一种单克隆鉴定试剂盒及鉴定单克隆细胞基因型的方法技术

本发明专利技术公开了一种单克隆鉴定试剂盒及鉴定单克隆细胞基因型的方法，涉及细胞基因型鉴定技术领域。单克隆鉴定试剂盒的组分包括单克隆细胞裂解液、单克隆细胞基因扩增试剂和内参引物；单克隆细胞裂解液包括裂解液A和裂解液B，裂解液A包括氢氧化钠和十二烷基硫酸钠；裂解液B包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钾和乙二胺四乙酸。采用本发明专利技术的单克隆鉴定试剂盒进行鉴定，可以直接释放细胞的基因组DNA，不需要进行多步骤的提取纯化处理，且能批量快速地提取上百个单克隆细胞的基因组，可以实现高通量鉴定，解决了现有鉴定单克隆细胞株需要进行多步骤的提取纯化处理和难以实现高通量鉴定的问题。题。题。

【技术实现步骤摘要】
一种单克隆鉴定试剂盒及鉴定单克隆细胞基因型的方法


[0001]本专利技术涉及细胞基因型鉴定
，尤其涉及一种单克隆鉴定试剂盒及鉴定单克隆细胞基因型的方法。

技术介绍

[0002]基因编辑(gene editing)，又称基因组编辑(genome editing)或基因组工程(genome engineering)，是一种新兴的比较精确的能对生物体基因组特定目标基因进行修饰的一种基因工程技术，基因编辑是指人工对基因组进行修饰，使其遗传信息改变的工程，包括基因敲除，点突变和敲入，基因编辑以其能够高效率地进行定点基因组编辑，在基因研究、基因治疗和遗传改良等方面展示出了巨大的潜力。
[0003]在细胞上进行基因编辑，所获得的细胞株为基因编辑细胞株，通常为单克隆细胞株，即由单个细胞增殖形成的细胞团，制备得到单克隆细胞株后需要对单克隆细胞株的基因型进行鉴定，以确定该单克隆是否为要筛选的阳性克隆。单克隆鉴定是基因编辑细胞株流程中的重要环节，目前，对鉴定单克隆细胞株的基因型的传统方法需要提取基因组DNA，并需要进行多步骤的提取纯化处理，使得操作繁琐，耗时较长，工作量大，且难以实现高通量鉴定。

