麦克唐纳猫肉瘤(FMS)样酪氨酸激酶3受体配体(FLT3L)的抗体及其用于治疗自身免疫性疾病和炎性疾病的用途制造技术

本文提供了抗FLT3L抗体以及使用这些抗体来治疗自身免疫性疾病和其他炎性疾病的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】麦克唐纳猫肉瘤(FMS)样酪氨酸激酶3受体配体(FLT3L)的抗体及其用于治疗自身免疫性疾病和炎性疾病的用途
技术介绍
当人体的免疫系统产生自身抗体时会引发自身免疫性疾病，令人遗憾的是，自身免疫性疾病很普遍。例如，据估计有超过2300万美国人患有自身免疫性疾病。当前有80多种公认的自身免疫性疾病。自身免疫性疾病的具体实例包括系统性红斑狼疮、肌炎、原发性干燥综合征、多发性硬化症、葡萄膜炎、银屑病和类风湿性关节炎。系统性红斑狼疮(SLE)的特征是关节疼痛、淋巴结肿大以及脸颊上出现蝶形皮疹。在SLE中，针对健康组织的自身抗体攻击患者的免疫系统，从而导致炎症。在细胞水平上，SLE患者具有由树突状细胞驱动的自身反应性T细胞和B细胞(PaluckaA.K.等人,ImmunologyandCellBiology[免疫学和细胞生物学](2002)80:484-488)。干燥综合征的特征是外分泌器官的全身慢性炎症，从而导致器官功能障碍(HoldgateN.和St.ClairE.W.,F1000Research.[F1000研究]141210.12688/f1000research.8352.1)。多发性硬化症(MS)的特征是大脑和脊髓中的神经细胞脱髓鞘以及中枢神经系统(CNS)炎症。银屑病是表现为皮肤红斑、发痒的自身免疫性疾病。类风湿性关节炎(RA)是关节滑膜组织的炎性障碍，其特征在于持续性滑膜炎以及关节软骨和骨骼的破坏。该损害可进展为影响许多机体系统。狼疮肾炎与系统性红斑狼疮相关，并导致肾脏炎症。一旦发炎，肾脏会泄漏蛋白质，并最终可导致衰竭。葡萄膜炎是一组攻击并可破坏眼组织，导致视力丧失的炎性疾病。另外，急性和慢性促炎状态与个体的多种疾病相关并且可能是其原因。据信，与慢性炎症相关的疾病的具体实例包括1型和2型糖尿病、慢性肾疾病(CKD，包括例如由糖尿病、糖尿病肾病和高血压引起的CKD)、动脉粥样硬化、阿尔茨海默氏病、癌症以及此类疾病的相关并发症，包括心脏病、高血压、贫血、心包炎、肾性骨营养不良等。像自身免疫性疾病一样，在与慢性炎症相关的疾病中，机体似乎出现过度、持续的促炎应答，这可导致衰弱和通常致命的合并症。自身免疫性疾病的病因尚不完全清楚。从机理上讲，每种自身免疫性疾病的根本原因是持续的自身免疫性应答，这种应答由复杂的调节系统促进(和/或不受复杂的调节系统抑制)，这些调节系统不断补充自身反应性免疫细胞。类似的机制似乎在非自身免疫性慢性炎性疾病中也起作用。由于这一原因，自身免疫性疾病中的治疗性干预以及针对慢性炎症的治疗性干预已靶向多种调节系统、信号级联及其组成成分。一类推定的治疗性靶标包括酪氨酸激酶受体(TKR)，这些酪氨酸激酶受体是结合不同的生长因子和蛋白质以调节细胞稳态的跨膜受体。超过五十种已知的人类TKR被分为20种不同的类别，这些类别由其遗传系统发育定义(RobinsD.R.等人,Oncogene.[癌基因](2000)19:5548-5557；LemmonM.A.和SchlessingerJ.Cell.[细胞](2010)141:1117-1134)。TKRIII类的特征是在细胞外部分存在含有70至100个亲水残基的五至七个免疫球蛋白样结构域。在III类TKR中，麦克唐纳猫肉瘤(FMS)样酪氨酸激酶3受体(FLT3)是在人干细胞、造血细胞前体、树突状细胞、活化的T细胞和B细胞、单核细胞及小胶质细胞上表达的膜结合受体。FLT3结合FLT3配体(FLT3L)，该FLT3配体是由多种细胞类型(包括活化的T细胞、活化的内皮和骨髓基质细胞)表达的造血细胞因子。FLT3L被表达为细胞表面和分泌的同源二聚体两者，并通过其同源受体FLT3发出信号。FLT3在细胞表面上以单体表达，并在与FLT3L连接后被活化。连接FLT3L后，FLT3二聚化、自磷酸化并活化信号传导途径，包括RAS/细胞外信号调节激酶(ERK)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、以及信号转导子和转录激活子(STAT)3和5。自磷酸化后，二聚化的FLT3被内化和降解。FLT3L是响应于炎性信号，特别是□链细胞因子IL-2、IL-7和IL-15而产生的，并且它与FLT3的相互作用主要通过其在DC的分化、增殖和存活中的作用来驱动炎性过程。