本发明专利技术提供纯化的Ｆｌｔ４受体酪氨酸激酶多肽及其片段，编码这类多肽的多核苷酸，与这类多肽特异性结合的抗体，以及它们的用途。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术主要涉及受体的基因，尤其是受体酪氨酸激酶的基因，它们向重组DNA载体中的插入，以及在宿主微生物菌株和宿主真核细胞中结果蛋白的产生。更具体而言，本专利技术涉及Flt4这种受体酪氨酸激酶；编码Flt4的核苷酸序列；产生Flt4的编码DNA及其基因产物的方法；特异性识别(杂交)这些受体的编码核酸的核酸探针；特异性识别这些受体的抗体；应用这些探针和抗体以及其它Flt4结合化合物的方法，例如用于在动物和人体组织中鉴定淋巴管和高内皮小静脉(HEV)以及用于促进或预防病理状态下Flt4表达细胞的生长。背景负责分化细胞和组织的发育、维持和修复的细胞行为很大一部分是通过生长因子和类似的配体及它们的受体间所传递的细胞间信号来调节。所述受体位于应答细胞的表面，它们结合已知为生长因子以及其它激素样配体的肽或多肽。该相互作用导致应答细胞中迅速的生物化学改变以及细胞基因表达的迅速和长期的再调整。与各种细胞表面相关的若干受体可以结合特定的生长因子。酪氨酸磷酸化是跨质膜信号传递的关键方式之一。若干酪氨酸激酶基因编码肽生长因子和激素的跨膜受体，例如表皮生长因子(EGF)、胰岛素、胰岛素样生长因子受体I(IGF-I)、血小板衍生生长因子(PDGF-A和B)及成纤维细胞生长因子(FGFs)。几种造血生长因子的受体都是酪氨酸激酶；这些包括c-fms和c-kit，c-fms是集落刺激因子1受体，c-kit为始祖造血生长因子受体。这些受体的特异性和亲和性存在差异。通常，受体酪氨酸激酶是糖蛋白，其包括，胞外结构域(能结合特异生长因子)，跨膜结构域(通常为蛋白质α螺旋部分)；近膜结构域(该受体可通过例如蛋白磷酸化进行调节的部位)；酪氨酸激酶结构域(为该受体的酶性组分)和羧基端尾部(在许多受体中参与酪氨酸激酶底物的识别和结合)。在几个受体酪氨酸激酶中，选择性剪切和选择性腺苷酸化过程可以从相同的基因中产生几个不同的多肽。这些可以包括或不包括上述的各种结构域。因此一些胞外结构域可以作为细胞分泌的独立蛋白而表达，而且所述受体的一些形式可以缺乏酪氨酸激酶结构域并且仅含有通过跨膜结构域和短羧基端尾部插入到质膜的胞外结构域。血管系统、胚胎血管发生和血管生成、凝血、伤口愈合和再生以及几种疾病的生理学涉及排列于血管内壁的血管内皮。血管树的发生通过血管发生产生，而且根据一些理论，淋巴系统的形成紧接着动脉和静脉的发育，始于从静脉出芽。见Sabin FR，Am JAant，943(1909)；和van der Putte，S.C.J.Adv Anat Embryol Cell Biol，513(1975)。胎儿期之后，除了在与新血管形成相关的血管发生期间外，内皮细胞增殖非常缓慢。刺激血管发生的生长因子通过特异性内皮细胞表面受体酪氨酸激酶发挥其作用。在受体酪氨酸激酶的配体中，血小板衍生生长因子(PDGF)在鸡尿囊绒膜中显示了血管生成性，虽然很弱。转化生长因子α(TGFα)是由几种肿瘤细胞和巨噬细胞分泌的血管生成因子。肝细胞生长因子(HGF)，即c-met原癌基因编码的受体的配体，也具有强血管生成性，包括在培养的内皮细胞中与TGFα作用相似的反应。有证据表明存在内皮细胞特异性生长因子和受体，其可能主要负责刺激内皮细胞生长、分化以及确定分化的功能。最广泛研究的生长因子是血管内皮生长因子(VEGF)，其为PDGF家族成员。血管内皮生长因子是两个23kDa亚单位通过二硫键连接的二聚体糖蛋白，因其对内皮细胞的有丝分裂活性和其诱导血管渗透的能力(因此其又被称为血管渗透因子)而被发现。报道的VEGF的其它作用包括细胞内钙离子动员、诱导纤溶酶原刺激因子和纤溶酶原刺激因子抑制剂-1的合成、刺激内皮细胞中已糖转移和在体外促进单核细胞迁移。由不同的mRNA剪切变体编码的四种VEGF异构体表现出相同的刺激内皮细胞有丝分裂的能力。