一株幼地仓鼠肾细胞低免疫力细胞株及其构建方法和应用技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，特别是涉及生物医学技术领域，更为具体的说是涉及一株幼地仓鼠肾细胞低免疫力细胞株及其构建方法和应用。本发明专利技术公开的幼地仓鼠肾细胞株BHK21‑IRF3‑KO‑Sus，该细胞株于2020年7月16日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.19957。该细胞株对伪狂犬病毒(PRV)敏感性高，在该细胞中增殖PRV病毒的滴度比BHK21母细胞中增殖PRV病毒的滴度高6‑10倍。

【技术实现步骤摘要】
一株幼地仓鼠肾细胞低免疫力细胞株及其构建方法和应用
本专利技术涉及生物
，特别是涉及生物医学
，更为具体的说是涉及一株幼地仓鼠肾细胞低免疫力细胞株及其构建方法和应用。
技术介绍
伪狂犬病(Pseudorabies，PR)，是由疱疹病毒科(Herpesviridae)、A亚科中的伪狂犬病毒(PseudorabiesVirus，PRV)引起的猪、牛、羊等多种家畜、家禽和野生动物的一种发热、奇痒(除猪外)及脑脊髓炎为主要症状的一种急性传染病。本病传播速度快、死亡率高、流行范围广、传播途径多、病原体顽固，世界卫生组织(WHO)将其列为二类传染病。疫苗的免疫接种是防治和消灭伪狂犬病的主要手段。自上世纪九十年代开始，中国80％以上的猪群就采用接种Bartha-K61疫苗来防控该病，并取得一定的效果。但是自2011年底，PR开始在已经接种Bartha-K61的猪群中暴发，表现为新生仔猪死亡率明显升高，猪群的gE抗体阳性率也明显增高。随后，PR暴发的报道开始持续增多，呈现出比较大的流行趋势，给中国畜牧业造成巨大的经济损失。BHK21本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株幼地仓鼠肾细胞低免疫力细胞株，其细胞名称是幼地仓鼠肾细胞株BHK21-IRF3-KO-Sus，该细胞株于2020年7月16日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.19957。/n

【技术特征摘要】
1.一株幼地仓鼠肾细胞低免疫力细胞株，其细胞名称是幼地仓鼠肾细胞株BHK21-IRF3-KO-Sus，该细胞株于2020年7月16日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO.19957。


2.权利要求1所述的幼地仓鼠肾细胞低免疫力细胞株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)sgRNA设计：Genebank上查找IRF3基因编码序列，设计合成两对IRF3sgRNA序列，分别为sgRNA1，sgRNA2；
2)载体构建：将sgRNA1和sgRNA2经退火处理，连接至经BbsⅠ处理的pUC-sgRNA-cloning载体中，并测序验证构建成功后用于转染；
3)质粒转染：把含有pCas9-IRES-GFP，pUC-sgRNA1，pUC-sgRNA2与转染复合试剂混合形成转染复合物，转染幼地仓鼠肾细胞(BHK21细胞)；
4)细胞分选：转染后进行FACS细胞分选，将带有绿色荧光的细胞分选至96孔板中，每孔一个细胞克隆，置于培养箱中培养待用；
5)单克隆细胞鉴定：待单细胞克隆恢复生长，制作细胞克隆复板；抽提各克隆基因组DN...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈丽，冯磊，鲍熹，徐悦，恽君雯，
申请(专利权)人：江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32