针对信号调控蛋白α的抗体和使用方法技术

本文尤其提供了结合人SIRP‑α多肽的胞外结构域的分离的人源化抗体。还提供了与所述人源化抗体相关的多核苷酸、载体、宿主细胞和生产方法及用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对信号调控蛋白α的抗体和使用方法相关申请的交叉参考本申请要求2018年3月21日提交的美国临时申请序列号62/646,210的优先权权益，所述美国临时申请据此以引用的方式整体并入。ASCII文本文件序列表的提交以下提交的ASCII文本文件形式的内容以引用的方式整体并入本文：757972000640SEQLIST.txt，记录日期：2019年3月19日；大小：230KB)。
本公开涉及结合人SIRP-α多肽的胞外结构域(例如，D1结构域)的分离的人源化抗体，以及与所述人源化抗体相关的多核苷酸、载体、宿主细胞和方法。
技术介绍
信号调控蛋白α(SIRP-α)是细胞表面受体家族的一部分，在免疫系统调控中起关键作用(参见例如，Barclay，A.N.和Brown，M.H.(2006)Nat.Rev.Immunol.6：457-64)。SIRP-α在各种细胞的表面上表达，所述细胞包括白细胞诸如树突状细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞。SIRP-α包括与外部刺激(诸如配体)相互作用的胞外结构域和介导多种细胞内信号的胞内结构域。SIRP-α的主要作用之一是其通过与CD47的相互作用调控免疫应答。CD47在多种细胞类型的表面上表达。当CD47的IgSF结构域结合免疫细胞(例如巨噬细胞)上表达的SIRP-α的胞外结构域(例如，D1结构域)时，这在免疫细胞中转导了SIRP-α介导的信号，所述信号阻止CD47表达细胞的吞噬。因此，CD47用于向免疫系统传达所谓的“不要吃我”信号，以防止对健康细胞的吞噬(参见例如，WO2015/138600和Weiskopf，K.等人(2013)Science341：88-91)。然而，CD47也显示出被多种癌症高度表达，在这种背景下它与SIRP-α的相互作用被认为可以让肿瘤模拟健康的“不要吃我”信号，以便逃避免疫监视和巨噬细胞的吞噬作用(参见例如，Majeti，R.等人(2009)Cell138：286-99；Zhao，X.W.等人(2011)Proc.Natl.Acad.Sci.108：18342-7)。因此，阻断这种相互作用的抗体是高度期望的。已知SIRP-α是人、猴和小鼠中的高度多态性蛋白。例如，已经在NOD和C57BL/6小鼠品系中的SIRP-α蛋白之间鉴定了多态性差异，并且这些多态性导致与这些小鼠品系中的人造血干细胞的CD47结合和植入相关的功能性后果。在人类中，已报道了SIRPA基因的两种普遍的等位基因(Treffers,LW.等人(2018),Eur.J.Immunol.48:344-354；Zhao,X.等人(2011),PNAS.108:18342-47；vanderHeijden,J.(2014).GeneticvariationinhumanFcgammareceptors:Functionalconsequencesofpolymorphismsandcopynumbervariation(博士论文))。由于SIRP-α-CD47相互作用在正常免疫功能和肿瘤发生中的重要性，鉴定结合人SIRP-α的抗体对于开发临床候选物具有重要意义。本文引用的所有参考文献，包括专利申请、专利公开、非专利文献和UniProtKB/Swiss-Prot登录号均以引用的方式整体并入本文，如同指明每个单独的参考文献具体且单独地以引用的方式并入。
技术实现思路
为了满足这些和其他需要，本文尤其提供了结合人SIRP-α多肽的胞外结构域的分离的抗体。有利地，这些抗体具有许多可用的体外和/或体内特性中的一种或多种，所述体外和/或体内特性诸如以高亲和力结合多种SIRP-α多肽、针对多种哺乳动物SIRP-α多肽(例如，人v1、人v2、食蟹猴和/或多种鼠类SIRP-α蛋白)的交叉反应性、增强巨噬细胞吞噬作用的能力、增强树突状细胞激活的能力、和/或抑制表达CD47的肿瘤的体内生长的能力。此外，本公开提供了具有变体轻链的抗体，所述变体轻链已经被工程改造以去除潜在的易感性(liability)，诸如可以通过脱酰胺化或糖化而被修饰的残基，从而产生具有更多对于制造、储存和/或药物开发所期望的特征的抗体。在某些方面，本公开提供了结合人SIRP-α多肽的胞外结构域的抗体(例如，分离的抗体)，其中所述抗体包含：重链，所述重链包含含有氨基酸序列SEQIDNO:26的重链可变(VH)结构域；和轻链，所述轻链包含含有根据下式的氨基酸序列的轻链可变(VL)结构域：SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYTNPFGX1GTX2X3TVL(SEQIDNO:71)，其中X1是G或T；X2是K、Q或R；并且X3是L或V，并且其中所述VL结构域不包含序列SEQIDNO:25。在一些实施方案中，所述VL结构域包含选自由SEQIDNO:39-41组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述轻链进一步包含轻链恒定(CL)结构域序列，所述轻链恒定结构域序列包含根据下式的氨基酸序列：GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSX4X5KYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQIDNO:72)，其中X4X5是ND、DN、DS或SD。在一些实施方案中，所述轻链进一步包含轻链恒定(CL)结构域序列，所述轻链恒定结构域序列包含选自由SEQIDNO:43-46组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述轻链进一步包含κ轻链恒定(CL)结构域。在一些实施方案中，所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:36。在一些实施方案中，所述轻链进一步包含λ轻链恒定(CL)结构域。在一些实施方案中，所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:37或SEQIDNO:38。在一些实施方案中，所述轻链包含选自由SEQIDNO:48-57组成的组的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体为scFv-Fc、单结构域抗体、单重链抗体或单轻链抗体。在一些实施方案中，所述抗体为单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗体包含重链，所述重链包含含有Fc区的重链恒定结构域。在一些实施方案中，所述Fc区为选自由IgG1Fc区、IgG2Fc区和IgG4Fc区组成的组的人Fc区。在一些实施方案中，所述Fc区为人IgG1Fc区。在一些实施方案中，所述Fc区为人IgG1Fc区，所述人IgG1Fc区包含L234A、L235A和G237A取代，氨基酸位置编号根据EU。在一些实施方案中，所述Fc区为人IgG2Fc区。在一些实施方案中，所述Fc区为人IgG2Fc区，所述人IgG2Fc区包含A330S和P331S取代，氨基酸位置编号根据EU。在一些实施方案中，所述Fc区进一步包含N297A取代，氨基酸位置编号根据EU。在一些实施方案中，所述Fc区为人IgG2Fc区，所述人IgG2Fc区本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种结合人SIRP-α多肽的胞外结构域的分离的抗体，其中所述抗体包含：/n(a)重链，所述重链包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:26的重链可变(VH)结构域；以及/n(b)轻链，所述轻链包含含有根据下式的氨基酸序列的轻链可变(VL)结构域：SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPVTL IYSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYTNP FGX

