一种胶束毛细管电动色谱分析Aβ斑块显像剂前体AV-45-OTS含量的方法技术

一种胶束毛细管电动色谱分析Aβ斑块显像剂前体AV-45-OTS含量的方法，属于分析化学技术领域。本发明专利技术目的是建立一种简单方便的毛细管电泳方法测定AV-45-OTS含量，为药盒的质量控制提供有效的分析手段，相关研究未见报道。精密称取AV-45-OTS 1mg溶于0.5mL色谱纯四氢呋喃+1.5mL 25mmol/L硼砂-10mmol/L SDS溶液中，10kv电压进样，保持电压不变，改变进样时间，以峰面积对进样时间进行线性回归，在进样时间为8～16s线性关系良好，回归方程为y=112958x-525878，相关系数r2= 0.9909。与HPLC相比，胶束毛细管电动色谱的主要优点是分离效率高，其效率可达到500000理论塔板数/m，是HPLC的10倍；另一个优点是速度快，样品用量和试剂消耗少，可降低运行成本。

【技术实现步骤摘要】
一种胶束毛细管电动色谱分析Aβ斑块显像剂前体AV-45-OTS含量的方法
一种胶束毛细管电动色谱分析Aβ斑块显像剂前体AV-45-OTS含量的方法，属于分析化学

