猪圆环病毒2型抗原或抗体检测试纸条制造技术

本发明专利技术公开了一种猪圆环病毒２型（ＰＣＶ２）抗原或抗体检测试纸条。试纸条具有支撑层，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片层，吸附层固定在支撑层上，吸附层从样品端依次为纤维层（２），金标纤维层（３），纤维素膜层（４），手柄端为吸水材料层，在纤维素膜层上印制有对照印迹“｜”和检测印迹“｜”，其排列组合为“｜｜”。以抗ＰＣＶ２　　ｄＣａｐ单克隆抗体ｍＡｂ１溶液在纤维素膜上印制对照印迹“｜”，山羊抗猪ＩｇＧ多克隆抗体溶液印制检测印迹“｜”，其组合排列为“｜｜”。本发明专利技术有益的积极效果是：检测试剂条操作简单，易于大范围推广应用，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种家畜疫病快速诊断器具，特别是涉及一种猪圆环病毒2型(PCV2)抗原或抗体检测试纸条。
技术介绍
猪圆环病毒(porcine circovirus，PCV)是目前发现的最小的动物病毒，病毒粒子直径约17nm，为共价闭合，环状，单股DNA病毒，PCV具有两种基因型PCV1和PCV2。PCV1无致病性，但广泛存在于猪体内和猪源传代细胞系，PCV2对猪有致病性，主要引起仔猪断奶后多系统衰竭综合征(post-weaning multisystemic wasting syndrome，PMWS)。PMWS为一种新的传染病，1991年首次在加拿大发现，主要发生于5-12周龄断奶仔猪，表现为进行性消瘦、呼吸困难、皮肤苍白、腹泻、黄疸。随后，美国，英国，德国，法国，爱尔兰，捷克，西班牙，中国台湾，荷兰，瑞士，阿根廷，墨西哥，日本，丹麦，意大利，韩国，匈牙利，泰国等国相继报道了该病，流行病学调查表明，该病在中国也广泛流行，并造成相当严重的经济损失。PCV2除了引起PMWS外，还可引起育肥猪皮炎与肾病综合征(porcinedermatitis and nephropathy syndrome，PDNS)，并与怀孕母猪的繁殖障碍，新生仔猪的先天性阵颤，新生仔猪腹泻和增生性坏死性肺炎关系密切。根据PMWS的流行病学，临床症状和剖检病理变化可对PCV2感染作出初步诊断，但确诊仍需要以实验室诊断技术检测PCV2抗原及其抗体。对猪群PCV2抗体水平，特别是母源抗体水平，进行监测，可确实了解猪体免疫水平，把握疫病最适免疫时机，确保获得良好免疫效果，有效预防和控制PCV2的侵袭和传播，避免因此而引起的重大损害。目前，国内外采用的PCV2检测技术主要有病毒分离培养，间接免疫荧光(IFA)，免疫酶单层试验(IMPA)，原位杂交(ISH)，聚合酶链式反应(PCR)等等。上述技术和方法虽然可以检测PCV2及其抗体水平，在实践中也取得一定的效果，但均存在试验操作复杂，耗时长，需要特定的专业技能和仪器设备等，常限于实验室内进行，很难在基层普及和推广。因此，研制开发适用于养殖基层的快捷、简便的PCV2及其抗体水平检测器具，对猪群PCV2免疫水平进行实时监测，建立科学的、灵活的猪群疫病免疫程序，对疫病的预防和控制有重要意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种猪圆环病毒2型(PCV2)抗原或抗体检测试纸条。它具有支撑层，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片层，吸附层固定在支撑层上，吸附层从样品端依次为纤维层，金标纤维层，纤维素膜层，手柄端为吸水材料层，在纤维素膜层上印制有对照印迹“|”和检测印迹“|”，其排列组合为“||”。不吸水的支撑层薄片层用硬质塑胶片条，或不吸水的硬纸条，纤维层用玻璃棉，吸水材料层用吸水纸，纤维素膜层用硝酸纤维素膜，金标纤维层用吸附金标蛋白的玻璃棉，在玻璃棉与金标玻璃棉及吸水纸层上覆盖有保护膜，在玻璃棉与金标玻璃棉交界处对应的保护膜偏向玻璃棉一侧0.5cm处印制样品标记线。本专利技术有益的积极效果是PCV2抗原或抗体检测试纸条操作简单，人人都可操作，能较好满足不同层次人员的需要，如疫病监测、海关检疫、卫生防疫、集约化养殖到个体养殖等，易于大范围推广应用，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。PCV2抗原或抗体检测试纸条具有下列各项优点(1)特异性强，敏感性高。