用于脑肿瘤治疗的溶瘤性I型单纯疱疹病毒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于脑肿瘤治疗的经基因工程化的溶瘤性HSV

【技术实现步骤摘要】
用于脑肿瘤治疗的溶瘤性I型单纯疱疹病毒
[0001]本申请为2022年01月05日进入中国国家阶段、申请号为202180004408.4、申请日为2021年12月03日、专利技术名称为“用于脑肿瘤治疗的溶瘤性I型单纯疱疹病毒”的专利技术专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及一种用于肿瘤治疗的溶瘤病毒，特别是涉及一种用于脑肿瘤治疗的基因工程化的溶瘤性I型单纯疱疹病毒(oHSV
‑
1)。本专利技术还涉及使用本文公开的重组溶瘤性病毒治疗脑肿瘤的方法、及其药物组合物和应用。

技术介绍

[0003]脑的原发性肿瘤由中枢神经系统中的不同类型的细胞产生。成神经管细胞瘤(Medulloblastoma)衍生自神经元细胞的前体，而星形细胞瘤(astrocytoma)衍生自神经胶质细胞的星形细胞亚群，少突神经胶质瘤衍生自神经胶质细胞的少突神经胶质前体亚群。其它类型的原发性肿瘤衍生自形成脑的内衬和外衬的细胞，例如分别来自室管膜细胞的室管膜瘤和来自包含脑膜的细胞的脑膜瘤。衍生自星形胶质细胞的多形性胶质母细胞瘤(GBM)是最常见和最致命的原发性脑肿瘤，因此被归类为WHO IV级星形细胞瘤。
[0004]目前恶性多形性胶质母细胞瘤(GBM)的治疗方案是肿瘤切除，然后是化疗和放疗。尽管溶瘤性单纯疱疹病毒(oHSV)在GBM的临床试验中已被证明是安全的，但其功效并不理想，主要是由于肿瘤切除后病毒传播不足。多形性胶质母细胞瘤(GBM)是成人中最常见的脑肿瘤，尽管在分子理解方面取得了巨大进步，但它仍然是最难治疗的恶性肿瘤之一。尽管GBM肿瘤切除是一种重要的治疗干预措施，但肿瘤切除后放射和替莫唑胺(temozolomide)化疗的标准治疗仅提供不太多的临床益处。因此，迫切需要开发能够在肿瘤减瘤(debulking)后直接施用到GBM肿瘤切除腔中的新型局部疗法。
[0005]先前的研究试图使用临床批准的Gliadel晶片(含有化学治疗剂BCNU的聚酐晶片)在切除的GBM的腔中进行局部治疗，其显示出有限的治疗效果。在持续寻找能够消除肿瘤切除后此类肿瘤残留物的疗法的过程中，溶瘤病毒在临床前研究中显示出巨大的潜力。这些病毒通常是基因工程化的，以便仅在肿瘤细胞中复制并杀死肿瘤细胞，这种方法非常适合活跃增殖的肿瘤细胞位于非增殖或缓慢增殖的正常细胞的脑中。在治疗性病毒中，oHSV是最有希望用于GBM治疗的候选病毒之一，因为其是一种固有的嗜神经病毒，并且其溶瘤作用不太依赖于特定的宿主细胞受体、突变或细胞内途径。此外，oHSV具有经过充分研究的基因组和用于插入另外的治疗基因以进一步增强其溶瘤效力的重要的转基因能力。尽管迄今为止针对GBM进行的I期和Ib期oHSV临床试验已显示出抗肿瘤活性的迹象，但临床反应率并不理想。
[0006]专利技术概述专利技术人惊奇地发现，与现有的oHSV
‑
1病毒相比，缺失两份拷贝的γ34.5基因和反向内部重复区的oHSV
‑
1，在针对脑肿瘤方面，相对于非脑肿瘤而言，具有出乎意料地优越的
抗肿瘤活性。
[0007]一方面，本文提供了一种包含经修饰的基因组的溶瘤性I型单纯疱疹病毒(oHSV
‑
1)，其中所述修饰包含：(a)基因组的末端重复序列中的γ34.5基因的拷贝的改变，使得γ34.5基因的所述拷贝不能表达功能性ICP34.5蛋白，以及(b)基因组的内部反向重复区的缺失，使得双拷贝基因中的每一个的一份拷贝和内部反向重复区内的重复的非编码序列的一份拷贝缺失，其中所述双拷贝基因包含编码ICP0、ICP4、ICP34.5、ORF P和ORF O的基因，以及其中基因组的U
L
和U
S
成分中的所有单拷贝基因都是完整的，使得所有单拷贝基因能够表达各自的功能性蛋白。
[0008]在一些实施方案中，改变包含γ34.5基因的拷贝的全部或部分的编码区或调节区的缺失。
[0009]在一些实施方案中，重复的非编码序列包括ICP0的内含子、LAT结构域和“a”序列。
[0010]在一些实施方案中，U
L
和U
S
成分中的所有单拷贝基因包括U
L
成分中的U
L
1至U
L
56基因和U