VEGF的121个和165个氨基酸的异构体以可溶的形式分泌，而189个和206个氨基酸残基异构体仍然与细胞表面结合，并且与肝素有强亲和力。可溶性非肝素结合和肝素结合形式还被描述为相关胚胎生长因子(PIGF，分别为131和152个氨基酸)，其在人胚胎、滋养细胞肿瘤和培养的内皮细胞中表达。VEGF表达模式表明其涉及正常血管系统的发育和维持以及肿瘤的血管发生。在小鼠发育期间，交配后全部7.5天，内胚层表达VEGF，并且在毛细血管向内生长阶段室神经外胚层产生VEGF。在鹌鹑发育的第二天，在卵黄囊的血管形成区域和整个胚胎均表达VEGF。另外，在成年小鼠中紧靠穿通内皮的内皮细胞持续表达VEGF，提示其在这个特异性内皮的表型和功能的维持中起作用。两个VEGF的高亲和力受体，VEGFR-1/Flt1(fms样酪氨酸激酶-1)和VEGFR-2/Kdr/Flk-1(含受体/胎儿肝激酶-1的激酶插入结构域)，其特性已经被描述。这些受体分类为PDGF受体家族。然而，VEGF受体在其胞外结构域中具有7个免疫球蛋白样环(而PDGF家族成员有5个环)而且具有较大的激酶插入片段。虽然一些VEGF受体可以在单核细胞和黑色素瘤细胞系中出现，VEGF受体的表达主要发生在血管内皮细胞中。据报道只有内皮细胞应答VEGF时发生增殖，而且不同来源的内皮细胞显示不同的应答。因此，通过VEGFR-1和VEGF-2介导的信号表现出细胞类型特异性。VEGFR-1和VEGFR-2以高亲和力结合VEGF165(Kd分别约为20pM和200pM)。Flk-1受体也已经表明在应答VEGF时发生自我磷酸化，但是几乎不能检测到Flt1的磷酸化。VEGFR-2介导的信号引起显著的形态学变化、肌动蛋白重组和过量表达这种受体的猪主动脉内皮细胞的膜波动。在这些细胞中，VEGFR2还介导配体诱导的趋化作用和有丝分裂发生作用；而VEGFR-1转染的细胞缺乏对VEGF的有丝分裂应答。相反，VEGF对大鼠中表达VEGFR-1的窦状隙内皮细胞具有强生长刺激作用。用VEGFR-1和VEGFR-2进行的磷酸蛋白共沉淀存在差别，表明不同的信号分子与受体特异性细胞内序列相互作用。在原位杂交研究中，小鼠VEGFR-2mRNA的表达可见于卵黄囊和胚胎内中胚层(对交配后(p.c.)7.5天的胚胎进行评估，内皮细胞衍生于该胚胎)，而后见于可能的成血管细胞、心内膜和大的与小的血管内皮(12.5天p.c.)。血管芽、胚胎期的分支血管和出生后早期的脑中增殖的内皮细胞中富含VEGFR-2mRNA，在成年脑中它为低表达，这表明VEGFR-2是血管发生和血管生成的主要调节因子。VEGFR-1表达同样与小鼠胚胎中的早期血管发育和皮肤伤口愈合时的新血管生成相关联。然而，在成年器官中检测到高水平的VEGFR-1表达，表明VEGFR-1在成熟血管的静止内皮细胞中具有功能，其与细胞生长无关。VEGFR-2的鸟类同系物从原肠胚形成开始就在中胚层中发现，而VEGFR-1同系物首先在共表达内皮标记的细胞中发现。在鹌鹑外胚层体外培养中，这些细胞的血管发生性分化所必需的FGF-2上调VEGFR-2的表达。发现在发育后期两种VEGF受体的表达均更受限制。在人胚胎组织中，VEGFR-1和VEGFR-2表现出重叠的但略有差异的表达模式。这些资料表明VEGF及其受体以旁分泌方式发挥作用本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种治疗哺乳动物恶性肿瘤患者的方法，所述恶性肿瘤特征为，其邻近区血管的内皮细胞中有Ｆｌｔ４受体酪氨酸激酶（Ｆｌｔ４）的表达，所述方法包括如下步骤：给需要此治疗的哺乳动物施用一种组合物，该组合物包括一种化合物，该化合物可有效抑制Ｆｌｔ４配 体蛋白与所述生物之内皮细胞中表达的Ｆｌｔ４结合，从而抑制Ｆｌｔ４介导的所述血管内皮细胞的增殖。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：卡里阿利塔洛，阿加凯佩南，雷加瓦尔托拉，洛塔贾西拉，
申请(专利权)人：路德维格癌症研究院，利森蒂亚有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。