Langerin制造技术

本发明专利技术涉及用于特异性分子靶向Langerin

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】Langerin+细胞靶向
本专利技术涉及一种特异性分子靶向Langerin+细胞的介质(vehicle)将靶向的运载物(cargo)递送至Langerin+细胞中的用途，其中所述介质能够与Langerin+细胞特异性结合，所述介质包含(a)至少一种载体(carrier)和(b)至少一种基于糖部分的缀合物。本专利技术还涉及相应的药物和诊断组合物，以及包含本专利技术介质的用途和涉及所述介质的方法。
技术介绍
皮肤是覆盖脊椎动物的软组织。在哺乳动物中，皮肤是皮肤系统(integumentarysystems)的器官，包含多层外胚层组织，包括：表皮，提供防水并起到抵抗感染的作用；真皮，是由成纤维细胞构成的细胞贫乏层，成纤维细胞产生含有蛋白聚糖以及缠绕的胶原纤维和弹性纤维的细胞外基质，这两层由基底膜隔开，基底膜是一种纤维片层，控制着细胞和分子在真皮和表皮之间的运输并为重塑或修复过程提供必要的因子。于是，皮肤与外界交接，并因此不仅暴露于物理应力而且还暴露于各种环境抗原，包括化学物质、细菌和病原体。因此，皮肤免疫系统必须准备好检测并区分多种多样的抗原，并且必须能够诱导适当的反应，例如致耐受性或保护性免疫应答。为了履行该功能，皮肤含有代表免疫应答关键调节因子的树突细胞(DC)异质群体。树突细胞通常被定义为协调先天性和适应性免疫之间相互作用的抗原呈递(presenting)细胞群体，并且是唯一能够诱导初次免疫应答的细胞。因此，DC是免疫治疗策略中一个令人感兴趣的靶标。在人类中已经描述了几种DC类型，并可根据它们的组织分布进行分类。这些DC类型中的一些已被认识到它们通过MHC-1交叉呈递外源性肿瘤相关抗原以及有效触发初始CD8+T细胞的能力。皮肤树突细胞在防护主体抵抗病原体入侵方面发挥关键作用，而且限制了附带的组织损伤。此外，它们与外周耐受破坏有关，导致慢性免疫介导的炎性疾病，例如变应性接触性皮炎和银屑病(Clausen和Stoitzner，2015，FrontiersinImmunology，6，论文534)。DC可以分为常规DC和浆细胞样DC(pDC)。健康的皮肤不含或含有很少的pDC，pDC只进入发炎的皮肤以通过I型干扰素促进伤口愈合或介导TLR7刺激后发生的促炎反应，例如在银屑病期间。在稳定状态下，驻留在皮肤中的常规DC通常不是无活性的，而是–作为未成熟的细胞–不断探测其环境的侵入病原体并持续抽查自身和环境抗原。成熟后，DC迁移至皮肤引流淋巴结，并与周围的角质形成细胞分离。在它们迁移到局部淋巴结的T细胞区域期间，细胞上调MHC/肽复合物的表面表达，以识别抗原特异性初始T细胞并与之相互作用。在遇到逃脱中枢耐受的潜在自身反应性T细胞或识别源自于无害外来抗原的肽的T细胞后，这些DC诱导T细胞无反应性或缺失T细胞耐受(deletionalTcelltolerance)(致耐受功能)。另外，在淋巴器官中DC的T细胞扫描期间，即在缺乏关联抗原的情况下，频繁的T细胞–DC接触诱导T细胞的基础活化水平，这是对随后在炎症期间遇到外来抗原作出快速响应所需的。病原体入侵与促炎信号一起通常会驱动皮肤树突细胞完全功能成熟。除体内稳态分化程序外，所述细胞现在还上调共刺激分子、特别是促炎细胞因子的表达。这些共同促进了初始的抗原特异性T细胞的克隆扩充，并指令T细胞获得专门为消除入侵病原体而定制的适当效应子功能(致敏功能)。因此，外周的未成熟DC具有前哨功能，并能够进行抗原捕获、抗原加工和肽-MHC结合。