一种抗人PD-1的单克隆抗体制剂、联合用药物及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种稳定的抗人PD‑1抗体的药物制剂、联合用药物及其用途。所述药物制剂含有抗人PD‑1的单克隆抗体、稳定剂、缓冲剂和表面活性剂。本发明专利技术的抗人PD‑1抗体的药物制剂可以有效的抑制抗体的聚集和脱酰胺作用，从而阻止抗体蛋白的降解，得到稳定的药物制剂。本发明专利技术的联合用药物是将所述抗人PD‑1抗体的药物制剂和其他额外的治疗剂组合使用，以及将所述药物制剂或所述联合用药物用于制备抗肿瘤药物中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种抗人PD-1的单克隆抗体制剂、联合用药物及其用途本申请要求于2018年4月28日提交的中国专利申请CN201810400754.4的优先权。上述申请的全部内容通过引用并入本文。
本专利技术涉及一种稳定的抗人PD-1的单克隆抗体的药物制剂、联合用药物及其用途，属于生物

技术介绍
肿瘤的免疫逃逸机制与机体对肿瘤的免疫应答之间存在着极为复杂的关系。肿瘤免疫治疗早期，肿瘤特异性的杀伤性T细胞是有其生物活性的，但是，随着肿瘤的不断生长，后期便失去了杀伤的功能。因此，肿瘤免疫治疗是为了最大限度的提高患者自身对肿瘤的免疫系统反应，它不但要在体内激活原有的免疫系统反应，更要维持免疫系统反应的持续时间和反应强度，才是免疫治疗肿瘤的关键。程序性死亡因子1(programmeddeath-1，PD-1)，也称为CD279，是一种在调节免疫系统的刺激性与抑制性信号之间的平衡和维持外周耐受性中具有至关重要作用的细胞表面受体。其为与CD28具有同源性的免疫球蛋白超家族的抑制性成员。PD-1的结构为单体I型跨膜蛋白，其由一个免疫球蛋白可变区样细胞外结构域以及含有免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)和免疫受体酪氨酸转换基序(ITSM)的细胞质结构域组成。PD-1主要表达在活化的T细胞、B细胞和髓细胞上。PD-1具有两个已知的配体：PD-L1(B7-H1，CD274)和PD-L2(B7-DC，CD273)，它们为B7家族的细胞表面表达的成员。这两个配体已被鉴定为与PD-1特异性相互作用，诱导细胞内信号转导，该细胞内信号转导抑制CD3及CD28介导的T细胞激活，继而削弱T细胞活性，例如，减少细胞增殖、IL-2与IFN-γ分泌，以及其他生长因子及细胞因子分泌。因此，阻断PD-L1/PD-1之间的结合就成为了肿瘤免疫治疗领域备受关注的药物靶点。抗PD-1的抗体能够特异性与PD-1结合并阻断其与受体的相互作用，从而切断肿瘤细胞表面表达的PD-L1与T细胞上PD-1的结合抑制，达到抗癌目的。此外，抗PD-1的抗体与其他治疗方法的联合使用，也在临床实践中获得了突破性的进展。其他治疗方法，包括放疗、化疗或除PD-1以外的其他免疫检查点(如CTLA-4等)的抑制剂等。虽然现有技术中已经公开了若干PD-1抗体，但追求临床效果更优的新抗体一直是肿瘤免疫领域的热点。抗体药物的主要剂型就是注射剂，CN103429264A、CN106390115A和CN107334728A等专利申请均公开了PD-1抗体的制剂，但是，不同的PD-1抗体的氨基酸序列组成不同，导致其理化性质和高级构象也存在差异，因此，现有技术已有的剂型组成难以适用于所有的PD-1抗体。为了使得特定序列结构的PD-1抗体能够适于临床应用，有必要针对特定的抗体进行制剂的开发研究。同时，还需要根据特定的PD-1抗体制剂研究其与其他治疗剂组合进行联合用药的技术效果。专利技术概述为了追求更佳的临床效果，专利技术人通过文库筛选获得了一种相较于BMS公司的Nivolumab(商品名Opdivo)技术效果更优的抗人PD-1的单克隆抗体(单抗)，命名为ZMR01。在获得单抗ZMR01的基础上，进一步地对ZMR01的制剂处方进行了大量探索性研究，发现组氨酸-醋酸缓冲剂对阻止单抗ZMR01的聚集和降解有明显作用；同时，还发现聚山梨酯20在药物制剂中用作助溶剂，对提高药物溶解度、增强药物的药理作用或减少副作用有明显益处；另外，还意外地发现单抗ZMR01较为稳定的pH范围是4.5-5.5。综上，本专利技术提供了一种针对特定序列的抗人PD-1的单克隆抗体(如ZMR01)适用的、且能稳定保存所述单抗的溶液制剂，该制剂能够充分防止单抗ZMR01蛋白聚集、降解、氧化或者变性等，从而保持其有效组分的生物学活性，适合于临床使用。进一步地，在得到单抗ZMR01药物制剂的基础上，对该制剂的药物学功能做了深入研究，发现该制剂具备良好的抗肿瘤活性，并且，该制剂与其他治疗剂联用，特别是与抗VEGF单抗联用相较于单独使用该制剂具有更好的抗肿瘤效果。