PCV2抗原或抗体检测试纸条以单克隆抗体或重组表达的dCap蛋白为基础制备而成；单克隆抗体为高亲和力的抗PCV2 dCap特异性均质抗体，特异识别PCV2 Cap衣壳蛋白，与PCV1无交叉反应；重组dCap蛋白为非全病毒抗原、安全性好，不含无关杂蛋白，具有良好抗原性，因此具有很高的特异性和敏感性。(2)操作简便快速。使用PCV2抗原或抗体检测试纸条检测PCV2抗原或抗体时，无需另配其它试剂，在2-10分钟内即可判定检测结果。(3)显示检测结果形象、直观准确。PCV2抗原或抗体检测试纸条以红棕色“|”和“||”作为检测的阴性和阳性标记，即在纤维素膜上显示一条棕红色“|”印迹表示在被检测样品液中PCV2病毒或抗体为阴性，两条棕红色“||”印迹表示在被检样品中PCV2病毒或抗体为阳性，结果判定形象、直观、准确，简单明了，不易出现假阴性和假阳性误判。(4)成本低，投资少。PCV2抗原或抗体检测试纸条可在检测现场完成操作，检测一步到位，成本低廉，投资少，见效快。附图说明图1是PCV2抗原及抗体检测试纸条侧视结构示意图；图2是PCV2抗原及抗体检测试纸条俯视结构示意图，图中支撑层1，样品端纤维层2，.金标玻璃棉3，.纤维素膜层4，手柄端吸水材料层5，对照印迹6，检测印迹7，样品端保护膜8，标记线9，手柄端保护膜10。图3是重组PCV2 dCap蛋白的抗原活性鉴定结果，图中A为重组蛋白的SDS-PAGE分析，B为重组蛋白的Western Blot鉴定，1为大肠杆菌BL21，2为含空载体pGEX-4T-1的诱导菌体，3为含重组质粒未诱导菌体，4.为含重组质粒诱导4h菌体，5.为纯化的重组GST-dCap融合蛋白，6为经凝血酶切割后的重组dCap蛋白，M.为蛋白质Marker。图4是抗PCV2 dCap单克隆抗体特异性鉴定结果，图中1为抗PCV2 dCap单克隆抗体mAb1特异性识别GST-dCap融合蛋白，2为抗PCV2 dCap单克隆抗体mAb2特异性识别GST-dCap融合蛋白，3为mAb1特异性识别PCV2病毒天然Cap蛋白，4为mAb2特异性识别PCV2病毒天然Cap蛋白，5为mAb1不识别PCV1重组Cap蛋白，6为mAb2不识别PCV1重组Cap蛋白。具体实施例方式PCV2抗原或抗体检测试纸条具有支撑层1，反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片层，吸附层固定在支撑层上，吸附层从样品端依次为纤维层2，金标纤维层3，纤维素膜层4，手柄端为吸水材料层5，在纤维素膜层4上印制有对照印迹“|”7和检测印迹“|”6，其排列组合为“||”。不吸水的支撑层薄片层用硬质塑胶片条，或不吸水的硬纸条，纤维层用玻璃棉，吸水材料层用吸水纸，纤维素膜层用硝酸纤维素膜，金标纤维层用吸附金标蛋白的玻璃棉，在玻璃棉与金标玻璃棉及吸水纸层上覆盖有保护膜，在玻璃棉与金标玻璃棉交界处对应的保护膜偏向玻璃棉一侧0.5cm处印制样品标记线。PCV2抗原检测试纸条的金标蛋白为胶体金标记抗PCV2去核定位信号肽衣壳蛋白(dCap)单克隆抗体mAb1，在纤维素膜层上的对照印迹(7)为山羊抗小鼠IgG多克隆抗体，检测印迹(6)为抗PCV2 dCap蛋白单克隆抗体mAb2；抗体检测试纸条的金标蛋白为胶体金标记重组PCV2 dCap蛋白，在纤维素膜层上的对照印迹(7)为抗PCV2 dCap蛋白单克隆抗体mAb1，检测印迹(6)为山羊抗猪IgG多克隆抗体。重组PCV2 dCap蛋白为利用原核高效表达系统表达和纯化的基因工程重组蛋白，可与PCV2阳性血清特异结合。抗PCV2 dCap蛋白单克隆抗体特异识别PCV2 Cap蛋白，与猪圆环病毒1型(PCV1)Cap蛋白无交叉反应，可有效区分PCV1和PCV2病毒。(1)重组PCV2 dCap蛋白的制备用基因工程技术高效表达PCV2去核定位信号肽衣壳蛋白(dCa本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪圆环病毒２型抗原或抗体检测试纸条，其特征在于：它具有支撑层（１），反应试剂载体吸附层，支撑层为不吸水薄片层，吸附层固定在支撑层上，吸附层从样品端依次为纤维层（２），金标纤维层（３），纤维素膜层（４），手柄端为吸水材料层（５），在纤维素膜层（４）上印制有对照印迹“｜”（７）和检测印迹“｜”（６），其排列组合为“｜｜”。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：周继勇，郭军庆，商绍彬，申会刚，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]