一种五分类白细胞质控物及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种制备五分类白细胞质控物的方法以及根据该方法制备的白细胞质控物。根据本发明专利技术方法得到的白细胞质控物能完整地保持每一类白细胞光散射特性，稳定性又远远高于真实白细胞，从而可用于基于多角度散射光原理的五分类血液分析仪的质控。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术主要涉及血液质控物，具体地说，主要涉及白细胞质控 物的制备方法以及根据该方法制备的白细胞质控物。
技术介绍
血液质控物是一种含有单一或多组分血细胞或血细胞模拟物的 液体，具备如同血液一样的可检测特性，用于日常监控血液分析4义 的准确性和精确性。随着血液分析仪的不断发展，其配套质控物也 必须解决参数增加的问题，如由三分类白细胞质控物发展到五分类 白细胞或更多参数的质控物。与三分类血液分析仪相比，五分类分 析仪更多地利用了白细胞的电学、光学、化学染色等多方面特性， 而实现白细胞的五分类检测。不同类型的五分类仪器其检测原理不 同，相应的配套白细胞质控物也需依据不同原理，而更强调"量身订^t"。如美国专利6762055提到，用于某类型血液分析仪的配套 质控物，很可能与另一类型血液分析仪无法配套使用。分类白细胞质控物曾用花粉、乳胶颗粒、各种有机材料及固定 的红细胞等模拟。现有技术对五分类白细胞模拟物的制备方法，可 ;慨括为以下两种l)处理动物红细胞进行才莫拟；2)处理哺乳动物白细 胞(通常是人白细胞)进行模拟。将动物红细胞用于模拟五分类白细胞组分时，因对细胞特性的 要求不仅限于筒单的体积大小参数，而是扩展到电导性、光散射、 细胞化学染色等特性，因此，动物红细胞必须经过恰当处理，如美 国专利5320964, 5512485中提到，白细胞模拟物由至少能模拟人白 细胞两种物理特性的红细胞组成。通过一定的方法如用含醛类固定剂的低渗溶液处理爬行类动物红细胞，改变红细胞内血红蛋白含量， 从而改变红细胞的光学、电学特性，来模拟单核、淋巴、中性粒细 胞。又如用血红蛋白变性处理液，使红细胞内的血红蛋白发生变性沉淀，来模拟人嗜酸粒细胞。美国专利6146901也描述用含多羟基 醇、固定剂和/或非离子表面活性剂的混合溶液处理红细胞，通过改 变这些组分的相对浓度和彼此作用时间，来获得需要的白细胞特征。 最终，将这些白细胞类似物与可溶解的人红细胞及稳定的血小板PLT 或PLT类似物混合，组成为多参数全血质控物。用动物红细胞才莫拟人白细胞的缺点是动物红细胞在细胞形态、 细胞膜、细胞浆颗粒度、细胞核等内部结构方面都与人白细胞的特 征相差很大，通常只能有限地模拟某类白细胞的个别特征。而且， 不同类型的五分类血液分析仪，其检测原理不同，很可能出现在某 类型仪器上模拟的某类白细胞粒子，在另一类型仪器上表现为细胞 碎片或其他异常状态。即使如专利所说改变红细胞血红蛋白含量和 性质，也无法完全模拟不同类白细胞的多种特性，尤其在荧光结合、 颗粒复杂度、细胞化学染色等方面，动物红细胞很难表现出与真实 白细胞一致的检测特性，而限制其加工方法的应用。对五分类血液 分析仪来说，用动物红细胞模拟人五分类白细胞，实现方法难度大， 复杂，且兼容性很差。本专利技术人的实验结果也表明，在基于多角度 散射光原理的血液分析仪上，用动物有核红细胞模拟的白细胞粒子， 聚类性很差，无法获得精确的白细胞分类。如图1、图2的散点图分 布。从已公开的专利也可看到，没有用动物红细胞完全模拟人五分 类白细胞，而用于五分类分析仪质控的制备方法。将哺乳动物白细胞用于制备五分类白细胞模拟物，能够更好地 应对不同原理的分析仪在检测过程中反应的复杂性。总的来说，现 有技术处理白细胞的方法包括溶血、固定、洗涤等步骤。