一种核酸样本保存液及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种核酸样本保存液及其制备方法和应用，属于生物医学技术领域。所述核酸样本保存液由醋酸钠、EDTA钠盐、Tris、蛋白酶K、SDS、Triton X‑100、SLS和DEPC三重蒸馏水组成。本发明专利技术通过将采集到的样本与病毒裂解液和病毒核酸保存液进行充分混合，实现对样本中病毒的灭活，同时有效保证样本中的病毒核酸完整性，采集后的标本能够在常温条件下运输和长期保存。它可瞬间裂解病原体释放核酸，保护剂则可防止核酸被降解，因此具有良好的实际生产应用之价值。

【技术实现步骤摘要】
一种核酸样本保存液及其制备方法和应用
本专利技术属于生物医学
，具体涉及一种核酸样本保存液及其制备方法和应用。
技术介绍
公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。病毒是一种结构比较简单的微生物，其办法完成自我复制的过程，需要借助宿主细胞，利用宿主的营养才能完成病毒复制。比较常见的引起人类感染的病毒有非常多，可以引起呼吸道病变，比如感冒病毒、流感病毒、新冠病毒和SARS等冠状病毒。在临床检测的过程中，往往需要短期保存和运输，需要一种采样后的样本保护性液体介质，在我国通常叫做病毒保存液(VTM液或UTM液)。通常核酸检测时，样品采集处不能直接进行核酸PCR，需要对拭子采集的样品进行转运送检，就需要添加VTM。样本保存液可用于新冠病毒、流感、禽流感、手足口病、麻疹等鼻咽部病原体标本采集、保存及运送。保存的病毒RNA样本可广泛应用于基因检测、酶联免疫法检测(ELISA)、PCR检测等。目前样本保存液有灭活型和非灭活型两种，样本保存液类型不同针对的作用就会有所不同。对于传染性比较强的病毒，由于核酸本身存在容易降解的特性，专利技术人发现，现有常规的采样保存液无法保证样本中核酸不降解，同时无法及时灭活样本中可能存在的强传染性的病毒，导致样本在保存、运输及开盖检测时造成二次传播，对医护人员造成极高的感染风险。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供一种核酸样本保存液及其制备方法和应用。本专利技术通过将采集到的样本与病毒裂解液和病毒核酸保存液进行充分混合，实现对样本中病毒的灭活，同时有效保证样本中的病毒核酸完整性，采集后的标本能够在常温条件下运输和长期保存。它可瞬间裂解病原体释放核酸，保护剂则可防止核酸被降解。具体的，本专利技术涉及以下技术方案：本专利技术的第一个方面，提供一种核酸样本保存液，所述保存液其组成成分包括钠盐、蛋白溶解酶、表面活性剂、生物缓冲剂和水。本专利技术的第二个方面，提供上述核酸样本保存液的制备方法，所述制备方法包括：将上述各组分混合即得。本专利技术的第三个方面，提供上述核酸样本保存液在体外核酸样本保存中的应用。本专利技术制得的核酸样本保存液适用于采样后咽拭子、鼻拭子或特定部位组织样本的保存，储存的样本可用于后续的核酸提取或纯化等临床实验。所述核酸包括核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)。特别适合于病毒(如RNA病毒)核酸样本的保存。以上一个或多个技术方案的有益技术效果：上述技术方案制得的核酸样本保存液同时具有病毒裂解和核酸保存双重功能，能够实现对样本中病毒的灭活，同时有效保证样本中的病毒核酸完整性，采集后的标本能够在常温条件下运输和长期保存。它可瞬间裂解病原体释放核酸，而保护剂成分可防止核酸被降解，经试验验证，常温保存3个月后，提取获得的RNA样品纯度依然很高，符合LAMP及PCR方法的要求，达到细胞保存后的RNA质量要求，因此具有良好的实际应用之价值。附图说明构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。图1为本专利技术实施例保存前后提取的RNA浓度对比图。图2为本专利技术实施例PCR方法检测STC-1基因的表达变化图。图3为本专利技术实施例保存三个月后PCR方法检测STC-1基因的敏感性。具体实施方式应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。结合具体实例对本专利技术作进一步的说明，以下实例仅是为了解释本专利技术，并不对其内容进行限定。