一种全血基因组DNA保存剂及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种全血基因组DNA保存剂及其制备方法与应用。属于生物技术领域。所述的全血基因组DNA保存剂，包括如下按重量份计的组分：1～200份抗凝血剂，1～200份血细胞稳定剂，1～200份反应型细胞包封剂，0.1～200份pH调节剂，0.1～200份离子浓度调节剂和500～1000份无RNase纯化水。本发明专利技术的全血基因组DNA保存剂，能在室温下长期确保基因组DNA结构的完整性和理化性质的稳定性、避免基因组信息的丢失或变化；还可延长基因组样本在室温下的储存时间及远距离运输。本发明专利技术所涉及基因组DNA长期常温保存及提取方法可为疾病预防和疾病治疗以及法医刑侦等提供有力保障。

【技术实现步骤摘要】
一种全血基因组DNA保存剂及其制备方法与应用
本专利技术属于生物
，涉及生物基因样本常温保存技术，具体涉及一种全血基因组DNA保存剂及其制备方法与应用。
技术介绍
基因组DNA(genomicDNA)是指组成生物基因组的所有DNA，人体基因组DNA蕴藏人体全部的遗传信息，是遗传和物种延续的物质基础，它使后代出现与亲代相似的性状。保存人体基因组DNA样本也即保存人体的全部遗传信息。近年来，随着基因组测序技术的高速发展以及国家一系列利好政策的推动，科学家已能对基因组DNA的遗传信息和生命密码进行全面的分析和解读。越来越多的研究证明，多种疾病特别是肿瘤，都是由于体细胞基因突变改变了细胞的性能，进而又改变了该组织和器官的性能，导致出现疾病症状。因此，在婴儿期以较低的成本将基因样本保存起来，待将来需要时将基因样本取出进行检测以对体细胞的突变进行监测，对预防疾病发生和疾病治疗具有重要意义。目前，已有许多基因保存公司开展个人基因样本的保存服务，现有技术大多将分离获得的基因组DNA样本贮存在超低温条件下以长期维持其理化性质及生物学活性的稳定，其保存条件苛刻，成本较高，限制了其广泛应用。因此，开发能在常温下保存基因组DNA的技术，在降低基因保存的成本的同时确保基因组DNA结构的完整性和理化性质的稳定性、避免基因组信息的丢失或变化，对该领域的发展十分必要。
技术实现思路
本专利技术的首要目的是在于提供一种全血基因组DNA保存剂。本专利技术的第二个目的是在于提供上述全血基因组DNA保存剂的制备方法。本专利技术的第三个目的是在于提供上述全血基因组DNA保存剂的应用，旨在延长现有基因组DNA的保存时间并简化保存及提取的操作步骤。本专利技术的目的通过以下技术方案实现：一种全血基因组DNA保存剂，包括如下按重量份计的组分：1～200份抗凝血剂，1～200份血细胞稳定剂，1～200份反应型细胞包封剂，0.1～200份pH调节剂，0.1～200份离子浓度调节剂和500～1000份无RNase纯化水。所述的抗凝血剂优选为1～150份，进一步优选为1～120份；更优选为1～50份。所述的抗凝血剂优选为枸橼酸钠、柠檬酸钠、肝素钠、肝素锂、乙二胺四乙酸二钾、乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠中的至少一种。所述的血细胞稳定剂优选为2～200份；进一步优选为5～200份；更优选为120～200份；更优选为120～180份。所述的血细胞稳定剂优选为甘油、羟乙基淀粉、羧甲基纤维素钠、二甲亚砜、蔗糖、聚乙烯醇、海藻糖和甜菜碱中的至少一种。