一种NK样细胞的培养方法技术

本发明专利技术提供了一种NK样细胞的培养方法，所述方法包括以下步骤：(1)将靶向Bcl11b基因的RNP复合物电转入活化的T细胞，得到NK样细胞；(2)将所述NK样细胞与人工抗原呈递细胞共培养；其中，所述RNP复合物包括靶向Bcl11b基因的crRNA、tracrRNA和Cas9蛋白。本发明专利技术将靶向Bcl11b基因的RNP复合物电转入活化的T细胞，使得基因编辑系统转入原代T细胞中进行高效的基因编辑，将所述NK样细胞与人工抗原呈递细胞共培养，可以在2周内快速获得大量高纯度的NK样细胞，制备得到具有显著增强的杀伤作用的NK样细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种NK样细胞的培养方法
本专利技术属于生物
，涉及一种NK样细胞的培养方法。
技术介绍
近年来细胞免疫疗法在癌症治疗中展现出了巨大的潜力，被认为是最有希望攻克癌症的方法，其中，基于T细胞的免疫治疗技术受到了广泛关注，是目前的研究热点。为了克服主要组织相容性复合体(MHC)的限制性，研究人员研究T细胞的激活分化机制，尝试对其进行基因改造。Li等人将小鼠T细胞重编程成为NK样细胞(inducedT-to-naturalkillercells，ITNK细胞)(Li,P.etal.ReprogrammingofTcellstonaturalkiller-likecellsuponBcl11bdeletion.Science329,85-89(2010).)，并于近年采用CRISPR/Cas9技术成功地将人T细胞重编程成为ITNK细胞。NK样细胞具有T细胞和NK细胞的双重功能，相较于T细胞或NK细胞具有显著提高的肿瘤杀伤功能。而将NK样细胞应用于免疫治疗的一大障碍是难以生产大量功能完全的NK样细胞，同时缺少体外扩增NK样细胞的标准方法。<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种NK样细胞的培养方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：/n(1)将靶向Bcl11b基因的RNP复合物电转入活化的T细胞，得到NK样细胞；/n(2)将所述NK样细胞与人工抗原呈递细胞共培养；/n其中，所述RNP复合物包括靶向Bcl11b基因的crRNA、tracrRNA和Cas9蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种NK样细胞的培养方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将靶向Bcl11b基因的RNP复合物电转入活化的T细胞，得到NK样细胞；
(2)将所述NK样细胞与人工抗原呈递细胞共培养；
其中，所述RNP复合物包括靶向Bcl11b基因的crRNA、tracrRNA和Cas9蛋白。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述T细胞来源于外周血和/或脐带血。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述活化的T细胞采用抗人CD3抗体和抗人CD28抗体进行；
优选地，所述抗人CD3抗体和抗人CD28抗体的摩尔比为(1～5):1。


4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述crRNA包括SEQIDNO:1所示的核酸序列；
优选地，所述tracrRNA包括SEQIDNO:2所示的核酸序列。


5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述电转的电压为800～2500V；
优选地，所述电转的时间为1～8ms；
优选地，对于2mm电击杯，所述电转的电压为1000～2000V，时间为1～4ms。


6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述人工抗原呈递细胞包括表达IL-15的K562细胞、表达OX40L的K562细胞或表达IL-15和OX40L的K562细胞中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，所述人工抗原递呈细胞经γ射线或丝裂霉素C处理；
优选地，所述γ射线的强度为100～200Gy；
优选地，所述丝裂霉素C的...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤朝阳，秦乐，吴迪，魏志辉，王翠花，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：广东昭泰体内生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44