它们还具有迁移功能，并提供抗原向淋巴结转运。在那里，DC-T细胞相互作用引起高表面MHCI和II/肽复合物，这些复合物最终导致Th1/Th2/Th17指令、或T细胞缺失和无变应性、或细胞毒性T淋巴细胞(CTL，T杀伤细胞)活化。根据目前的报道(Doebel等人，2017，TrendsImmunol，38，11，817-828)，皮肤中的树突细胞群可以分为若干DC亚组。树突细胞可以是表皮朗格汉斯细胞(LC)和真皮DC。真皮DC构成Langerin+和Langerin-亚型，即在其表面上表达或不表达C型凝集素Langerin(也称为CD207)的细胞。Langerin+真皮DC根据CD103、即整联蛋白αE(ITGAE)的表达，进一步分为CD103+和CD103-群(Yamazaki和Morita，2013，FrontiersinImmunology，4，论文151)。进一步分成亚组将DC定义为Langerin+CD11blow、Langerin-CD11b-和Langerin-CD11b+群体(Yamazaki和Morita，2013，FrontiersinImmunology，4，论文151)。已知Langerin参与病原体相关和自身相关聚糖两者以及肝素样寡糖的Ca2+依赖性识别(Munoz-Gracia等人，J.Am.Chem.Soc.2015，137，12，4100-10)。而且，Langerin与聚糖、例如包括硫酸角质素在内的半乳糖-6-硫酸化寡糖结合(Tateno等人，JournalofBiologicalChemistry，2010，283，9，6390-6400)。由于Langerin表现出的表达谱高度局限于主要在皮肤中的特定DC亚型，它代表了疫苗开发或建立新型免疫疗法的诱人靶标。因此，皮肤是疫苗或其它免疫疗法的特别吸引人的进入点，这是因为驻留在最上层中的Langerin表达DC使得能够局部应用具有潜在全身性反应的疫苗或药物且无需使用针头。可能会遵循的策略包括：提供癌症疫苗，针对病毒或细菌感染的预防性疫苗，针对变态反应的免疫疗法，治疗诸如狼疮等自身免疫性疾病，或在皮肤移植的情形下使用再生方法。然而，由于C型凝集素的碳水化合物结合位点是高度溶剂暴露且亲水的，很难特异性靶向Langerin+DC。因此，与单糖和寡糖的相互作用通常以毫摩尔范围内的低亲和力为特征。此外，由于单个C型凝集素结合若干单糖或寡糖且反之亦然，识别过程非常杂乱。在这种情形下，Aretz等人在2014年指出，对21种X射线结构进行基于结构的计算机分析确证了将C型凝集素归类为不可成药的(undruggable)或挑战性的靶标。对C型凝集素仅鉴定出与碳水化合物结合位点相邻的可成药的二级结合口袋的有限治疗相关性(Aretz等人，2014，FrontImmunol，5，论文323)。另一方面，存在基于离体方法的成功途径，所述离体方法中从患者分离出祖树突细胞、离体分化并随后负载SPIO粒子(Verdijk等人，2006，Int.J.Cancer，120，978-984)。然而，由于特别是细胞缺乏从注射部位迁移到靶组织中并且细胞分化差，这种计划遭受到高成本和低功效。其它替代方法基于抗体的使用。例如，在Flacher等人，2010，JournalofInvestigativeDermatology，130，755-762中，描述了在表皮朗格汉斯细胞中从Langerin靶向抗体捕获呈递的抗原的方法。然而，胞吞后抗体本身不会从受体中溶解出来，因此可能限制所述细胞的吸收能力。而且，由于所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于特异性分子靶向Langerin

