本发明专利技术涉及一种N1,N1-二异丙基乙二胺的高效液相色谱分析方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）配制不同浓度的N1,N1-二异丙基乙二胺标准溶液，分别加入过量2，4-二硝基氟苯进行衍生化反应，反应结束后对反应液进行高效液相色谱分析，以DNB-N1,N1-二异丙基乙二胺峰面积对应N1,N1-二异丙基乙二胺浓度绘制标准曲线；（2）将供试品配成溶液，加入过量2，4-二硝基氟苯进行反应，反应结束后对反应液进行高效液相色谱分析，计算供试品中的N1,N1-二异丙基乙二胺含量。本发明专利技术方法准确、重现性好、灵敏度高，可用于盐酸阿考替胺及其片剂生产过程及放置过程中N1,N1-二异丙基乙二胺的检测，也可用于其他样品中N1,N1-二异丙基乙二胺的检测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种Ni，Ni-二异丙基乙二胺的高效液相色谱分析方法。 技术背景 &，Nf二异丙基乙二胺是一种比较重要的化工原料和优良的有机溶剂，也常用于 有机合成，是合成盐酸阿考替胺（Acotiamidehydrochloridetrihydrate)的重要中间体。目前检测&，&-二异丙基乙二胺的分析方法有：酸碱滴定法、色谱法，由于 &-二异丙基乙二胺是有机胺，采用酸直接滴定法可以测定&，Nf二异丙基乙二胺的含 量，但如果需要测定其他样品中N^Nf二异丙基乙二胺的残留，该方法准确度和灵敏度比 较差；由于&，Nf二异丙基乙二胺的沸点较小，可以采用气相色谱法测定&-二异丙基 乙二胺的残留，但样品中如果存在不溶性物质，会容易吸附样品，准确度比较差-二 异丙基乙二胺本身无紫外吸收基团，无法采用常规的液相方法进行检测，如果选用示差检 测器等不常规的检测器，方法重现性差。此外，目前还未有用液相分析的相关报道，使分析 人员在方法的选择上也受到了一定的局限。
技术实现思路
本专利技术的目的在于弥补Ni，Ni-二异丙基乙二胺无紫外吸收基团，无法采用液相分 析的缺陷，提供一种吸收干扰小、灵敏度高的&-二异丙基乙二胺液相分析方法。 为实现上述专利技术目的，本专利技术采用技术方案如下： (1) &，&-二异丙基乙二胺液相分析方法，所述方法包括：（1)配制不同浓度的 &，Nf二异丙基乙二胺标准溶液，分别加入过量2,4-二硝基氟苯进行衍生化反应，反应结 束后对反应液进行高效液相色谱分析，以DNB- 二异丙基乙二胺峰面积对应&-二 异丙基乙二胺浓度绘制标准曲线； (2) 将供试品配成溶液，加入过量2,4_二硝基氟苯进行反应，反应结束后对反应液进 行高效液相色谱分析，根据DNB-K，&-二异丙基乙二胺的峰面积和步骤（1)中的标准曲线 计算供试品中的&，Nf二异丙基乙二胺含量。进一步地，在测定供试品中&-二异丙基 乙二胺含量之前还进行了定量限和检测限得确定，方法如下：取&-二异丙基乙二胺标 准溶液适量，逐级稀释至限度溶液，加入过量2,4-二硝基氟苯进行反应，反应结束后对反 应液进行液相色谱分析，考察DNB- 二异丙基乙二胺峰的信噪比，确定定量限和检测 限。 进一步地，为了验证分析方法的准确度，还进行了回收率的测定，方法如下：取适 量供试品，加入不同浓度的Ni，Nf二异丙基乙二胺标准溶液，各自加入过量2,4-二硝基氟 苯于进行反应，反应结束后对反应液进行液相色谱分析，计算K，Nf二异丙基乙二胺的回 收率。 本专利技术对&，Nf二异丙基乙二胺进行衍生化，在其氨基上引入二硝基苯基团增加 吸收波长，其反应原理如下式所示：进一步地，所述高效液相色谱条件为： 色谱柱：C18柱，规格为4.6X150mm，5.0ym; 检测波长：360nm; 柱温：35~45°C; 流速：〇? 8~1. 2ml/min; 进样量：l〇~20y1; 流动相：乙腈-0. 05mol/L醋酸钠溶液，其中乙腈与0. 05mol/L醋酸钠溶液的比例为 60:40~70:30。进一步地，所述衍生化反应的温度为45°C~55°C，反应时间为20~40分钟，pH值为 8~9 〇 进一步地，所述供试品为阿考替胺、盐酸阿考替胺或盐酸阿考替胺片剂。 进一步地，所述流动相中的〇. 〇5mol/L醋酸钠溶液与乙腈混合之前，先用稀醋酸 调节pH至6. 4。 进一步地，所加入的2,4-二硝基氟苯为1°/『2%的2,4-二硝基氟苯乙腈溶液；衍 生化反应具体步骤为：取lml样品溶液、置5ml棕色量瓶中，加入l~2ml0. 04 ~0. 06mol/L 碳酸钠溶液和〇. 8~1. 2ml1%~2%的2,4-二硝基氟苯乙腈溶液，于45°C~55°C下反应20~40 分钟，反应结束后，冷却，用乙腈-水(体积比为50 :50 )定容到刻度，摇匀。 