所述的反应型细胞包封剂优选为1～100份；进一步优选为1～50份；更优选为5～20份。所述的反应型细胞包封剂优选为可形成纳米层的化合物；所述的纳米层优选为贵金属纳米层、硅纳米层、钛纳米层、有机纳米层和有机-无机杂化纳米层中的至少一种。所述的反应型细胞包封剂优选为可形成贵金属纳米层的四氯合金酸(HAuCl4)、四氯合金酸钾(KAuCl4)、六氯合铂酸(H2PtCl6)、六氯合铂酸钾(K2PtCl6)、三氯氨铂酸钾(KPt(NH3)Cl3)、四氯铂酸钾(K2PtCl4)、六溴铂酸钾(K2PtBr6)；可形成硅纳米层的甲基三甲氧基硅烷、甲基二乙氧基硅烷、乙基三乙氧基硅烷、甲基三乙氧基硅烷、正硅酸四乙酯(TEOS)、正硅酸四甲酯(TMOS)、双(三甲基硅烷基)乙酰胺(BSA)、3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)、3-巯丙基三甲氧基硅烷(MPTMS)、三甲基氯硅烷(TMCS)、氯三乙氧基硅烷(TECS)、辛基三甲氧基硅烷、环己基甲基二甲氧基硅烷、三甲氧基甲硅烷、三乙氧基硅烷、苄基三乙氧基硅烷、乙烯基三甲氧基硅烷、异丁基三乙氧基硅烷；可形成钛纳米层的四异丙基钛酸酯、钛酸甲酯、钛酸四乙酯、钛酸四丁酯、钛酸四丙酯；可形成其他无机纳米层的异丙醇铝、锆酸四丁酯和能够形成有机纳米层的多巴胺、鞣酸中的至少一种。进一步优选为四氯合金酸(HAuCl4)、四氯合金酸钾(KAuCl4)、六氯合铂酸(H2PtCl6)、甲基三乙氧基硅烷、正硅酸四乙酯(TEOS)、正硅酸四甲酯(TMOS)、乙烯基三甲氧基硅烷、异丁基三乙氧基硅烷、钛酸甲酯、钛酸四乙酯、钛酸四丁酯、钛酸四丙酯、异丙醇铝、锆酸四丁酯、多巴胺和鞣酸中的一种；更优选为四氯合金酸(HAuCl4)、六氯合铂酸(H2PtCl6)、甲基三乙氧基硅烷、正硅酸四乙酯(TEOS)、正硅酸四甲酯(TMOS)、钛酸四乙酯、钛酸四丁酯、钛酸四丙酯、异丙醇铝、锆酸四丁酯中的至少一种；最优选为钛酸四乙酯、六氯合铂酸(H2PtCl6)、正硅酸四乙酯(TEOS)和四氯合金酸(HAuCl4)中的至少一种。所述的pH调节剂优选为0.1～100份；进一步优选为0.1～10份；更优选为0.1～0.5。所述的pH调节剂优选为盐酸、醋酸、磷酸、硫酸、氢氧化钠、氢氧化钾、氨水和三羟甲基氨基甲烷(Tris)中的至少一种；更优选为盐酸、磷酸、醋酸、氨水中的至少一种。所述的离子浓度调节剂优选为0.1～180份；更优选为5～100份。所述的离子浓度调节剂优选为氯化钠、氯化钾、氯化铵、磷酸钠、磷酸一氢钠、磷酸二氢钠、磷酸钾、磷酸一氢钾、磷酸二氢钾和醋酸钠中的至少一种；更优选为氯化钠、磷酸一氢钠-磷酸二氢钠、醋酸钠和氯化铵中的至少一种。一种全血基因组DNA保存剂的制备方法，包括如下步骤：将抗凝血剂、血细胞稳定剂、反应型细胞包封剂、pH调节剂、离子浓度调节剂和无RNase纯化水混合，即得全血基因组DNA保存剂。所述的全血基因组DNA保存剂在全血基因组DNA的长期常温保存和提取中的应用。一种全血基因组DNA的长期常温保存方法，包括如下步骤：将上述全血基因组DNA保存剂与全血共孵育，得到基因组原位包封样本，之后将基因组原位包封样本置于室温即可长期保存。所述的全血基因组DNA保存剂与全血优选按体积比100:1～100计算。所述的共孵育优选为温度-197～37℃；时间为5min～168h；进一步优选为温度-80～37℃，时间为2～48h；更优选为温度-80℃～25℃，时间为2～24h。