激活后，FLT3信号传导在T细胞和B细胞存活中也具有推定的作用，据报道这两种细胞类型均会瞬时上调受体(AstierAL等人,J.Immunology.[免疫学杂志]2010v184:685-93和Tobon等人,Arthritis&Rheumatism.[关节炎与风湿病]2010；62(11):3447-56)。另外，尽管此项观察是基于小鼠数据(GuimondM等人,J.Immunology[免疫学杂志]2010；184:2769-75)且尚未在人类中得到证实，但据认为NK细胞存活通过其对DC衍生的IL-15的需求而间接依赖于FLT3L。DC在炎症中特别受关注，因为它们是免疫系统的前哨，从炎症部位迁移到淋巴结并启动适应性免疫应答，最终需要该适应性免疫应答来产生自身免疫性疾病。广义上讲，DC有两个子集：髓样/经典树突状细胞(cDC)和浆细胞样树突状细胞(pDC)。cDC产生炎性细胞因子(例如，IFNI-III、IL-23、IL-12、IL-6和IL-1□)，在共刺激的情况下将抗原呈递给T细胞，并分泌趋化因子，这些趋化因子将细胞募集到炎症部位并确保它们根据关键的细胞间相互作用的需要共定位。通过这些机制，cDC刺激嗜中性粒细胞、B细胞、T细胞和NK细胞，从而导致NETosis、自身抗体产生、IL-17产生、以及其他炎性细胞因子产生。pDC是I型IFN的主要来源，I型IFN是先天应答中的关键细胞因子，其可增强免疫系统的所有臂的活化。干燥综合征患者的唾液腺表现出FLT3和FLT3L在浸润性B细胞上的表达(Tobon等人Arthritis&Rheumatism.[关节炎与风湿病](2010)62(11):3447-3456)。另外，干燥综合征患者表现出表达FLT3的B细胞在循环中的频率增加，并且与表达FLT3L的人唾液细胞共培养时，其存活率有所提高。患有MS的个体在慢性病变和活动性病变以及灰质和白质中表达FLT3蛋白(DeBoyC.A.等人ExpMolPathol.[实验分子病理学](2010)；89(2):109-116)。另外，FLT3与未成熟DC共定位于血管周脑中，表明FLT3阳性DC浸入患有MS的个体的脑中(Deboy等人)。与健康个体相比，在RA中，滑液FLT3L水平升高。另外，来自RA患者的单核细胞、NK细胞和DC表达高水平的FLT3L(RamosM.等人ArthritisResTher.[关节炎研究与治疗](2013)15(6):R209)。而且，据报道SLE、肌炎、原发性干燥综合征、MS、葡萄膜炎和RA的血清及炎性部位FLT3L水平升高(Andersson等人PLoSOne[公共科学图书馆·综合](2012)7:e47668；DeBoy等人ExpandMolPath[实验分子病理学](2010)89:109-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种与FLT3L特异性结合的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含一组互补决定区(CDR)：HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中该HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包含以下的氨基酸序列：/n(a)分别为SEQ ID NO:29、30、31、32、33和34；或/n(b)分别为SEQ ID NO:29、30、31、35、33和34；或/n(c)分别为SEQ ID NO:29、36、37、32、33和38。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180214 US 62/6305711.一种与FLT3L特异性结合的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含一组互补决定区(CDR)：HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中该HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3包含以下的氨基酸序列：
(a)分别为SEQIDNO:29、30、31、32、33和34；或
(b)分别为SEQIDNO:29、30、31、35、33和34；或
(c)分别为SEQIDNO:29、36、37、32、33和38。