技术实现思路

[0004]针对
技术介绍
提出的问题，本专利技术的目的在于提出一种单克隆鉴定试剂盒，采用本专利技术的单克隆鉴定试剂盒进行鉴定，可以直接释放细胞的基因组DNA，并用于单克隆细胞株的基因型鉴定，不需要进行多步骤的提取纯化处理，且能批量快速地提取上百个单克隆细胞的基因组，可以实现高通量鉴定，解决了现有鉴定单克隆细胞株需要进行多步骤的提取纯化处理和难以实现高通量鉴定的问题。
[0005]本专利技术的另一目的在于提出一种鉴定单克隆细胞基因型的方法，使用上述的单克隆鉴定试剂盒，具有操作步骤简单和耗时短的优点，且能批量快速地提取上百个单克隆细胞的基因组，可以实现实现高通量鉴定，解决了现有鉴定单克隆细胞株需要进行多步骤的提取纯化处理和难以实现高通量鉴定的问题。
[0006]为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0007]一种单克隆鉴定试剂盒，包括单克隆细胞裂解液、单克隆细胞基因扩增试剂和内参引物；
[0008]所述单克隆细胞裂解液包括裂解液A和裂解液B，所述裂解液A的组分包括氢氧化钠和十二烷基硫酸钠；所述裂解液B的组分包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钾和乙二胺四乙酸；
[0009]所述内参引物序列对为：正向引物
‑
TCAAGGTCAGCGCTCGGAC，反向引物
‑
CGGTTGCAACATGGCGGC。
[0010]进一步的，按质量百分数，所述裂解液A包括5～200mM的氢氧化钠，且按质量百分
数计算，所述裂解液A还包括0.05％～1％的十二烷基硫酸钠。
[0011]进一步的，所述裂解液B包括5～500mM的三羟甲基氨基甲烷、10～1000mM的氯化钾和1～100mM的乙二胺四乙酸；
[0012]优选的，所述裂解液B的pH值为7.0～9.0。
[0013]进一步的，所述单克隆细胞基因扩增试剂为MightyAmp
TM DNA Polymerase Ver.2。
[0014]一种鉴定单克隆细胞基因型的方法，采用上述的单克隆鉴定试剂盒，包括以下方法：
[0015](1)细胞裂解：在单克隆细胞样品中加入裂解液A，吹打混匀，将单克隆细胞样品转移至PCR板，盖上硅胶膜，PCR仪设置好程序，95℃，10min，单克隆细胞样品上机；
[0016](2)终止裂解：从PCR仪上取下裂解好的单克隆细胞样品，加入裂解液B，吹打混匀，得到单克隆细胞裂解产物；
[0017](3)配制PCR体系1和PCR体系2，并设置好PCR仪的上机程序后，上机；之后，分别将PCR体系1和PCR体系2获得的产物进行琼脂糖凝胶电泳，通过琼脂糖凝胶电泳的结果判断单克隆细胞的基因型；
[0018]所述PCR体系1的组分包括单克隆细胞基因扩增试剂、单克隆细胞裂解产物、Cd180
‑
F、Cd180
‑
R和双蒸水；
[0019]PCR体系2的组分包括单克隆细胞基因扩增试剂、单克隆细胞裂解产物、内参引物和双蒸水。
[0020]进一步的，在所述步骤(3)中，所述PCR体系1的组分包括12.5μL的单克隆细胞基因扩增试剂、2μL的单克隆细胞裂解产物、1μL的Cd180
‑
F、1μL的Cd180
‑
R和8.5μL的双蒸水。
[0021]进一步的，PCR体系2的组分包括12.5μL的单克隆细胞基因扩增试剂、2μL的单克隆细胞裂解产物、2μL的内参引物和、8.5μL的双蒸水。
[0022]上述技术方案具有以下有益效果：本技术方案裂解液A的组分包括氢氧化钠和十二烷基硫酸钠，通过裂解液A中的表面活性剂和碱性环境，能够使单克隆细胞的细胞膜裂解，释放细胞基因组DNA，同时使细胞内的蛋白酶变性，防止基因组DNA降解。同时，裂解液B的组分包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钾和乙二胺四乙酸，裂解液B提供一个适宜的离子环境，可以维持DNA的稳定性，有利于长期保存。因此，采用本技术方案的单克隆细胞裂解液，对单克隆细胞进行裂解，可以直接释放细胞的基因组DNA，不需要进行多步骤的提取纯化处理，可以直接用于单克隆细胞株的基因型鉴定，同时，采用本方案的单克隆细胞裂解液所获得的基因组DNA，稳定性好，可多次使用，长期保存，且能批量快速地提取上百个单克隆细胞的基因组，使得单克隆鉴定环节的通量成10倍～100倍地扩大，可以实现高通量鉴定，从而大大缩短了鉴定时间，因此，采用本技术方案的单克隆鉴定试剂盒，可以解决现有对鉴定单克隆细胞株需要进行多步骤的纯化、操作繁琐、耗时较长、工作量大和难以实现高通量鉴定的问题。
附图说明
[0023]图1是本专利技术一个实施例的鉴定单克隆细胞基因型的方法中采用PCR体系1获得的产物进行琼脂糖凝胶电泳后的结果图；
[0024]图2是图1所示实施例采用PCR体系2获得的产物进行琼脂糖凝胶电泳的结果图。
Polymerase Ver.2是对MightyAmp DNA Polymerase中的Buffer进行改良，可以将血液、动植物组织等生体直接加入到反应液中进行Direct PCR，可用单克隆细胞裂解液直接做PCR的酶。MightyAmp
TM DNA Polymerase Ver.2对低浓度起始的模板也能进行很好的扩增，对极少量的DNA样品进行扩增，以实现单克隆细胞培养初期的快速鉴定。而且，本技术方案的单克隆细胞基因扩增试剂能耐受粗提基因组模板中的各种PCR反应抑制因子，对于GC Rich、AT Rich的模板均可在宽广的模板范围内进行有效扩增，产量高，在模板量极少的情况下，亦可扩增出足够量的基因片段，用于基因型鉴定。
[0037]一种鉴定单克隆细胞基因型的方法，采用上述的单克隆鉴定试剂盒，包括以下方法：
[0038](1)细胞裂解：在单本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单克隆鉴定试剂盒，其特征在于，包括单克隆细胞裂解液、单克隆细胞基因扩增试剂和内参引物；所述单克隆细胞裂解液包括裂解液A和裂解液B，所述裂解液A的组分包括氢氧化钠和十二烷基硫酸钠；所述裂解液B的组分包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钾和乙二胺四乙酸。2.根据权利要求1所述单克隆鉴定试剂盒，其特征在于，按质量百分数，所述裂解液A包括5～200mM的氢氧化钠，且按质量百分数计算，所述裂解液A还包括0.05％～1％的十二烷基硫酸钠。3.根据权利要求2所述单克隆鉴定试剂盒，其特征在于，所述裂解液B包括5～500mM的三羟甲基氨基甲烷、10～1000mM的氯化钾和1～100mM的乙二胺四乙酸。4.根据权利要求1所述单克隆鉴定试剂盒，其特征在于，所述内参引物的序列对为：正向引物
‑
TCAAGGTCAGCGCTCGGAC，反向引物
‑
CGGTTGCAACATGGCGGC。5.根据权利要求1所述单克隆鉴定试剂盒，其特征在于，所述单克隆细胞基因扩增试剂为MightyAmp
TM
DNA Polymerase Ver.2。6.一种鉴定单克隆细胞基因型的方法，其特征在于，采用权利要求1
‑
5任意一项所述的单克隆鉴定试剂盒，包括以下方法：(1)细胞裂解：在单克隆细胞样品中加入裂...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑虹，郑丹丹，
申请(专利权)人：广州源井生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：