一种快速检测CpG胞嘧啶甲基化的方法技术

本发明专利技术涉及检测ＤＮＡ胞嘧啶甲基化的方法，包括：１）用亚硫酸氢钠处理部分待测样品ＤＮＡ；２）根据目标片段处理前两端不含ＣｐＧ的部位，设计２对引物，对处理前、后ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增；３）在未甲基化目标片段的ｔＰＣＲ产物的变性（解链）温度下测定样品ｔＰＣＲ产物的色谱保留时间；４）将ｔＰＣＲ产物保留时间明显延长样品目标片段的ｗＰＣＲ产物与野生型对照样品等量混合，进行变性和复性杂交处理，测定样品目标片段是否存在点突变。该方法能反映整个目标片段中ＣｐＧ的胞嘧啶甲基化状态，简易、快速、成本低廉、准确。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

【技术保护点】
一种检测ＣｐＧ胞嘧啶甲基化的方法，包括下列步骤： １］用亚硫酸氢钠处理部分待测样品ＤＮＡ； ２］根据目标片段处理前两端不含ＣｐＧ的部位，分别设计２对引物，１对能够与处理前的目标片段配对，进行处理前目标片段的ＰＣＲ扩增（ｗＰＣＲ）；另外１对引物能够与处理后的目标片段配对，进行处理后目标片段的ＰＣＲ扩增（ｔＰＣＲ）； ３］用ＤＨＰＬＣ在未甲基化目标片段的ｔＰＣＲ产物的部分变性（解链）温度下测定样品ｔＰＣＲ产物的色谱保留时间； ４］将ｔＰＣＲ产物保留时间明显延长样品目标片段的ｗＰＣＲ产物与野生型对照样品等量混合，进行变性和复性杂交处理，用ＤＨＰＬＣ在ｗＰＣＲ产物的部分变性（解链）温度下测定样品目标片段是否存在点突变。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：邓大君，周静，
申请(专利权)人：北京市肿瘤防治研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]