运用实时荧光ＰＣＲ技术鉴定剪股颖粒线虫的方法技术

本发明专利技术公开了一种运用实时荧光ＰＣＲ技术鉴定剪股颖粒线虫（Ａｎｇｕｉｎａ　ａｇｒｏｓｔｉｓ）的方法，利用剪股颖粒线虫特异性ＤＮＡ序列，用生物信息学方法设计特异性引物和特异性探针，探针的５’端标记报告荧光基团，３’端标记淬灭荧光基团，应用荧光ＰＣＲ法扩增剪股颖粒线虫靶基因，通过探针在反应过程中荧光信号的变化鉴定样品中是否含有剪股颖粒线虫。本发明专利技术不受虫龄和虫体数量的影响，较形态学和形态测量学鉴定方法更为快速、准确；操作简单，可标准化，解决了快速鉴定剪股颖粒线虫的标准方法的问题，大大节约了检测时间，加快了口岸草种的验放速度，促进了进出口贸易，节约了货物因长期在货场存放而产生的费用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物学鉴定技术，具体地说涉及一种线虫分子生物学 鉴定技术，即运用实时荧光PCR反应来鉴定粒线虫，特别是剪股颖粒 线虫的技术。
技术介绍
剪股颖粒线虫G4A^j'/ aa^ra "5")，是垫刃目(Tylenchida)、垫 刃亚目(Tylenchina )、垫刃总科(Tylenchoidea )、粒线虫科(Anguinidae)、粒线虫属"/7^/j';^)中一种重要的植物线虫，是牧 草上重要的有害生物。其寄主植物主要包括剪股颖属"^ros"s spp.)、拂子茅属(6kZ柳艰msi:j.s spp.)、苔草属(6krejr spp.)、 鸭茅属("a"Ws spp.)、画眉草属(&,os"s spp.)、羊茅属(尸estocs spp.)、大麦属(/forafe〃/z spp.)、黑麦草属"oZii/a spp.)、 梯牧草属(/%""iz spp.)、早熟禾属(尸oa spp.)、碱茅属(尸z7ccj'/ e^j'a spp.)、 鼠尾粟属(5^oro力c^〃5" spp.)、三毛草属(Zrj.s""wffl spp.) 等，主要为害寄主植物的花序，致本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种运用实时荧光ＰＣＲ技术鉴定剪股颖粒线虫的方法，其特征在于包括以下步骤：　（１）设计并合成ＴａｑＭａｎ探针序列，制备标准品质粒；　（２）制备待测样品的ＤＮＡ模板；　（３）对待测样品ＤＮＡ模板进行荧光ＰＣＲ检测；　（４）对标准品质粒进行荧光ＰＣＲ检测，与步骤（３）结果进行阳性对照，得到检测结果。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：谢辉，马以桂，王金成，黄国明，
申请(专利权)人：华南农业大学，天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]