技术介绍
随着中国人口老龄化，阿尔茨海默病(AD)逐年增多，成为老年人中继脑血管病之后的第二常见的神经科疾病，严重影响老年人的晚年生活质量，给社会及家庭带来巨大的经济负担。AD的发病机制不明，目前没有治愈药物。只有早期作出正确诊断，采取有效措施延缓病情，才能改善老年人的生活质量、减少社会和家庭压力。目前临床认为β-淀粉样蛋白(β-amyloidprotein，Aβ)聚集是AD的主要病理特征。国外采用功能显像脑内Aβ蛋白斑块聚集进行早期AD诊断。目前FDA批准用于临床的Aβ蛋白斑块显像试剂药盒18F-AV45由美国Avid公司研制，它能够特异性结合Aβ斑块，通过正电子发射断层(PET)显像可以显著区别AD患者和认知健康的志愿者，从而可以早期诊断AD。18F-AV45是由标记前体(E)-2-(2-(2-(2-对甲苯磺酰氧基乙氧基)乙氧基)乙氧基)-5-(4-叔丁氧羰基甲基氨基苯乙烯)吡啶（AV-45-OTS）经18F标记制备而成。高纯度的试剂盒是PET临床诊断用药的关键。要获得高放化纯的PET显像剂18F-AV-45，除了控制标记条件外，另一个关键之处是在合成标记前体（AV-45-OTS）中严格控制前体的纯度，包括反应中间体（AV-45-OH）的含量，才能获得高纯度的试剂盒。本专利技术的目的是建立一种简单方便的胶束毛细管电泳方法测定AV-45-OTS的含量，为药盒的质量控制提供有效的分析手段，相关研究未见报道。文献报道的HPLC法分析AV-45含量，采用乙腈:醋酸胺(85:15)为流动相，峰型存在拖尾现象，峰较宽，不能将杂质有效地分离。改良的HPLC法采用磷酸盐作缓冲剂，添加三乙胺改善了拖尾现象，但盐溶液对色谱柱和仪器的使用有很高的要求。由于AV-45-OTS结构中含BOC（叔丁氧羰基保护基）和OTS（对甲苯磺酰基）两个保护基团，使得分子结构极性大大降低，普通的高效液相色谱等分析方法较难达到理想的分离。
技术实现思路
本专利技术的目的提供一种采用胶束毛细管电动色谱分析Aβ斑块显像剂前体AV-45-OTS含量的方法。是建立一种简单方便的毛细管电泳方法测定AV-45-OTS的含量，为药盒的质量控制提供有效的分析手段，相关研究未见报道。采用胶束毛细管电动色谱（MECC），以表面活性剂十二烷基硫酸钠（SDS）加入到硼砂缓冲液体系形成胶束，提高了分离度，达到了高效快速的分离检测。本专利技术的技术方案：一种胶束毛细管电动色谱分析Aβ斑块显像剂前体AV-45-OTS含量的方法，胶束毛细管电泳分析条件：检测波长为254nm，紫外检测，进样方式为10kv电压进样，进样时间8～16s，分离电压为22kv，毛细管柱温25℃，运行缓冲液为：25mmol/L硼砂-10mmol/LSDS，pH=9.0，缓冲液及样品溶液均用0.22µm微孔针头过滤器过滤；选用未涂层的45cm×50µm石英毛细管柱；新毛细管柱先依次用甲醇冲洗10min，蒸馏水冲洗5min，1MNaOH溶液冲洗30min，蒸馏水冲洗5min，最后再用运行缓冲液冲洗15min；进样前依次用蒸馏水及运行缓冲液各冲洗2min；精密称取样品AV-45-OTS1mg溶于0.5mL色谱纯四氢呋喃+1.5mL25mmol/L硼砂-10mmol/LSDS溶液中，10kv电压进样，保持电压不变，改变进样时间，分别为8s、10s、12s、14s、16s，进样时间越长则进样体积越多，重复进样三次，以峰面积对进样时间进行线性回归，结果在进样时间为8～16s的范围内线性关系良好，回归方程为y=112958x-525878，相关系数r2=0.9909。取干燥恒重的对照品AV-45-OTS适量，精密称定，用0.5mL色谱纯四氢呋喃溶解+1.5mL25mmol/L硼砂-10mmol/LSDS配制成AV-45-OTS0.5mg/mL的溶液，计为W对照，作为对照溶液；另称取样品适量，相同方法配制成含被测AV-45-OTS样品0.5mg/mL的溶液，计为W样品，作为被测样品溶液；按上述色谱条件测定，所得峰面积分别为S对照、S样品，按外标法计算被测样品中AV-45-OTS的含量为：（S样品/S对照）×（W对照/W样品）×100%。本专利技术的有益效果：与HPLC相比，胶束毛细管电动色谱的主要优点是分离效率高，其效率可达到500000理论塔板数/m，是HPLC的10倍。另一个优点是速度快，样品用量和试剂消耗少，可降低运行成本。附图说明图150mmol/LPBS-10mmol/L醋酸铵溶剂体系的毛细管电泳图。图225mmol/L硼砂缓冲体系的毛细管电泳图。图325mmol/L硼砂-10mmol/LSDS溶剂体系的毛细管电泳图。图425mmol/L硼砂-10mmol/LCTAB溶剂体系的毛细管电泳图。图5主峰保留时间随硼砂浓度变化的影响。图625mmol/L硼砂-10mmol/LSDS（pH=9.0）溶剂体系的毛细管电泳图。图7保留时间随电压的变化图。图8AV-45-OTS对照品毛细管电泳色谱图。图9中间体AV-45-OH毛细管电泳色谱图。图10溶剂四氢呋喃（空白）毛细管电泳色谱图。图11AV-45-OTS毛细管电泳色谱图。图12AV-45-OTS标准曲线。具体实施方式实施例1、毛细管选择及预处理：选用未涂层的45cm×50µm石英毛细管柱；新毛细管柱先依次用甲醇冲洗10min，蒸馏水冲洗5min，1MNaOH溶液冲洗30min，蒸馏水冲洗5min，最后再用运行缓冲液冲洗15min；进样前依次用蒸馏水及运行缓冲液各冲洗2min。实施例2、样品溶剂的影响：样品AV-45-OTS比较难溶，采用甲醇、乙腈这类有机溶剂不能完全溶解，完全溶解要加很多这类有机溶剂，进样发现出现倒峰现象，且重复进样很不稳定，不适合作为样品溶剂。采用色谱纯四氢呋喃能完全溶解样品，且用量不多。而且四氢呋喃对质子惰性，不会影响和胶束的静电相互作用从而影响溶质的迁移。考虑样品溶液中的溶剂必须与运行缓冲液互溶，我们最终将样品用四氢呋喃溶解后用硼砂缓冲液稀释。即1mgAV-45-OTS+0.5mL色谱纯四氢呋喃+1.5mL25mmol/L硼砂-10mmol/LSDS稀释后进样，峰形理想。实施例3、色谱条件优化：3.1缓冲体系的选择从毛细管电动色谱分配机理可知，溶质在胶束相和流动相之间存在分配，因此改变缓冲体系将会对溶质分配系数，进而对容量因子和溶质的保留值产生影响。实验首先考察了缓冲液的种类，分别采用磷酸缓冲液(PBS)、PBS-醋酸铵体系、硼砂缓冲体系进行试验，结果显示AV-45-OTS在PBS缓冲体系中未出现主峰；在PBS-醋酸铵体系中，有明显峰出现，但峰形很宽，且有倒峰（见图1）；使用硼砂缓冲体系，出现明显主峰，峰型较PBS-醋酸铵体系尖锐（图2）。与PBS体系或PBS-醋酸铵体系相比，峰型有了很大的改善，因此选择硼砂体系作缓冲溶液。3.2表面活性剂类型的选择在毛细管电动色谱中选择一定的表面活性剂形成胶束用作准固定相，准固定相的选择和在HPLC中改变固定相具有相同的效果，但前者更为简便。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胶束毛细管电动色谱分析Aβ斑块显像剂前体AV‑45‑OTS含量的方法，其特征在于：胶束毛细管电泳分析条件：检测波长为254nm，紫外检测，进样方式为10kv电压进样，进样时间8～16s，分离电压为22kv，毛细管柱温25℃，运行缓冲液为：25mmol/L硼砂‑10mmol/L SDS，pH=9.0，缓冲液及样品溶液均用0.22µm微孔针头过滤器过滤；选用未涂层的45cm×50µm石英毛细管柱；新毛细管柱先依次用甲醇冲洗10min，蒸馏水冲洗5min，1M NaOH溶液冲洗30min，蒸馏水冲洗5min，最后再用运行缓冲液冲洗15min；进样前依次用蒸馏水及运行缓冲液各冲洗2min；精密称取样品AV‑45‑OTS 1mg溶于0.5mL色谱纯四氢呋喃+1.5mL 25mmol/L硼砂‑10mmol/L SDS 溶液中，10kv电压进样，保持电压不变，改变进样时间，分别为8s、10s、12s、14s、16s，进样时间越长则进样体积越多，重复进样三次，以峰面积对进样时间进行线性回归，结果在进样时间为8～16s的范围内线性关系良好，回归方程为y=112958x‑525878，相关系数r2= 0.9909；取干燥恒重的对照品AV‑45‑OTS适量，精密称定，用0.5mL色谱纯四氢呋喃溶解+1.5mL 25mmol/L硼砂‑10mmol/L SDS配制成AV‑45‑OTS 0.5mg/mL的溶液，计为W对照，作为对照溶液；另称取样品适量，相同方法配制成含被测AV‑45‑OTS样品0.5mg/mL的溶液，计为W样品，作为被测样品溶液；按上述色谱条件测定，所得峰面积分别为S对照、S样品，按外标法计算被测样品中AV‑45‑OTS的含量为：（S样品/S对照）×（W对照/W样品）×100%。...

