一种细胞裂解液及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种细胞裂解液及其应用。该细胞裂解液由A组分和B组分组成；其中，A组分由3～600mmol/L碱溶液和0.1mmol/L～7mmol/L SDS组成；B组分由3～600mmol/L Tris、8～1100mmol/L氯化盐和0.5～110mmol/L EDTA组成，pH为7～10；使用时A组分与B组分的体积比为(3～50)：1。该细胞裂解液不包含氯仿等有毒试剂，由常见的试剂组成，成本低，并且操作步骤简单，可快速将细胞中的核酸释放出来，大大节省核酸提取时间；并且可从微量的细胞(细胞个数小于等于2x10

【技术实现步骤摘要】
一种细胞裂解液及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种细胞裂解液及其应用。
技术介绍
基因编辑技术是对细胞中的DNA序列进行精准操作从而改变细胞命运和生物体特征的技术，该技术为提高人类对于遗传学的理解以及遗传疾病的治疗提供了重要的工具。尤其是CRISPR-Cas9基因编辑技术的专利技术，为基因编辑技术的发展带来了革命性的变化。CRISPR-Cas9技术使得基因编辑操作变得简单快捷，但在筛选基因编辑突变体方面，尤其是细胞基因编辑突变体环节，仍旧费时费力。为了获得纯合的基因编辑细胞株，需要对基因编辑细胞进行单克隆筛选，将单个细胞接种到96孔微孔板中培养，经过48孔板，24孔板，12孔板，6孔板逐步扩增，再取其一部分进行核酸提取，做基因型鉴定。细胞核酸的提取以离心柱法和磁珠法居多，酚氯仿抽提因其试剂有毒性较少使用，且这些方法都无法从微量的细胞中提取出足够量的DNA用于做PCR基因型鉴定，需要细胞扩增到6孔以上的量方可进行抽提，等待细胞扩增的时间较长且步骤繁琐。专利文献CN108841729A公开了一种用于真菌和细菌的细胞裂解液，所述细胞裂解液由NaOH、十二烷基硫酸钠(SDS)和蒸馏水组成，其中，NaOH浓度为4mmol/L，SDS重量百分比含量为2％；专利文献CN107574166A公开了一种用于提取大豆种子基因组DNA的细胞裂解液，其中，所述细胞裂解液为含有0.015～0.025g/mL的SDS，0.04～0.06mol/L的Tris-HCl，0.04～0.06mol/L的EDTA，以及0.14～0.16mol/L的NaCl的纯水溶液；所述细胞裂解液的pH值为8；但是上述细胞裂解液均无法从微量的细胞中提取出足够量的DNA用于做PCR基因型鉴定。
技术实现思路
为了克服现有细胞裂解液无法从微量的细胞中提取出足够量的DNA用于PCR基因型鉴定的不足，本专利技术第一个方面的目的，在于提供一种细胞裂解液。本专利技术的第二方面的目的，在于提供上述细胞裂解液在提取核酸中的应用。本专利技术的第三方面的目的，在于提供一种提取核酸的方法。本专利技术的第四方面的目的，在于提供一种包含上述细胞裂解液的试剂盒。本专利技术的第五方面的目的，在于提供第一方面的细胞裂解液或第四方面的试剂盒在PCR鉴定中的应用。为了实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案是：本专利技术的第一个方面，提供一种细胞裂解液，由A组分和B组分组成；其中，A组分由3～600mmol/L碱溶液和0.1mmol/L～7mmol/LSDS(十二烷基硫酸钠)组成；B组分由3～600mmol/LTris、8～1100mmol/L氯化盐和0.5～110mmol/LEDTA组成，pH为7～10。优选的，一种细胞裂解液，由A组分和B组分组成；其中，A组分由5～200mmol/L碱溶液和0.2mmol/L～3.5mmol/LSDS(十二烷基硫酸钠)组成；B组分由5～500mmol/LTris、10～1000mmol/L氯化盐和1～100mmol/LEDTA组成，pH为7～9。进一步优选的，一种细胞裂解液，由A组分和B组分组成；其中，A组分由100mmol/L碱溶液和2.5mmol/L～3.5mmol/LSDS(十二烷基硫酸钠)组成；B组分由200mmol/LTris、150mmol/L氯化盐和20mmol/LEDTA组成，pH为8。优选的，所述碱为NaOH。优选的，所述氯化盐为NaCl或KCl。优选的，使用时A组分与B组分的体积比为(3～50)：1；进一步优选的，使用时A组分与B组分的体积比为(4～50)：1。本专利技术的第二方面，提供上述细胞裂解液在提取核酸中的应用。