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180118 EP 18152362.2;20180320 EP 18162955.11.用于特异性分子靶向Langerin+细胞的介质在将靶向的运载物递送至Langerin+细胞中的用途，其中所述介质能够与Langerin+细胞特异性结合，所述介质包含(a)至少一种载体和(b)至少一种通式(I)的缀合物



其中
(i)R独立地选自：
取代或未取代的烷基、烯基、炔基、环烷基、C1-C8烷基环烷基、芳基、C1-C8烷基芳基、杂芳基、C1-C8烷基杂芳基、联芳基和C1-C8烷基联芳基；
其中取代基独立地选自：
-N(Ra)(Rb)，-ORa，-SRa，-C(O)Ra，-C(O)ORa，-C(O)N(Ra)(Rb)，-N(Ra)C(O)Rb，-N(Ra)S(O)2Rb，-OS(O)2Ra，卤素，-NO2，-CN，-NC，-N3，-NCO，-OCN，-NCS，-SCN，取代或未取代的烷基、烯基、炔基、芳基和杂芳基；
其中Ra和Rb独立地选自：氢，取代或未取代的C1-8烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、C3-6环烷基、芳基-C1-5烷基、杂芳基-C1-5烷基、芳基、杂芳基；
(ii)R’独立地选自：
-ORa和-NHS(O)2Ra，
其中Ra如上定义；
(iii)A-D-B-L是接头基团，其将式(I)的葡萄糖衍生物与所述载体或与所述载体的一部分共价结合。


2.根据权利要求1所述的用途，其中R’是-OH、-OCH3、-OCH2CH3或-NHS(O)2Ra。


3.根据权利要求1或2所述的用途，其中R’是-OH或-NHS(O)2Ra。


4.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中R’是–OH、-NHS(O)2CH3或N-甲苯磺酰基。


5.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中R’是-OH。


6.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中R独立地选自：
取代或未取代的烷基、环烷基、C1-C8烷基环烷基、芳基、C1-C8烷基芳基、杂芳基、C1-C8烷基杂芳基、联芳基和C1-C8烷基联芳基。


7.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中R独立地选自：
取代或未取代的C1-C6烷基、C3-C6环烷基、C1-C3烷基C3-C6环烷基、C6-C14芳基、C1-C3烷基C6-C14芳基、杂芳基、C1-C3烷基杂芳基、联芳基和C1-C3烷基联芳基。


8.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中R独立地选自：
取代或未取代的环己基、苯基、苄基、联苯基、吡啶基和噁唑基。


9.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中R是取代或未取代的苯基。


10.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中R的取代基独立地选自：
-N(Ra)(Rb)，-ORa，-SRa,-C(O)Ra，-C(O)ORa，-C(O)N(Ra)(Rb)，-N(Ra)C(O)Rb，-N(Ra)S(O)2Rb，-OS(O)2Ra，卤素，-NO2，-CN，-NC，-N3，-NCO，-OCN，-NCS，-SCN，取代或未取代的烷基、烯基、炔基、芳基和杂芳基，
其中Ra和Rb独立地选自氢和C1-2烷基。


11.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中R的取代基独立地选自：
-NH2，-OH，-OCH3，-C(O)CH3，-NHC(O)CH3，-F，-Cl，-Br，-NO2，-CN，C1-C4烷基和苯基。


12.根据权利要求9所述的用途，其中所述苯基是单取代的、二取代的或三取代的，并且所述苯基的取代基独立地选自：
-NH2，-OH，-OCH3，-C(O)CH3，C(O)NH2，-C(O)NHCH3，-CH2OH，-NHC(O)CH3，-F，-Cl，-Br，-NO2，-CN，C1-C4烷基，萘基和苯基。


13.根据权利要求9所述的用途，其中所述苯基在对位单取代，并且所述苯基的取代基独立地选自：
-NHC(O)CH3，-CN，-CH3，-F，-C(O)NH2，-NH2，-C(O)NHCH3，-CH2OH和苯基。


14.根据权利要求12所述的用途，其中所述缀合物是下面式(I-1)或式(I-2)的缀合物：





15.根据权利要求12所述的用途，其中所述缀合物是下面式(I-3)至式(I-15)中任一个的缀合物：








16.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中所述A-D-B-L接头基团是由间隔基A-D-B和连接葡萄糖衍生物与载体的接头L组成的基团。


17.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中所述接头L包含合成聚合物或天然聚合物中的一种或多种，或者这些聚合物的一种或多种单个单元，或其组合。