【技术特征摘要】
1.一种胶束毛细管电动色谱分析Aβ斑块显像剂前体AV-45-OTS含量的方法，其特征在于：胶束毛细管电泳分析条件：检测波长为254nm，紫外检测，进样方式为10kv电压进样，进样时间8～16s，分离电压为22kv，毛细管柱温25℃，运行缓冲液为：25mmol/L硼砂-10mmol/LSDS，pH=9.0，缓冲液及样品溶液均用0.22µm微孔针头过滤器过滤；选用未涂层的45cm×50µm石英毛细管柱；新毛细管柱先依次用甲醇冲洗10min，蒸馏水冲洗5min，1MNaOH溶液冲洗30min，蒸馏水冲洗5min，最后再用运行缓冲液冲洗15min；进样前依次用蒸馏水及运行缓冲液各冲洗2min；精密称取样品AV-45-OTS1mg溶于0.5mL色谱纯四氢呋喃+1.5mL25mmol/L硼砂-10mmol/LSDS溶液中，10kv电压进样，保持电压不变，改变进样时间，分别为8s、10s、12s、1...

【专利技术属性】
技术研发人员：周杏琴，毛师师，彭颖，张荣军，张建康，
申请(专利权)人：江苏省原子医学研究所，
类型：发明
国别省市：江苏;32