结合PD-1的抗体及其用途制造技术

一种特异性结合人PD‑1的分离的单克隆抗体。本发明专利技术还提供了编码抗体的核酸分子、表达载体、宿主细胞和用于表达抗体的方法。本发明专利技术还提供了免疫缀合物、双特异性分子、嵌合抗原受体、溶瘤病毒和包含该抗体的药物组合物，以及使用本发明专利技术的抗PD‑1抗体的治疗方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结合PD-1的抗体及其用途
本专利技术总体上涉及分离的单克隆抗体，特别是小鼠、嵌合或人源化的单克隆抗体，其以高亲和力和功能性特异性结合人PD-1。本专利技术还提供了编码抗体的核酸分子、表达载体、宿主细胞和用于表达抗体的方法。本专利技术进一步提供了免疫缀合物(immunoconjugate)、双特异性分子、溶瘤病毒和包含该抗体的药物组合物，以及使用本专利技术的抗PD-1抗体的诊断和治疗方法。
技术介绍
程序性细胞死亡蛋白1，也称为PD-1或CD279，是T细胞调节剂CD28家族的成员，并在活化的B细胞、T细胞和髓样细胞上表达(Agataetal.,(1996)IntImmunol8:765-72；Okazakietal.,(2002)Curr.Opin.Immunol.14:391779-82；Bennettetal.,(2003)JImmunol170:711-8)。它包含膜近端免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)和膜远端基于酪氨酸的开关基序(ITSM)(Thomas,M.L.(1995)JExpMed181:1953-6；Vivier,EandDaeron,M(1997)ImmunolToday18:286-91)。已经鉴定出PD-1的两个配体PD-L1和PD-L2，两者都是与PD-1结合但不与其他CD28家族成员结合的B7同源物。几条证据表明PD-1及其配体负调节免疫反应。例如，发现PD-1在多种人类癌症中丰富(Dongetal.,(2002)Nat.Med.8:787-9)。此外，据报道PD-1和PD-L1之间的相互作用引起肿瘤浸润淋巴细胞和T细胞受体介导的增殖的减少，以及癌细胞的免疫逃避(Dongetal.,(2003)J.Mol.Med.81:281-7；Blanketal.,(2005)CancerImmunol.Immunother.54:307-314；Konishietal.,(2004)Clin.CancerRes.10:5094-100)。研究还表明，通过抑制PD-1与PD-L1的局部相互作用可以逆转免疫抑制作用，并且当PD-1与PD-L2的相互作用也被阻断时，这种作用是加和的(Iwaietal.,(2002)Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA99:12293-7；Brownetal.,(2003)J.Immunol.170:1257-66)。PD-1缺陷的动物可能发展出各种自身免疫表型，包括自身免疫性心肌病和具有关节炎和肾炎的狼疮样综合征(Nishimuraetal.,(1999)Immunity11:141-51；Nishimuraetal.,(2001)Science291:319-22)。另外，已经发现PD-1在自身免疫性脑脊髓炎、系统性红斑狼疮、移植物抗宿主病(GVHD)、I型糖尿病和类风湿性关节炎中起作用(Salamaetal.,(2003)JExpMed198:71-78；ProkuninaandAlarcon-Riquelme(2004)HumMolGenet13:R143；Nielsenetal.,(2004)Lupus13:510)。在小鼠B细胞肿瘤细胞系中，PD-1的ITSM被证明对于阻断BCR介导的Ca2+通量和下游效应子分子的酪氨酸磷酸化是必不可少的(Okazakietal.,(2001)PNAS98:13866-71)。已经开发了许多靶向PD-1的癌症免疫治疗剂用于疾病治疗。一种此类抗PD-1抗体是Nivolumab(由BristolMyersSquibb以商品名出售)，其在总共296名患者的临床试验中在非小细胞肺癌、黑色素瘤和肾细胞癌中产生了全部或部分反应(TopalianSLetal.,(2012)TheNewEnglandJournalofMedicine.366(26):2443–54)。它于2014年在日本获得批准，并于2014年被美国FDA批准用于治疗转移性黑色素瘤。靶向PD-1的另一种抗PD-1抗体Pembrolizumab(KEYTRUDATM,MK-3475,Merck)也已于2014年获得美国FDA的批准，用于治疗转移性黑色素瘤。在美国，它已用于肺癌、淋巴瘤和间皮瘤的临床试验中。尽管已经开发和批准了抗PD-1抗体，但仍需要具有对PD-1增强的结合亲和力和其他所需药物特性的其他单克隆抗体。
技术实现思路
本专利技术提供了分离的单克隆抗体，例如小鼠、人、嵌合或人源化的单克隆抗体，其与PD-1结合(例如人PD-1和猴PD-1)并且具有增加的与PD-1的亲和力，并且与现有的抗PD-1抗体(例如Nivolumab)相比，具有相当(若非更好)的抗肿瘤效果。本专利技术的抗体可用于多种应用，包括检测PD-1蛋白以及治疗和预防PD-1相关疾病，例如癌症、自身免疫性心肌病、自身免疫性脑脊髓炎、系统性红斑狼疮、移植物抗宿主病(GVHD)、I型糖尿病和类风湿关节炎。相应地，在一方面，本专利技术涉及与PD-1结合的分离的单克隆抗体(例如小鼠、嵌合或人源化抗体)或其抗原结合部分，其具有重链可变区，该重链可变区包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中所述CDR1区、CDR2区和CDR3区包含分别与(1)SEQIDNO：1、2和3；(2)SEQIDNO：4、5和6；(3)SEQIDNO：7、8和9；(4)SEQIDNO：10、11和12；(5)SEQIDNO：13、14和15；(6)SEQIDNO：16、17和18；(7)SEQIDNO：19、20和21；(8)SEQIDNO：22、23和24；(9)SEQIDNO：25、26和27；(10)SEQIDNO：28、29和30；或(11)SEQIDNO：31、32和33具有至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；其中所述抗体或其抗原结合片段结合PD-1。