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180321 US 62/646,2101.一种结合人SIRP-α多肽的胞外结构域的分离的抗体，其中所述抗体包含：
(a)重链，所述重链包含含有氨基酸序列SEQIDNO:26的重链可变(VH)结构域；以及
(b)轻链，所述轻链包含含有根据下式的氨基酸序列的轻链可变(VL)结构域：SYELTQPPSVSVSPGQTARITCSGGSYSSYYYAWYQQKPGQAPVTLIYSDDKRPSNIPERFSGSSSGTTVTLTISGVQAEDEADYYCGGYDQSSYTNPFGX1GTX2X3TVL(SEQIDNO:71)，其中X1是G或T；X2是K、Q或R；并且X3是L或V，并且其中所述VL结构域不包含序列SEQIDNO:25。


2.如权利要求1所述的抗体，其中所述VL结构域包含选自由SEQIDNO:39-41组成的组的氨基酸序列。


3.如权利要求1或权利要求2所述的抗体，其中所述轻链进一步包含轻链恒定(CL)结构域序列，所述轻链恒定结构域序列包含根据下式的氨基酸序列：GQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSX4X5KYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS(SEQIDNO:72)，其中X4X5是ND、DN、DS或SD。


4.如权利要求1或权利要求2所述的抗体，其中所述轻链进一步包含轻链恒定(CL)结构域序列，所述轻链恒定结构域序列包含选自由SEQIDNO:43-46组成的组的氨基酸序列。


5.如权利要求1或权利要求2所述的抗体，其中所述轻链进一步包含κ轻链恒定(CL)结构域。


6.如权利要求5所述的抗体，其中所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:36。


7.如权利要求1或权利要求2所述的抗体，其中所述轻链进一步包含λ轻链恒定(CL)结构域。


8.如权利要求7所述的抗体，其中所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:37或SEQIDNO:38。