本专利技术的一个目的在于提供一种稳定的适用于特定序列的抗人PD-1的单克隆抗体(如ZMR01)的溶液制剂及其用途。本文中以ZMR01为例来描述本专利技术所用的抗人PD-1单抗。除非是在实施例中或者另外指出，当提到ZMR01时是指本专利技术所用的具有特定序列的抗人PD-1单克隆抗体。本专利技术的稳定的溶液制剂含有单抗ZMR01或其抗原结合片段和缓冲剂。所述溶液制剂还可以含有稳定剂和/或表面活性剂。本专利技术所述的溶液制剂中，所述的单抗ZMR01或其抗原结合片段的抗体重链可变区HCDR序列依次为：SEQIDNO:1，SEQIDNO:2，SEQIDNO:3；以及，抗体轻链可变区LCDR序列依次为：SEQIDNO:4，SEQIDNO:5，SEQIDNO:6。所述氨基酸序列如下表所示：进一步优选的，单抗ZMR01具有SEQIDNO:7的重链可变区氨基酸序列和SEQIDNO:8的轻链可变区氨基酸序列。再进一步优选的，单抗ZMR01具有SEQIDNO:9的重链氨基酸序列和SEQIDNO:10的轻链氨基酸序列。所述单抗ZMR01在制剂中的浓度优选20-30mg/ml，最优选25mg/ml。本专利技术所述的缓冲剂选自组氨酸-盐酸缓冲剂、醋酸-醋酸钠缓冲剂、组氨酸-醋酸缓冲剂；进一步优选的药学上可接受的缓冲剂为组氨酸-醋酸缓冲剂；缓冲剂的浓度为5-20mM，最优选10mM。本专利技术所述的溶液制剂的pH范围4.5-6.0，优选pH范围是4.5-5.5，最优选pH5.2。本专利技术所述的稳定剂为蔗糖或甘露醇或海藻糖，优选为蔗糖，浓度为70-90mg/ml，最优选90mg/ml。本专利技术所述的表面活性剂为聚山梨酯20或聚山梨酯80，浓度为0.1-0.5mg/ml，最优选聚山梨酯20，浓度为0.2mg/ml。本专利技术所述的稳定的溶液制剂是一种可注射的药物制剂。在本专利技术的一个实施方案中，所述稳定的溶液制剂包含单抗ZMR01或其抗原结合片段、缓冲剂、蔗糖和表面活性剂，任选包括水。在本专利技术的一个实施方案中，所述稳定的溶液制剂包含单抗ZMR01或其抗原结合片段、缓冲剂、蔗糖和聚山梨酯20，任选包括水。在本专利技术的一个实施方案中，所述稳定的溶液制剂包含单抗ZMR01或其抗原结合片段、组氨酸-醋酸缓冲剂、蔗糖和聚山梨酯20。在本专利技术的一个实施方案中，所述稳定的溶液制剂由20-30mg/ml单抗ZMR01或其抗原结合片段、5-20mM组氨酸-醋酸缓冲剂、70-90mg/ml蔗糖、0.1-0.5mg/ml聚山梨酯20组成，pH范围是4.5-5.5。在本专利技术的一个实施方案中，所述稳定的溶液制剂包含：单抗ZMR01和(1)90mg/ml蔗糖，10mM组氨酸-醋酸缓冲液和0.2mg/ml的聚山梨酯20或者(2)90mg/ml蔗糖，15mM组氨酸-醋酸缓冲液和0.4mg/ml的聚山梨酯20或者(3)90mg/ml蔗糖，20m本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗人PD-1的单克隆抗体的溶液制剂，其包含抗人PD-1的单克隆抗体或其抗原结合片段和缓冲剂；其中所述抗人PD-1的单克隆抗体或其抗原结合片段的重链可变区的3个CDR即HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列依次为：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3；轻链可变区的3个CDR即LCDR1、LCDR2和LCDR3的氨基酸序列依次为：SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6；所述缓冲剂选自组氨酸-盐酸、醋酸-醋酸盐和组氨酸-醋酸。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180428 CN 2018104007544一种抗人PD-1的单克隆抗体的溶液制剂，其包含抗人PD-1的单克隆抗体或其抗原结合片段和缓冲剂；其中所述抗人PD-1的单克隆抗体或其抗原结合片段的重链可变区的3个CDR即HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列依次为：SEQIDNO:1、SEQIDNO:2和SEQIDNO:3；轻链可变区的3个CDR即LCDR1、LCDR2和LCDR3的氨基酸序列依次为：SEQIDNO:4、SEQIDNO:5和SEQIDNO:6；所述缓冲剂选自组氨酸-盐酸、醋酸-醋酸盐和组氨酸-醋酸。


