一种基于电转制备NK样细胞的方法技术

本发明专利技术提供了一种基于电转制备NK样细胞的方法，所述方法包括以下步骤：(1)采用抗人CD3抗体和抗人CD28抗体的组合活化T细胞；(2)将靶向Bcl11b基因的RNP复合物电转入活化的T细胞，得到所述NK样细胞；其中，所述RNP复合物包括靶向Bcl11b基因的crRNA、tracrRNA和Cas9蛋白。本发明专利技术采用电转化的方法将靶向Bcl11b基因的RNP复合物导入活化的T细胞，并在电转RNP复合物之前对T细胞进行抗人CD3抗体和抗人CD28抗体活化，各条件相互配合，有利于高效制备得到具有杀伤作用的NK样细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种基于电转制备NK样细胞的方法
本专利技术属于生物
，涉及一种基于电转制备NK样细胞的方法。
技术介绍
近年来细胞免疫疗法在癌症治疗中展现出了巨大的潜力，被认为是最有希望攻克癌症的方法，其中，基于T细胞的免疫治疗技术受到了广泛关注，是目前的研究热点。然而，主要组织相容性复合体(MHC)极大地限制了T细胞免疫治疗的应用范围。与MHC限制的T细胞不同，NK细胞不需要进行HLA配型，因此可以作为异源性的现货细胞药品对病人进行免疫治疗，在临床上具有重要的应用前景。但是NK细胞面临着无法持续增殖的问题。研究人员也在研究T细胞的激活分化机制，尝试对其进行基因改造，获得具有增强的抗肿瘤活性的T细胞。Li等人将小鼠T细胞重编程成为NK样细胞(inducedT-to-naturalkillercells，ITNK细胞)(Li,P.etal.ReprogrammingofTcellstonaturalkiller-likecellsuponBcl11bdeletion.Science329,85-89(2010).)，并于近年采用CRISPR/Ca本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于电转制备NK样细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：/n(1)采用抗人CD3抗体和抗人CD28抗体的组合活化T细胞；/n(2)将靶向Bcl11b基因的RNP复合物电转入活化的T细胞，得到所述NK样细胞；/n其中，所述RNP复合物包括靶向Bcl11b基因的crRNA、tracrRNA和Cas9蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于电转制备NK样细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)采用抗人CD3抗体和抗人CD28抗体的组合活化T细胞；
(2)将靶向Bcl11b基因的RNP复合物电转入活化的T细胞，得到所述NK样细胞；
其中，所述RNP复合物包括靶向Bcl11b基因的crRNA、tracrRNA和Cas9蛋白。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述T细胞来源于外周血和/或脐带血。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述抗人CD3抗体和抗人CD28抗体的摩尔比为(1～5):1。


4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述T细胞活化3～6天后，将所述RNP复合物电转入T细胞。


5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述RNP复合物中crRNA、tracrRNA和Cas9蛋白的摩尔比为1:(1～3):(1～3)；
优选地，所述RNP复合物的浓度为40～120μM。


6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，所述crRNA包括SEQIDNO:1所示的核酸序列；
优选地，所述tracrRNA包括SEQIDNO:2所示的核酸序列。


7.根据权利要求1-6任一项所述的方...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤朝阳，秦乐，吴迪，魏志辉，王翠花，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：广东昭泰体内生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44