
申请(专利权)人：深圳市亦诺微医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44