SIRP-α变体构建体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及包含SIRP

【技术实现步骤摘要】
SIRP
‑
α
变体构建体及其用途
[0001]本申请是申请日为2015年8月10和专利技术名称为“SIRP
‑
α变体构建体及其用途”的201580029698.2号中国专利技术专利申请的分案申请。
[0002]交叉引用
[0003]本申请要求2014年8月08日提交的美国临时申请No.62/035,057的利益，该申请通过引用为所有目的全文并入本文中。

技术介绍

[0004]信号调节蛋白(signal
‑
regulatory protein)α(SIRP
‑
α)是在髓系细胞的膜上广泛表达的蛋白质。SIRP
‑
α与CD47(一种在身体内的许多细胞类型上广泛表达的蛋白质)相互作用。SIRP
‑
α与CD47的相互作用防止可能被免疫系统另外地识别的“自身”细胞的吞噬。SIRP
‑
α首先作为SHP
‑
2(一种含SH
‑
2结构域的酪氨酸磷酸酶)的结合剂被发现。CD47早期表征为卵巢癌细胞上过度表达的抗原。
[0005]在2000年，Oldenborg等证明在小鼠模型中施用CD47
‑
缺陷红细胞(RBC)导致该RBC从系统中快速清除，表明CD47是一些“自身”细胞亚群上的“保护性”信号。随后，进一步研究了SIRP
‑
α和癌症之间的潜在关联。据发现，肿瘤细胞上的高CD47表达在急性髓性白血病(AML)和几种实体肿瘤癌症中作为存活的负面预后因子发挥作用。聚焦于破坏CD47和SIRP
‑
α之间的相互作用的策略(例如，施用屏蔽CD47或SIRP
‑
α的药剂)已经作为潜在的抗癌疗法进行了研究。
[0006]但是，在考虑这些治疗策略时，所关心的问题是SIRP
‑
α可以结合人体中许多不同细胞类型上的CD47。因此，存在着对SIRP
‑
α进行工程化以优先结合仅患病细胞上的或患病部位处的细胞上的CD47。