S
成分中的U
S
1至U
S
12基因。
[0011]在一些实施方案中，oHSV
‑
1选自F毒株、KOS毒株和17毒株。在一些实施方案中，内部反向重复区的缺失导致F毒株的基因组中核苷酸117005至132096的切除。
[0012]在一些实施方案中，oHSV
‑
1具有原型(P)的基因组异构体并且缺失从U
L
成分中最后一个基因(例如U
L
56)的终止密码子开始至U
S
成分中第一个基因(例如U
S
1)的启动子的内部反向重复区。
[0013]在一些实施方案中，将编码免疫刺激剂和/或免疫治疗剂的异源性核酸序列并入oHSV
‑
1，其中所述并入不干扰HSV
‑
1基因组的天然基因的表达。在一些实施方案中，将编码免疫刺激剂和免疫治疗剂的异源性核酸序列并入oHSV
‑
1。
[0014]在一些实施方案中，免疫刺激剂选自GM
‑
CSF、IL
‑
2、IL
‑
12、IL
‑
15、IL
‑
24和IL
‑
27。在一些实施方案中，免疫刺激剂是IL
‑
12。
[0015]在一些实施方案中，免疫治疗剂是抗PD
‑
1剂、抗CTLA
‑
4剂或两者。在一些实施方案中，免疫治疗剂是抗PD
‑
1剂。在一些实施方案中，抗PD
‑
1剂包括抗PD
‑
1抗体或其抗原结合片段，例如Fab、scFv、(scFv)2、Fab'或F(ab')2。在一些实施方案中，抗CTLA
‑
4剂包括抗CTLA
‑
4抗体或其抗原结合片段，例如Fab、scFv、(scFv)2、Fab'或F(ab')2。在一些实施方案中，抗PD
‑
1抗体或抗CDLA
‑
4抗体包括经修饰的抗体形式，包括抗体药物偶联物(ADC)、双特异性抗体和纳米抗体(或VHH)。
[0016]在一些实施方案中，异源性核酸序列被并入内部反向重复区和/或U
L
成分中的U
L
3和U
L
4基因之间。
[0017]在一些实施方案中，将编码IL
‑
12和抗PD
‑
1剂的异源性核酸序列并入oHSV
‑
1。在一些实施方案中，编码IL
‑
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种溶瘤性I型单纯疱疹病毒(oHSV
‑
1)，其包含经修饰的基因组，其中所述修饰包含a)基因组的末端重复序列中的γ34.5基因的拷贝的改变，使得γ34.5基因的所述拷贝不能表达功能性ICP34.5蛋白，以及b)基因组的内部反向重复区的缺失，使得双拷贝基因中的每一个的一份拷贝和内部反向重复区内的重复的非编码序列的一份拷贝缺失，其中所述双拷贝基因包含编码ICP0、ICP4、ICP34.5、ORF P和ORF O的基因，以及其中基因组的U
L
和U
S
成分中的所有单拷贝基因都是完整的，使得所有单拷贝基因能够表达各自的功能性蛋白。2.根据权利要求1所述的oHSV
‑
1，其中所述改变包含γ34.5基因的所述拷贝的全部或部分的编码区或调节区的缺失。3.根据权利要求1所述的oHSV
‑
1，其中所述重复的非编码序列包括ICP0的内含子、LAT结构域和“a”序列。4.根据权利要求1所述的oHSV
‑
1，其中U
L
和U
S
成分中的所有单拷贝基因包括U
L
成分中的U
L
1至U
L
56基因和U
S
成分中的U
S
1至U
S
12基因。5.根据权利要求1至4中任一项所述的oHSV
‑
1，其中HSV
‑
1选自F毒株、KOS毒株和17毒株。6.根据权利要求1至4中任一项所述的oHSV
‑
1，其中HSV
‑
1具有原型(P)的基因组异构体。7.根据权利要求1至4中任一项所述的oHSV
‑
1，其中所述内部反向重复区的缺失导致F毒株的基因组中核苷酸117005至132096的切除。8.根据权利要求6所述的oHSV
‑
1，其中所述内部反向重复区的缺失从U
L
成分中最后一个基因的终止密码子开始至U
S
成分中第一个基因的启动子。9.根据权利要求8所述的oHSV
‑
1，其中U
L
成分中最后一个基因是U
L
56基因。10.根据权利要求8或9所述的oHSV
‑
1，其中U
S
成分中第一个基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈晓庆，刘园园，周国瑛，
申请(专利权)人：深圳市亦诺微医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：