【技术实现步骤摘要】
一种绿色荧光蛋白标记重组虹彩病毒的构建及其应用
本专利技术涉及生物
技术介绍
随着经济的高速发展，人们的生活水平逐步提高，高蛋白的水产品的需求也日益增加。水产业规模的扩大越来越受到环境和养殖技术的制约，特别是由病毒引发的大规模病害，造成了巨大的经济损失。虹彩病毒(SGIV)是一种对经济鱼类具有致命感染力的病毒，也是近年来多次引发养殖动物大量死亡的元凶之一，其免疫机制的研究已取得了较多的进展。但要真正了解清楚SGIV的致病机理以及防治方法，仍然需要对病毒的感染过程中的细节进行更深入的探究。
技术实现思路
在本项目的重组虹彩病毒中，绿色荧光蛋白成功标记上了病毒的部分主要衣壳蛋白，该重组病毒不仅能使受感染的细胞在荧光显微镜下呈现绿色，而且其在石斑鱼体内能正常地进行感染和复制，对受感染的血细胞进行通过流式分选分析，检测到绿色荧光信号。该病毒的成功构建使得人们可以实时观察虹彩病毒感染宿主的全过程，是探索虹彩病毒与宿主相互作用的一种有效工具。本专利技术所采取的技术方案是：本专利技术以...
【技术保护点】
1.绿色荧光蛋白标记重组虹彩病毒的构建方法，其特征在于，采用同源重组的原理将eGFP和Flag标签插入到石斑鱼虹彩病毒的主要衣壳蛋白的C端。/n
【技术特征摘要】
1.绿色荧光蛋白标记重组虹彩病毒的构建方法，其特征在于，采用同源重组的原理将eGFP和Flag标签插入到石斑鱼虹彩病毒的主要衣壳蛋白的C端。
2.根据权利要求1所述的绿色荧光蛋白标记重组虹彩病毒的构建方法，其特征在于包括步骤：
1)构建重组质粒，选择石斑鱼虹彩病毒的ORF72R基因作为插入位点，重组质粒中含有与eGFP和Flag标签融合的ORF72R基因；
2)重组质粒通过脂质体转染法进入处于生长对数期的石斑鱼胚胎干细胞，然后对所述石斑鱼胚胎干细胞接种野生型虹彩病毒；
3)收集受感染的细胞，筛选出带有绿色荧光的细胞，提取细胞内病毒即为绿色荧光蛋白标记重组虹彩病毒。
3.根据权...
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