一种新的多肽——人组织阴离子转运多肽13和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人组织阴离子转运多肽１２，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人组织阴离子转运多肽１２的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人组织阴离子转运多肽13，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。肝细胞能够通过肝基底外侧细胞从肝窦状血小管摄取大量不同的亲脂性组织阴离子如多种胆汁阴离子与甾族复合物，钠离子依赖性与非钠离子依赖性的转运系统位于肝基底外侧细胞质膜区域上，与牛磺酸(或甘氨酸)结合的胆酸通过钠离子-牛磺胆酸协同转运多肽(NTCP)优先地被肝细胞摄取，这在鼠与人肝细胞中均发现(Hagenbuch B et al.，1991)。另一方面，肝细胞对非胆酸结合状态的组织阴离子的摄取是通过非钠离子依赖性的载体独特性地进行，这些载体可能包括胆汁转运激酶(37KD)、四溴酚酞磺酸钠和胆红素结合蛋白(55KD)、一种特殊的组织阴离子结合蛋白(55KD)(Tiribelli C.，1990；Berk PD etal.，1987；Wolkoff AW et al.，1993)，此外已被克隆的鼠与人肝组织阴离子转运多肽74亦进行非钠离子依赖性的组织阴离子如四溴酚酞磺酸盐、胆酸盐、牛磺胆酸盐、甘氨胆酸盐、脱氧牛磺胆酸盐等的转运(Jacquemin E et al.，1994)。人肝组织阴离子转运多肽(OATP)74基因由27110个核苷酸组成，含16个碱基对的聚腺苷酸尾，它的起始位点在第54个核苷酸处，其开放读框序列延伸超过2010个核苷酸，编码一个含670个氨基酸分子量为74KD的含8个潜在N-糖基化位点的蛋白。人肝组织阴离子转运多肽74的序列提示蛋白含有10-12个跨膜区域、8个N-糖基化位点，其中的4个N-糖基化位点位于跨膜结构域9-12的大的亲水噜噗上(Kullak-Ublick et al.1995)。人肝组织阴离子转运多肽74与鼠组织阴离子转运多肽74非常密切，两者有67％的同源性、82％的相似性，鼠组织阴离子转运多肽74可能含有10个跨膜结构域、4个N-糖基化位点(Jacquemin E etal.，1994)，两者很可能均属组织阴离子转运多肽基因家族(Kullak-Ublick etal.1995)。以人肝OATP互补RNA为探针，Northern杂交分析显示来自人肝脏、脑、肺、肾、睾丸的mRNA的交叉激活。进一步的研究显示高强度的杂交信号在人脑全mRNA、肝脏mRNA、肾mRNA中出现，并且一些数据提示人OATP在许多组织中以多种形式出现，主要表现为分子量的大小。人OATP在人体总的组织阴离子转运上起着重要作用。人肝OATP在肝外多种组织的存在暗示了总体上它在人体组织的阴离子跨上的阴离子跨上皮运输中的重要作用(Kullak-Ublick et al.，1995)。通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本专利技术的多肽的表达谱与人组织阴离子转运多肽的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人组织阴离子转运多肽12。由于如上所述人组织阴离子转运多肽12蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人组织阴离子转运多肽12蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人组织阴离子转运多肽12蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人组织阴离子转运多肽12以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人组织阴离子转运多肽12的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人组织阴离子转运多肽12的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人组织阴离子转运多肽12的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人组织阴离子转运多肽12的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人组织阴离子转运多肽12的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人组织阴离子转运多肽12异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中264-596位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-1762位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人组织阴离子转运多肽12蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人组织阴离子转运多肽12蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人组织阴离子转运多肽12表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人组织阴离子转运多肽１２，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]