本专利技术的第三方面，提供一种提取核酸的方法，包括如下步骤：1)将待提取样品与上述细胞裂解液的A组分混合，得到混合液A；2)将混合液A置于80℃～100℃孵育5～20min；3)将孵育后的混合液A与上述细胞裂解液的B组分混合。本专利技术的第四方面，提供一种包含第一方面的细胞裂解液的试剂盒。一种试剂盒，包含上述细胞裂解液。所述试剂盒还包含2xTaqMix、无菌水(ddH2O)。所述2xTaqMix包含TaqDNA聚合酶、MgCl2、dNTPs。本专利技术的第五方面，提供第一方面的细胞裂解液或第四方面的试剂盒在PCR鉴定中的应用。优选的，所述PCR鉴定为单克隆细胞PCR鉴定；单克隆细胞即由1个细胞增殖获得的细胞团。本专利技术的有益效果是：本专利技术提供的细胞裂解液不包含氯仿等有毒试剂，由常见的试剂组成，成本低，并且操作步骤简单，可快速将细胞中的核酸释放出来，大大节省核酸提取时间；并且可从微量的细胞(细胞个数小于等于2x104个)中提取出足够量的核酸用于PCR鉴定。附图说明图1是效果实施例1中A组分与B组分不同的添加方式处理后PCR反应后的琼脂糖凝胶电泳图。图2是实施例4～7的裂解液处理后PCR反应后的琼脂糖凝胶电泳图。图3是实施例3的细胞裂解液、对比例1的细胞裂解液及10倍稀释后的对比例1的细胞裂解液处理后PCR反应后的琼脂糖凝胶电泳图：其中，A为对比例1的细胞裂解液处理后PCR反应后的琼脂糖凝胶电泳图；B为10倍稀释后的对比例1的细胞裂解液处理后PCR反应后的琼脂糖凝胶电泳图；C为实施例3的细胞裂解液处理后PCR反应后的琼脂糖凝胶电泳图。图4是实施例3的细胞裂解液、对比例1的细胞裂解液及10倍稀释后的对比例1的细胞裂解液处理后PCR成功率图。图5是实施例3、对比例2、对比例3的细胞裂解液处理后PCR反应后的琼脂糖凝胶电泳图。具体实施方式以下通过具体的实施例对本专利技术的内容作进一步详细的说明。实施例1一种细胞裂解液一种细胞裂解液，由A组分和B组分组成，A组分和B组分的原料组成如下：A组分：5mmol/LNaOH、0.2mmol/L十二烷基硫酸钠；B组分：5mmol/LTris、10mmol/LKCl、1mmol/LEDTA，pH7.0；使用时A组分与B组分的体积比为3:1。实施例2一种细胞裂解液一种细胞裂解液，由A组分和B组分组成，A组分和B组分的原料组成如下：A组分：100mmol/LNaOH、2.5mmol/L十二烷基硫酸钠；B组分：200mmol/LTrisl、150mmol/LKCl、20mmol/LEDTA，pH8.0；使用时A组分与B组分的体积比为3:1。实施例3一种细胞裂解液一种细胞裂解液，由A组分和B组分组成，A组分和B组分的原料组成如下：A组分：200mmol/LNaOH、3.5mmol/L十二烷基硫酸钠；B组分：500mmol/LTris、1000mmol/LKCl、100mmol/LEDTA，pH9.0；使用时A组分与B组分的体积比为3:1。实施例4本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细胞裂解液，其特征在于：所述细胞裂解液由A组分和B组分组成；/n其中，A组分由3～600mmol/L碱溶液和0.1mmol/L～7mmol/L SDS组成；/nB组分由3～600mmol/L Tris、8～1100mmol/L氯化盐和0.5～110mmol/L EDTA组成，pH为7～10。/n

【技术特征摘要】
1.一种细胞裂解液，其特征在于：所述细胞裂解液由A组分和B组分组成；
其中，A组分由3～600mmol/L碱溶液和0.1mmol/L～7mmol/LSDS组成；
B组分由3～600mmol/LTris、8～1100mmol/L氯化盐和0.5～110mmol/LEDTA组成，pH为7～10。


2.根据权利要求1中所述的细胞裂解液，其特征在于：
所述A组分由5～200mmol/L碱溶液和0.2mmol/L～3.5mmol/LSDS组成；
所述B组分由5～500mmol/LTris、10～1000mmol/L氯化盐和1～100mmol/LEDTA组成，pH为7～9。


3.根据权利要求1或2所述的细胞裂解液，其特征在于：
使用时所述A组分与所述B组分的体积比为(3～50)：1。


4.根据权利要求3所述的细胞裂解液，其特征在于：
使用时所述A组分与所述B组分的体...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑丹丹，黄文静，叶海峰，
申请(专利权)人：广州源井生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44