本方法的有益效果主要体现在：本专利技术方法准确、重现性好、灵敏度高，可用于盐 酸阿考替胺及其片剂生产过程及放置过程中Nl，N1-二异丙基乙二胺的检测，也可用于其 他样品中&-二异丙基乙二胺的检测。【附图说明】 图1 :Ni，N「二异丙基乙二胺的标准曲线图。 图2:衍生化后得到的DNB- 二异丙基乙二胺与衍生化试剂的色谱峰。 图3:&，N「二异丙基乙二胺的检测限HPLC图。 图4 :Ni，N「二异丙基乙二胺的定量限HPLC图。【具体实施方式】 下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于 此。 1、衍生化试剂和稀释剂的配置： 衍生化试剂：取lml2,4-二硝基氟苯溶于乙腈中配成100ml的溶液，即浓度为1%的 乙腈-水溶液； 稀释剂：乙腈与水按50:50的体积比混合。 2、衍生化反应： 取lml样品溶液、置5ml棕色量瓶中，加入2ml0. 05mol/L碳酸钠溶液和lml衍生化试 剂（1%的2,4-二硝基氟苯乙腈溶液)，于50°C下反应30分钟，反应结束后，冷却，用稀释剂 (体积比50:50的乙腈-水溶液）定容到刻度，摇匀。 3、色谱条件： 色谱柱：AgilentSB-C18 (4.6*150mm，5.0ym) 检测波长：360nm柱温：40°C 流速：1. 〇ml/min 进样量：10yl 流动相：乙腈-0. 05mol/L醋酸钠溶液(体积比65:35)，其中0. 05mol/L醋酸钠溶液先 用稀醋酸调节pH至6. 4再与已经混合。 4、本专利技术的仪器设备： 安捷伦1260液相色谱仪及配置的G1314F紫外检测器以及分析仪器配置的HPLC色谱 工作站。 5、本专利技术的原材料规格如下： 乙腈(色谱级）； 乙酸、乙酸钠、碳酸钠、2,4_二硝基氟苯(分析级)。 实施例1外，&-二异丙基乙二胺标准曲线绘制 取&-二异丙基乙二胺约20mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释至 刻度，摇匀；精密量取上述溶液lml，置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，作为Nl，N1-二 异丙基乙二胺标准贮备液；分别精密量取上述标准贮备溶液适量，用上述稀释剂定量稀释 制成每lml中约含0. 4yg、0. 8yg、4yg、8yg、12yg的线性溶液； 量取上述线性溶液各lml，分别置5ml量瓶中，加0. 05mol/L碳酸钠溶液2ml，加衍生化 试剂lml，置于50°C水浴中衍生30分钟，冷却，再用稀释剂稀释至刻度。精密量取衍生化后 的线性溶液各1〇耵，注入液相色谱仪，记录色谱图。以DNB-N1，N1-二异丙基乙二胺峰面积 为自变量，以N1，N1-二异丙基乙二胺浓度为应变量，得到标准曲线图如图1所示，其线性相 关系数r为0.9995,其色谱图如图2所示。 实施例2 &-二异丙基乙二胺检测限和定量限检测的确定。 取&，N「二异丙基乙二胺约20mg，精密称定，置25ml量瓶中，加稀释剂溶解并稀释 至刻度，摇匀；精密量取上述溶液lml，置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，作为&-二 异丙基乙二胺限度贮备液；在量取上述限度贮备液，用稀释剂逐级稀释，得限度溶液，量 取上述限度溶本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种N1,N1‑二异丙基乙二胺的高效液相色谱分析方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）配制不同浓度的N1,N1‑二异丙基乙二胺标准溶液，分别加入过量2，4‑二硝基氟苯进行衍生化反应，反应结束后对反应液进行高效液相色谱分析，以DNB‑ N1,N1‑二异丙基乙二胺峰面积对应N1,N1‑二异丙基乙二胺浓度绘制标准曲线；（2）将供试品配成溶液，加入过量2，4‑二硝基氟苯进行反应，反应结束后对反应液进行高效液相色谱分析，根据DNB‑N1,N1‑二异丙基乙二胺的峰面积和步骤（1）中的标准曲线计算供试品中的N1,N1‑二异丙基乙二胺含量。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杜焕达，周卫枫，郑春燕，
申请(专利权)人：杭州新博思生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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