9.如权利要求1所述的抗体，其中所述轻链包含选自由SEQIDNO:48-57组成的组的氨基酸序列。


10.如权利要求1-9中任一项所述的抗体，其中所述抗体为scFv-Fc、单结构域抗体、单重链抗体或单轻链抗体。


11.如权利要求1-9中任一项所述的抗体，其中所述抗体为单克隆抗体。


12.如权利要求1-9中任一项所述的抗体，其中所述重链包含含有Fc区的重链恒定结构域。


13.如权利要求12所述的抗体，其中所述Fc区为选自由IgG1Fc区、IgG2Fc区和IgG4Fc区组成的组的人Fc区。


14.如权利要求12所述的抗体，其中所述Fc区为人IgG1Fc区。


15.如权利要求12所述的抗体，其中所述Fc区为人IgG1Fc区，所述人IgG1Fc区包含L234A、L235A和G237A取代，氨基酸位置编号根据EU。


16.如权利要求15所述的抗体，其中所述Fc区进一步包含N297A取代，氨基酸位置编号根据EU。


17.如权利要求12所述的抗体，其中所述Fc区为人IgG2Fc区。


18.如权利要求12所述的抗体，其中所述Fc区为人IgG2Fc区，所述人IgG2Fc区包含A330S和P331S取代，氨基酸位置编号根据EU。


19.如权利要求17或权利要求18所述的抗体，其中所述Fc区进一步包含N297A取代，氨基酸位置编号根据EU。


20.如权利要求12所述的抗体，其中所述Fc区为人IgG4Fc区，并且其中所述重链包含S228P取代，氨基酸位置编号根据EU。


21.如权利要求12所述的抗体，其中所述重链恒定结构域包含选自由SEQIDNO:31-35组成的组的氨基酸序列。


22.如权利要求12所述的抗体，其中所述重链恒定结构域包含选自由SEQIDNO:33、34和137组成的组的氨基酸序列。


23.如权利要求12所述的抗体，其中所述重链恒定结构域包含选自由SEQIDNO:132-139组成的组的氨基酸序列。


24.如权利要求1所述的抗体，其中所述重链包含选自由SEQIDNO:58-62组成的组的氨基酸序列。


25.如权利要求1所述的抗体，其中所述重链包含选自由SEQIDNO:60、61和129组成的组的氨基酸序列。


26.如权利要求1所述的抗体，其中：
(a)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:62，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:52；
(b)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:62，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:53；
(c)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:62，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:54；
(d)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:62，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:55；
(e)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:62，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:56；或者
(f)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:62，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:57。


27.如权利要求1所述的抗体，其中：
(a)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:58，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:52；
(b)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:59，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:52；
(c)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:60，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:52；
(d)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:61，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:52；
(e)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:58，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:53；
(f)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:59，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:53；
(g)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:60，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:53；
(h)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:61，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:53；
(i)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:58，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:54；
(j)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:59，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:54；
(k)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:60，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:54；
(l)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:61，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:54；
(m)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:58，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:55；
(n)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:59，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:55；
(o)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:60，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:55；
(p)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:61，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:55；
(q)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:58，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:56；
(r)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:59，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:56；
(s)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:60，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:56；
(t)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:61，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:56；
(u)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:58，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:57；
(v)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:59，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:57；
(w)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:60，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:57；或者
(x)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:61，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:57。


28.如权利要求1所述的抗体，其中：
(a)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:60，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:55；
(b)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:61，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:55；
(c)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:129，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:55；
(d)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:124，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:52；或者
(e)所述重链包含氨基酸序列SEQIDNO:124，并且所述轻链包含氨基酸序列SEQIDNO:55。


29.如权利要求1-28中任一项所述的抗体，其中所述抗体增强表达人SIRP-α多肽的巨噬细胞的吞噬作用。


30.如权利要求1-28中任一项所述的抗体，其中所述抗体增强表达人SIRP-α多肽的树突状细胞的激活。


31.如权利要求1-30中任一项所述的抗体，其中所述抗体抑制表达CD47的肿瘤的体内生长。


32.如权利要求1-31中任一项所述的抗体，其中所述抗体缀合至剂。


33.如权利要求1-31中任一项所述的抗体，其中所述抗体为双特异性抗体。


34.如权利要求33所述的抗体，其中所述抗体包含结合人SIRP-α多肽的胞外结构域的第一抗原结合结构域和结合由癌细胞表达的抗原的第二抗原结合结构域。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·庞斯，B·J·希姆，万虹，T·CC·郭，
申请(专利权)人：ALX肿瘤生物技术公司，
类型：发明
国别省市：美国;US