技术实现思路

[0007]本专利技术特征在于信号调节蛋白α(SIRP
‑
α)构建体，其是指包含与例如封闭肽、Fc域单体、HSA、白蛋白结合肽、聚合物、抗体结合肽、抗体连接的SIRP
‑
α多肽的多肽。SIRP
‑
α多肽可以是野生型SIRP
‑
α或SIRP
‑
α变体。SIRP
‑
α变体构建体包括SIRP
‑
α变体。在一些实施方式中，SIRP
‑
α变体构建体在患病部位处具有优先活性(例如，在肿瘤部位相对于非患病部位具有优先活性)。在某些实施方式中，SIRP
‑
α变体构建体对于患病细胞(例如，肿瘤细胞)上的CD47具有较高结合亲和力。在一些实施方式中，与在生理条件下相比，SIRP
‑
α变体在酸性pH(例如，低于约pH 7)下和/或在缺氧条件下以较高亲和力结合CD47。在一些实施方式中，SIRP
‑
α变体包含用组氨酸残基或允许SIRP
‑
α变体构建体在患病部位处优先结合的其它氨基酸置换的一个或多个氨基酸置换。在一些实施方式中，SIRP
‑
α变体构建体通过封闭肽防止与非患病部位的CD47结合。在一些实施方式中，SIRP
‑
α变体构建体通过靶向部分(例如，针对肿瘤相关抗原或抗体结合肽的抗体)靶向于患病部位(例如，肿瘤)。本专利技术还特征在于包含SIRP
‑
α变体构建体以治疗各种疾病如癌症(优选实体肿瘤癌症和血液癌症)的方法和药物组合物。
[0008]在一个方面，本专利技术特征在于信号调节蛋白α(SIRP
‑
α)变体构建体，其中与非患病细胞上的CD47相比，该SIRP
‑
α变体构建体优先结合患病细胞上或患病部位处的CD47。在一些实施方式中，SIRP
‑
α变体构建体与其结合非患病细胞上的CD47相比以更高的亲和力结合患病细胞上或患病部位处的CD47。
[0009]在一些实施方式中，SIRP
‑
α变体构建体包括连接于封闭肽的SIRP
‑
α变体。在一些实施方式中，封闭肽以比对于SIRP
‑
α变体更高的亲和力结合野生型SIRP
‑
α。在一些实施方式中，SIRP
‑
α变体以比对于封闭肽更高的亲和力结合野生型CD47。
[0010]在一些实施方式中，封闭肽是基于CD47的封闭肽。在一些实施方式中，基于CD47的封闭肽包括与CD47的野生型IgSF结构域(SEQ ID NO:35)或其片段具有至少80％的氨基酸序列同一性的部分。在一些实施方式中，基于CD47的封闭肽具有SEQ ID NO:38或40的序列。
[0011]本文提供了包含本文所述的SIRP
‑
α变体的SIRP
‑
α变体构建体，其中所述SIRP
‑
α变体通过使用至少一个接头(例如，可切割接头)连接于本文所述的封闭肽。在一些实施方式中，SIRP
‑
α变体可以包含与野生型SIRP
‑
α相同的CD47结合位点。在一些实施方式中，SIRP
‑
α变体与野生型SIRP
‑
α相比可以包含一个或多个突变或插入。在一些实施方式中，SIRP
‑
α变体可以是野生型SIRP
‑
α的截短形式。在一些实施方式中，封闭肽可以是本文所述的CD47模拟物、变体或片段。在一些实施方式中，与SIRP
‑
α变体构建体中的SIRP
‑
α变体相比，封闭肽对于野生型SIRP
‑
α可以表现出较高亲和力。在一些实施方式中，封闭肽可以是与野生型CD47相比对于SIRP
‑
α变体显示出较低亲和力的CD47变体多肽。在一些实施方式中，SIRP
‑
α变体和封闭肽之间的接头可以是任选地可通过一种或多种蛋白酶切割的至少一个接头。在一些实施方式中，接头任选地还包含一个或多个间隔体。
[0012]在一些实施方式中，SIRP
‑
α变体经由可切割接头和任选地一个或多个间隔体连接于封闭肽。在一些实施方式中，可切割接头在酸性pH和/或缺氧条件下切割。在一些实施方式中，可切割接头通过肿瘤相关酶切割。在一些实施方式中，肿瘤相关酶是蛋白酶。在一些实施方式中，蛋白酶选自蛋白裂解酶(MTSP1)、尿型纤溶酶原激活剂(uPA)、豆荚蛋白、PSA(也称为KLK3，激肽释放酶相关肽酶
‑
3)、基质金属蛋白酶
‑
2(MMP
‑
2)、基质金属蛋白酶
‑
9(MMP9)、人嗜本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种包含连接于抗体结合肽的SIRP
‑
α变体的构建体，其中所述SIRP
‑
α变体包含以下所示的氨基酸序列：EEEX1QX2IQPDKSVLVAAGETX3TLRCTX4TSLX5PVGPIQWFRGAGPGRX6LIYNQX7X8GX9FPRVTTVSDX
10
TX
11
RNNMDFSIRIGX
12
ITX
13
ADAGTYYCX
14
KX
15
RKGSPDDVEX
16
KSGAGTELSVRAKPS(SEQ ID NO:13)，其中X1是L、I或V，X2是V、L或I，X3是A或V，X4是A、I或L，X5是I、T、S或F，X6是E、V或L，X7是K或R，X8是E或Q，X9是H、P或R，X
10
是L、T或G，X
11
是K或R，X
12
是N、A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、P、Q、R、S、T、V、W或Y，X
13
是P、A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W或Y，X
14
是V或I，X
15
是F、L或V，和X
16
是F或V；或其中所述SIRP
‑
α变体与SEQ ID NO:3
‑
12和24
‑
34中任一项的序列具有至少80％的序列同一性。2.如权利要求1所述的构建体，其中所述抗体结合肽(a)可逆地或不可逆地结合抗体的恒定区；(b)可逆地或不可逆地结合抗体的抗原结合片段(Fab)区；或(c)可逆地或不可逆地结合抗体的可变区。3.如权利要求1所述的构建体，其中所述抗体结合肽结合肿瘤特异性抗体。4.如权利要求1
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：L，
申请(专利权)人：ALX肿瘤生物技术公司，
类型：发明
国别省市：