在一方面，本专利技术的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分包含重链可变区，该重链可变区包含具有与SEQIDNO：67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78或79具有至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，其中所述抗体或其抗原结合片段结合至PD-1。SEQIDNO：67和69-79可以分别由SEQIDNO：102-113的核酸序列编码。在一方面，本专利技术的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分包含轻链可变区，该轻链可变区包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中所述CDR1区、CDR2区和CDR3区域包含分别与(1)SEQIDNO：34、35和36；(2)SEQIDNO：37、38和39；(3)SEQIDNO：40、41和42；(4)SEQIDNO：43、44和45；(5)SEQIDNO：46、47和48；(6)SEQIDNO：49、50和51；(7)SEQIDNO：52、53和54；(8)SEQIDNO：55、56和57；(9)SEQIDNO：58、59和60；(10)SEQIDNO：61、62和63；或(11)SEQIDNO：64、65和66具有至少8本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与PD-1结合的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，所述重链可变区包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中所述CDR1区、CDR2区和CDR3区包含以下列出的氨基酸序列：/n（1）分别包含SEQ ID NO：1、2和3；/n（2）分别包含SEQ ID NO：4、5和6；/n（3）分别包含SEQ ID NO：7、8和9；/n（4）分别包含SEQ ID NO：10、11和12；/n（5）分别包含SEQ ID NO：13、14和15；/n（6）分别包含SEQ ID NO：16、17和18；/n（7）分别包含SEQ ID NO：19、20和21；/n（8）分别包含SEQ ID NO：22、23和24；/n（9）分别包含SEQ ID NO：25、26和27；/n（10）分别包含SEQ ID NO：28、29和30；或者/n（11）分别包含SEQ ID NO：31、32和33；/n其中所述抗体或其抗原结合片段结合PD-1。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180415 US 62/657,9271.一种与PD-1结合的分离的单克隆抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，所述重链可变区包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中所述CDR1区、CDR2区和CDR3区包含以下列出的氨基酸序列：
（1）分别包含SEQIDNO：1、2和3；
（2）分别包含SEQIDNO：4、5和6；
（3）分别包含SEQIDNO：7、8和9；
（4）分别包含SEQIDNO：10、11和12；
（5）分别包含SEQIDNO：13、14和15；
（6）分别包含SEQIDNO：16、17和18；
（7）分别包含SEQIDNO：19、20和21；
（8）分别包含SEQIDNO：22、23和24；
（9）分别包含SEQIDNO：25、26和27；
（10）分别包含SEQIDNO：28、29和30；或者
（11）分别包含SEQIDNO：31、32和33；
其中所述抗体或其抗原结合片段结合PD-1。


2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其包含重链可变区，所述重链可变区包含与SEQIDNO：67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78或79具有至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。


3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其进一步包含轻链可变区，所述轻链可变区包含CDR1区、CDR2区和CDR3区，其中所述CDR1区、CDR2区和CDR3区包含以下氨基酸序列：
（1）分别包含SEQIDNO：34、35和36；
（2）分别包含SEQIDNO：37、38和39；
（3）分别包含SEQIDNO：40、41和42；
（4）分别包含SEQIDNO：43、44和45；
（5）分别包含SEQIDNO：46、47和48；
（6）分别包含SEQIDNO：49、50和51；
（7）分别包含SEQIDNO：52、53和54；
（8）分别包含SEQIDNO：55、56和57；
（9）分别包含SEQIDNO：58、59和60；
（10）分别包含SEQIDNO：61、62和63；或者
（11）分别包含SEQIDNO：64、65和66。


4.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合部分，其进一步包含轻链可变区，所述轻链可变区包含与SEQIDNO：80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95或96具有至少80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈明久，谭巍，
申请(专利权)人：深圳市亦诺微医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44