2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中每个VH和VL包含三个CDR和四个框架区(FW)，从氨基末端至羧基末端按下列顺序排列：FW1、CDR1、FW2、CDR2、FW3、CDR3和FW4，其中该VH和VL区具有如下氨基酸序列，该氨基酸序列与以下具有至少95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性：
(a)分别为SEQIDNO:1和SEQIDNO:2；或
(b)分别为SEQIDNO:3和SEQIDNO:4；或
(c)分别为SEQIDNO:5和SEQIDNO:6。


3.如权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其中该VH的CDR(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和该VL的CDR(LCDR1、LCDR2和LCDR3)由以下的氨基酸序列组成：
(a)分别为SEQIDNO:29、30、31、32、33和34；或
(b)分别为SEQIDNO:29、30、31、35、33和34；或
(c)分别为SEQIDNO:29、36、37、32、33和38。


4.如权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其中该VH和VL包含以下的氨基酸序列：
(a)分别为SEQIDNO:1和SEQIDNO:2；或
(b)分别为SEQIDNO:3和SEQIDNO:4；或
(c)分别为SEQIDNO:5和SEQIDNO:6。


5.如权利要求4所述的抗体或抗原结合片段，该抗体或抗原结合片段包含：
(a)具有包含SEQIDNO:61的氨基酸序列的重链区以及具有包含SEQIDNO:62的氨基酸序列的轻链区；或
(b)具有包含SEQIDNO:65的氨基酸序列的重链区以及具有包含SEQIDNO:66的氨基酸序列的轻链区；或
(c)具有包含SEQIDNO:69的氨基酸序列的重链区以及具有包含SEQIDNO:70的氨基酸序列的轻链区。


6.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段抑制FLT3L介导的人干细胞、造血细胞前体、树突状细胞、活化的T细胞和B细胞、单核细胞、或小胶质细胞上膜结合FLT3的活化。


7.如权利要求6所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或其抗原结合片段未特异性结合人干细胞因子(huSCF)和人集落刺激因子(huCSF1)中的至少一种。


8.如权利要求6所述的抗体或其片段，其中该抗体或其抗原结合片段未特异性结合huSCF抑或huCSF1。


9.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段是单克隆抗体、重组抗体、人抗体、人源化抗体、或嵌合抗体。


10.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段进一步包含选自下组的重链免疫球蛋白恒定结构域，该组由以下组成：
(a)IgA恒定结构域；
(b)IgD恒定结构域；
(c)IgE恒定结构域；
(d)IgG1恒定结构域；
(e)IgG2恒定结构域；
(f)IgG3恒定结构域；
(g)IgG4恒定结构域；和
(h)IgM恒定结构域。


11.如权利要求10所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段包含IgG1恒定结构域。


12.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗体或抗原结合片段进一步包含选自下组的轻链免疫球蛋白恒定结构域，该组由以下组成：
(a)Igκ恒定结构域；和
(b)Igλ恒定结构域。


13.如前述权利要求中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中该抗原结合蛋白包含人IgG1重链恒定结构域和人λ轻链恒定结构域。

【专利技术属性】
技术研发人员：A·汉森，肖晓东，P·帕夫利克，Y·陈，R·埃廷格尔，
申请(专利权)人：维埃拉生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US