如果实施例中未注明的实验具体条件，通常按照常规条件，或按照销售公司所推荐的条件；实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可通过商业途径购买得到。如前所述，现有常规的采样保存液无法保证样本中核酸不降解，同时无法及时灭活样本中可能存在的强传染性的病毒，导致样本在保存、运输及开盖检测时造成二次传播，对医护人员造成极高的感染风险。有鉴于此，本专利技术的一个具体实施方式中，提供一种核酸样本保存液，所述保存液其组成成分包括钠盐、蛋白溶解酶、表面活性剂、生物缓冲剂和水。本专利技术的又一具体实施方式中，所述钠盐为醋酸钠和EDTA钠盐中任意一种或多种。本专利技术的又一具体实施方式中，所述蛋白溶解酶包括蛋白酶K。本专利技术的又一具体实施方式中，所述表面活性剂为SDS(十二烷基硫酸钠)、TritonX-100(聚乙二醇辛基苯基醚)和SLS(月桂基硫酸钠)中的任意一种或多种。本专利技术的又一具体实施方式中，为避免引入杂质，所述水优选为DEPC三重蒸馏水。本专利技术的又一具体实施方式中，所述核酸样本保存液由以下组成成分组成：醋酸钠、EDTA钠盐、Tris、蛋白酶K、SDS、TritonX-100、SLS和DEPC三重蒸馏水。本专利技术的又一具体实施方式中，所述核酸样本保存液由以下浓度的组分组成：0.1-0.5M醋酸钠，2-6mMEDTA钠盐，2-6mMTris，0.5-2μg/ml蛋白酶K，0.1-0.5％SDS，0.1-0.5％TritonX-100，0.3-0.6％SLS，溶剂为DEPC三重蒸馏水。本专利技术通过优化各组成成分，从而使得核酸样本保存液实现对样本中病毒的灭活，同时有效保证样本中的病毒核酸完整性，采集后的标本能够在常温条件下运输和长期保存。本专利技术的又一具体实施方式中，所述核酸样本保存液由以下浓度的组分组成：0.3M醋酸钠，5mMEDTA钠盐，5mMTris，1μg/ml蛋白酶K，0.2％SDS，0.2％TritonX-100，0.5％SLS，溶剂为DEPC三重蒸馏水。本专利技术的又一具体实施方式中，提供上述核酸样本保存液的制备方法，所述制备方法包括：将上述各组分混合即得。本专利技术的又一具体实施方式中，提供上述核酸样本保存液在体外核酸样本保存中的应用。本专利技术制得的核酸样本保存液适用于采样后咽拭子、鼻拭子或特定部位组织样本的保存，储存的样本可用于后续的核酸提取或纯化等临床实验。所述核酸包括核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)。特别适合于病毒(如RNA病毒)核酸样本的保存。以下通过实施例对本专利技术做进一步解释说明，但不构成对本专利技术的限制。应理解这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。实施例一种核酸样本保存液，其由以下组分组成：0.3M醋酸钠，5mMEDTA钠盐，5mMT本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸样本保存液，其特征在于，所述保存液其组成成分包括钠盐、蛋白溶解酶、表面活性剂、生物缓冲剂和水。/n

【技术特征摘要】
1.一种核酸样本保存液，其特征在于，所述保存液其组成成分包括钠盐、蛋白溶解酶、表面活性剂、生物缓冲剂和水。


2.如权利要求1所述的核酸样本保存液，其特征在于，所述钠盐为醋酸钠和EDTA钠盐中任意一种或多种。


3.如权利要求1所述的核酸样本保存液，其特征在于，所述蛋白溶解酶包括蛋白酶K。


4.如权利要求1所述的核酸样本保存液，其特征在于，所述表面活性剂为SDS、TritonX-100和SLS中的任意一种或多种。


5.如权利要求1所述的核酸样本保存液，其特征在于，所述水为DEPC三重蒸馏水。


6.如权利要求1-5任一项所述的核酸样本保存液，其特征在于，所述核酸样本保存液由以下组成成分组成：醋酸钠、EDTA钠盐、Tris、蛋白酶K、SDS、TritonX-100、SLS和DEPC三重蒸馏水。


7.如权利要求6所述的核酸样本保存液，其特征在于，所述核酸样本保存液由以下组分组成...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜国胜，高伟，王希娣，张丹凤，任海山，陈梅英，
申请(专利权)人：山东科硕生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37