核酸编码反应制造技术

本申请涉及核酸编码反应。描述了可用于向一个、或典型地多个靶核苷酸序列掺入一个或多个衔接子和/或核苷酸标签和/或条形码核苷酸序列的方法。在具体实施方案中，产生了具有衔接子的核酸片段，例如适于用在高通量DNA测序中的核酸片段。在其他实施方案中，将有关反应混合物的信息编码到反应产物中。还描述了在制备用于应用诸如双向核酸测序中可用于扩增一个或多个靶核酸的方法和试剂盒。在具体实施方案中，本申请的方法包括另外进行双向DNA测序。还描述了通过引物延伸编码和检测和/或定量等位基因的方法。

【技术实现步骤摘要】
核酸编码反应本申请是申请日为2012年5月21日，申请号为201280033406.9，专利技术名称为“核酸编码反应”的申请的分案申请。相关申请的交叉参考本申请要求2011年5月20日提交的美国临时申请号61/519,348的权益，其通过引用全文并入本文。专利
本专利技术一般涉及掺入核酸序列到靶核酸中，例如，加入一个或多个衔接子(adaptor)和/或核苷酸标签和/或条形码核苷酸序列到靶核苷酸序列。本文描述的方法可用于，例如，用于检测和/或测序特定靶核酸的高通量检验领域中。专利技术背景在样品中检出特定核酸序列的能力已经导致诊断和预测医学、环境、食品和农业监测，分子生物学研究，以及多种其他领域中的多种新方法。对于许多应用，期望同时检测和/或分析多个样品中的许多靶核酸，所述多个样品例如，群体中的多个单独细胞。专利技术概述在某些实施方案中，本专利技术提供向包含粘末端的多个靶核酸的每个末端加入衔接子分子的方法。该方法包括(entail)退火衔接子分子到双链靶核酸分子的粘末端以产生退火的衔接子-靶核酸分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分析单颗粒中的核酸或与单颗粒缔合的核酸的方法，所述方法包括：/na)在单独反应体积中捕获颗粒，使得多个反应体积的每个包含单颗粒，其中所述单独反应体积是乳液中的液滴；/nb)从每个单独反应体积中的单颗粒中的核酸产生条形码化的反应产物或从与每个单独反应体积中的单颗粒缔合的核酸产生条形码化的反应产物，其中产生所述反应产物包括对于每个单独反应体积，使用多个不同的单链条形码化的衔接子分子将条形码化的衔接子核苷酸序列掺入到所述反应产物中，其中每个衔接子分子包含：(i)包含引物结合位点的核苷酸序列，(ii)简并尾序列，和(iii)条形码核苷酸序列，其中对于同一单独反应体积的所述多个不同的单链条形码化...

【技术特征摘要】
20110520 US 61/519,3481.一种分析单颗粒中的核酸或与单颗粒缔合的核酸的方法，所述方法包括：
a)在单独反应体积中捕获颗粒，使得多个反应体积的每个包含单颗粒，其中所述单独反应体积是乳液中的液滴；
b)从每个单独反应体积中的单颗粒中的核酸产生条形码化的反应产物或从与每个单独反应体积中的单颗粒缔合的核酸产生条形码化的反应产物，其中产生所述反应产物包括对于每个单独反应体积，使用多个不同的单链条形码化的衔接子分子将条形码化的衔接子核苷酸序列掺入到所述反应产物中，其中每个衔接子分子包含：(i)包含引物结合位点的核苷酸序列，(ii)简并尾序列，和(iii)条形码核苷酸序列，其中对于同一单独反应体积的所述多个不同的单链条形码化的衔接子分子包含相同的条形码；
c)汇集所述条形码化的反应产物；
d)使用所述结合引物结合位点的引物扩增所述条形码化的反应产物来产生用于双向DNA测序的模板；和
e)对所述条形码化的反应产物测序。


2.根据权利要求1所述的方法，其中所述颗粒是细胞。


3.根据权利要求2所述的方法，还包括在步骤a)之后且在步骤b)之前裂解所述细胞以释放细胞内容物。


4.根据权利要求2所述的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：梅甘·安德森，陈佩林，布赖恩·福勒，罗伯特·C·琼斯，菲奥娜·卡佩尔，罗纳德·列波夫斯基，安德鲁·梅，
申请(专利权)人：富鲁达公司，
类型：发明
国别省市：美国;US