如权利要求1所述的溶液制剂，其中所述抗人PD-1的单克隆抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:7，轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:8。


如权利要求1或2所述的溶液制剂，其中所述抗人PD-1的单克隆抗体的重链的氨基酸序列为SEQIDNO:9，轻链的氨基酸序列为SEQIDNO:10。


如权利要求1-3任一项所述的溶液制剂，其中所述缓冲剂为组氨酸-醋酸缓冲剂。


如权利要求1-4任一项所述的溶液制剂，其还包含稳定剂。


如权利要求1-5任一项所述的溶液制剂，其还包含稳定剂，所述稳定剂选自蔗糖、甘露醇和海藻糖，优选地所述稳定剂为蔗糖。


如权利要求1-6任一项所述的溶液制剂，其还包含表面活性剂。


如权利要求1-7任一项所述的溶液制剂，其还包含表面活性剂，所述表面活性剂选自聚山梨酯20和聚山梨酯80，优选地是聚山梨酯20。


如权利要求1-8任一项所述的溶液制剂，其pH为4.5-6.0，优选为4.5-5.5。


如权利要求1-9任一项所述的溶液制剂，其包含选自蔗糖、组氨酸-醋酸缓冲剂和聚山梨酯20中的任意两种或三种。


如权利要求1-10任一项所述的溶液制剂，其包含20-30mg/ml的抗人PD-1的单克隆抗体。


如权利要求1-11任一项所述的溶液制剂，其包含70-90mg/ml的蔗糖。


如权利要求1-12任一项所述的溶液制剂，其包含5-20mM的组氨酸-醋酸缓冲剂。


如权利要求1-13任一项所述的溶液制剂，其包含0.1-0.5mg/ml的聚山梨酯20。


如权利要求1-14任一项所述的溶液制剂，其包含20-30mg/ml的抗人PD-1的单克隆抗体、70-90mg/ml的蔗糖、5-20mM的组氨酸-醋酸缓冲剂和0.1-0.5mg/ml的聚山梨酯20，溶液的pH为4.5-5.5。


如权利要求1-15任一项所述的溶液制剂，其包含抗人PD-1的单克隆抗体和
(1)90mg/ml蔗糖，10mM组氨酸-醋酸缓冲液和0.2mg/ml的聚山梨酯20；或者
(2)90mg/ml蔗糖，15mM组氨酸-醋酸缓冲液和0.4mg/ml的聚山梨酯20；或者
(3)90mg/ml蔗糖，20mM组氨酸-醋酸缓冲液和0.1mg/ml的聚山梨酯20；或者
(4)80mg/ml蔗糖，10mM组氨酸-醋酸缓冲液和0.4mg/ml的聚山梨酯20；或者
(5)80mg/ml蔗糖，15mM组氨酸-醋酸缓冲液和0.2mg/ml的聚山梨酯20；或者
(6)80mg/ml蔗糖，20mM组氨酸-醋酸缓冲液和0.1mg/ml的聚山梨酯20；或者
(7)70mg/ml蔗糖，10mM组氨酸-醋酸缓冲液和0.1mg/ml的聚山梨酯20；或者
(8)70mg/ml蔗糖，15mM组氨酸-醋酸缓冲液和0.2mg/ml的聚山梨酯20；或者
(9)70mg/ml蔗糖，20mM组氨酸-醋酸缓冲液和0.4mg/ml的聚山梨酯20；或者
(10)60mg/ml蔗糖，10mM组氨酸-醋酸缓冲液，0....

【专利技术属性】
技术研发人员：周兵兵，孙丽霞，张乐，王克波，李敏昱，王庆民，吴晓冉，曹传增，郑庆梅，赵春媛，赵洪令，张美娟，
申请(专利权)人：齐鲁制药有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37