所述的室温优选为20～35℃；更优选为25～30℃。一种全血基因组DNA的提取方法，包括如下步骤：将上述用全血基因组DNA保存剂长期保存的基因组原位包封样本外部的包封剂降解掉，然后用基因组总DNA提取试剂盒提取基因组DNA。所述的降解包封剂的试剂优选包括酸、碱、缓冲液和螯合剂中的至少一种。所述的酸优选为氢氟酸、硫酸和王水中的至少一种。所述的缓冲液优选为氢氟酸-氟化铵缓冲液。所述的螯合剂优选为EDTA。所述的降解包封剂的试剂与基因组原位包封样本中的全血优选按体积比0.1～100:1计算；更优选按1～50:1计算。所述的将长期保存的基因组样本外部的包封剂降解掉的方法优选为利用降解包封剂的试剂破坏包封剂的结构，脱除基因组原位包封样本外部的包封层，释放出血细胞。所述的基因组总DNA提取试剂盒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种全血基因组DNA保存剂，其特征在于，包括如下按重量份计的组分：1～200份抗凝血剂，1～200份血细胞稳定剂，1～200份反应型细胞包封剂，0.1～200份pH调节剂，0.1～200份离子浓度调节剂和500～1000份无RNase纯化水。/n

【技术特征摘要】
1.一种全血基因组DNA保存剂，其特征在于，包括如下按重量份计的组分：1～200份抗凝血剂，1～200份血细胞稳定剂，1～200份反应型细胞包封剂，0.1～200份pH调节剂，0.1～200份离子浓度调节剂和500～1000份无RNase纯化水。


2.根据权利要求1所述的全血基因组DNA保存剂，其特征在于，所述的抗凝血剂为1～150份；
所述的抗凝血剂为枸橼酸钠、柠檬酸钠、肝素钠、肝素锂、乙二胺四乙酸二钾、乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠中的至少一种；
所述的血细胞稳定剂为2～200份；
所述的血细胞稳定剂为甘油、羟乙基淀粉、羧甲基纤维素钠、二甲亚砜、蔗糖、聚乙烯醇、海藻糖和甜菜碱中的至少一种；
所述的反应型细胞包封剂为1～100份；
所述的反应型细胞包封剂为可形成纳米层的化合物；所述的纳米层为贵金属纳米层、硅纳米层、钛纳米层、有机纳米层和有机-无机杂化纳米层中的至少一种。


3.根据权利要求1所述的全血基因组DNA保存剂，其特征在于，所述的反应型细胞包封剂为可形成贵金属纳米层的四氯合金酸、四氯合金酸钾、六氯合铂酸、六氯合铂酸钾、三氯氨铂酸钾、四氯铂酸钾、六溴铂酸钾；可形成硅纳米层的甲基三甲氧基硅烷、甲基二乙氧基硅烷、乙基三乙氧基硅烷、甲基三乙氧基硅烷、正硅酸四乙酯、正硅酸四甲酯、双(三甲基硅烷基)乙酰胺、3-氨丙基三乙氧基硅烷、3-巯丙基三甲氧基硅烷、三甲基氯硅烷、氯三乙氧基硅烷、辛基三甲氧基硅烷、环己基甲基二甲氧基硅烷、三甲氧基甲硅烷、三乙氧基硅烷、苄基三乙氧基硅烷、乙烯基三甲氧基硅烷、异丁基三乙氧基硅烷；可形成钛纳米层的四异丙基钛酸酯、钛酸甲酯、钛酸四乙酯、钛酸四丁酯、钛酸四丙酯；可形成其他无机纳米层的异丙醇铝、锆酸四丁酯和能够形成有机纳米层的多巴胺、鞣酸中的至少一种；
所述的pH调节剂为0.1～100份；
所述的pH调...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱伟，雷琪，周亮，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东;44