18.根据权利要求17所述的用途，其中所述合成聚合物选自：饱和和不饱和烃聚合物；聚胺；聚酰胺；聚酯；聚醚，聚乙二醇，聚丙二醇；嵌段共聚物，泊洛沙姆。


19.根据权利要求17所述的用途，其中所述天然聚合物选自碳水化合物、修饰的碳水化合物、肽、修饰的肽、脂质和修饰的脂质。


20.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中
D是与通式(D-1)的A和B连接的间隔基，
A-(CH2)c-(CH2-O)c1-(CH2-CH2-O)c2-(CH2)c3-B(D-1)，
其中
D通过B与接头L连接，其中B选自：
-O-，-S-，-C(Rc1)(Rc2)-，-S-S-，-N(Rc1)-，-C(O)-，-C(Rc1)＝N-，-N＝N-，-OC(O)-，-C(O)O-，-C(O)N(Rc1)-，-N(Rc1)C(O)-，-N(Rc1)C(O)N(Rc2)-，-N(Rc1)C(S)N(Rc2)-，-N(Rc1)C(O)O-，-OC(O)N(Rc1)-，-环己烯-和-三唑-；
其中Rc1和Rc2独立地选自：氢，取代或未取代的烷基、烯基、环烷基、C1-C8烷基环烷基、芳基、C1-C8烷基芳基、杂芳基和C1-C8烷基杂芳基；
D通过A与葡萄糖衍生物连接，其中A选自：-O-，-CH2-，-S-，-NH-，-NHC(O)-，-OC(O)-，-环己烯-和-三唑-；
c是选自0至20的整数，c1是选自0至20的整数，以及c2是选自0至20的整数，c3是选自1至20的整数，如果A是-CH2-，则c3是选自0至20的整数。


21.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中所述接头L是下面通式(L-1)的接头



其中
U1是通过B与间隔基V连接的基团，其中U1选自-CH2-、-CH＝CH-或-C≡C-；
Z1是将所述接头与所述载体结合的部分，选自：-O-，-S-，-N(Rd)-，-C(Rd)(Re)-，-RdC＝CRe-，-C(O)-，-C(O)O-，-OC(O)-，-C(O)S-，-C(O)N(Rd)-，-N(Rd)C(O)-，-N(Rd)C(O)N(Re)-，-N(Rd)C(S)N(Re)-，-N(Rd)C(O)O-，-OC(O)N(Rd)-，-环己烯-，-三唑-，-NHS(O)2-，-S(O)2-，-OP(O)(H)O-，或-OP(O)(OH)O；
其中Rd和Re独立地选自：氢，取代或未取代的C1-32烷基、C2-32烯基、C3-8环烷基、芳基、C1-C8烷基芳基、杂芳基、C1-C8烷基杂芳基；并且
d1至d5各自是0至50的整数，d6是1至50的整数。


22.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中所述A-D-B-L接头基团是主链中所含的碳原子、氮原子和氧原子总数为至少4的分子链。


23.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中所述A-D-B-L接头基团是主链中所含的碳原子、氮原子和氧原子总数在4个原子至600个原子之间的分子链。


24.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其中所述A-D-B-L接头基团是主链的长度在约0.4nm至约400nm之间的分子链。


25.根据权利要求1至24中任一项所述的用途，其中所述至少一种载体是软粒子。


26.根据权利要求25所述的用途，其中所述软粒子选自脂质体、niosome、胶束、sequessomeTM和传递体，并且其中所述缀合物通过Z1直接与所述软粒子的一部分结合，其中所述软粒子的一部分是：脂质，修饰的脂质例如sequessome或传递体、磷脂、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油酰基-3-磷酸乙醇胺(DSPE)，膜脂质，修饰的磷脂酰胆碱。


27.根据权利要求26所述的用途，其中所述缀合物与软粒子载体的一部分结合，从而产生下式(II)：

【专利技术属性】
技术研发人员：克里斯托夫·拉德马赫，艾克克里斯蒂安·瓦姆霍夫，杰西卡·舒尔茨，罗伯特·卡斯滕·威利·沃兹内克，奥利弗·塞茨，冈纳·巴切姆，
申请(专利权)人：马克斯·普朗克科学促进协会，柏林洪堡大学，
类型：发明
国别省市：德国;DE