如美国专 利6406915， 6403377， 6399388， 6221668, 6200500, 5981282， 5731205， 5677145， 5672474， 5270208， 5262327描述用Tris—氯化铵溶血剂完全溶解红细胞，分离出人白细胞，再对白细胞进行固定。最终保 存在添加脂蛋白的保存液中，使白细胞模拟物接近真实白细胞特征。专利6762055， 6514763的主要方法也是先用温和的化学法去除红细 胞，留下完好的白细胞。再通过逐级固定方法固定白细胞，使其稳 定性增强，最终获得白细胞模拟物。该专利强调溶血剂的选择性使 用和独特的固定处理方法，使白细胞保存时可不需胆固醇等脂类物 质的添加。美国专利6187590， 5858790中白细胞模拟物的制备方法 同样也是溶解红细胞，分离出白细胞后继续固定白细胞。专利技术人Young 的美国专利5529933实施例中，也阐述了用人白细胞制备五分类白 细胞模拟物的方法。基本思路也是溶血、固定、洗涤保存。此外， 美国专利6759246描述了 一种用猪粒细胞;f莫拟人淋巴细胞的方法。 中性粒、嗜酸粒细胞也可由猪粒细胞进行模拟，而单核细胞模拟物 可源自牛粒细胞。用哺乳动物白细胞模拟人五分类白细胞，现有技术的方法都需 要经过溶血分离白细胞；稳定或固定白细胞；洗涤保存白细胞这三 个基本步骤。方法的主要缺点在于l)溶血过程复杂。如需用溶血剂 多次进行红细胞的彻底溶解，或溶血后需反复多次洗去残留溶血剂， 分离出白细胞，再进行下一步的固定处理。事实上，在完全溶解红 细胞的过程中，各类白细胞的光散射特性很容易发生改变，特别是 粒细胞的细胞结构复杂度散射特性会明显变化。其次，反复洗涤过 程既增加白细胞损失的几率，又会进一步改变白细胞的光散射特性。 参见图4。与图3相比，可见粒群细胞已消失。美国专利5270208中 提到，新鲜全血用等渗盐洗涤的越多，其直方图变化越大。即使用 含醛类固定剂的溶液洗涤固定，直方图也不正确。而需添加脂蛋白 保护剂。2)固定时间较长为增加白细胞的稳定性，现有技术的固定 时间多数都会在2小时以上。固定剂的长时间作用也会不同程度地 改变白细胞的光散射特性，如增加细胞高角度光散射强度。3)特殊保 存液成分的添加。如上述引用专利中提到的，在细胞保存液中需添加脂蛋白类保护剂。特殊成分的添加一方面增加了成本，另一方面， 在组合成全血质控物后，脂类物质又会影响其中红细胞的稳定性， 而需再添加其他组分来拮抗脂类物质的副作用。
技术实现思路
本专利技术的其它方面和优点根据以下描述和具体实施方案来说是 显而易见的。本专利技术所要解决的技术问题是获得能完整地保持每一 类白细胞 光散射特性的五类白细胞，使之与相应的各类真实白细胞具有一致 或相似的被检测特征，而稳定性又远远高于真实白细胞，从而可用 于基于多角度散射光原理的五分类血液分析仪的质控。因此，本专利技术主要涉及处理哺乳动物白细胞的方法，主要目的 是筒化复杂的溶血过程，完好地保持各类白细胞的光散射及其他特性，使其具有与新鲜血相似的特征；同时，缩短固定时间，而不影 响白细胞用于质控的稳定性；在保存方面，也无需添加脂蛋白类物 质，能更好地与其他细胞组分兼容。因此，本专利技术的一个目标是提供制备五分类白细胞质控物的方 法，所述方法包括1) 使浓缩血细胞与溶血剂和/或渗透压调节剂接触；2) 在上述反应混合液中加入固定剂，进行快速固定；3) 用等渗溶液调节上述混合液中溶血剂、固定剂的浓度；4) 加入固定剂，进行强化固定。本专利技术的另 一个目标是提供上述方法制备得到的五分类白细胞 质控物。本专利技术的再另 一个目标是提供包含上述五分类白细胞质控物的 全血质控物。附图说明图1是固定的禽类红细胞在基于多角度散射光原理的血液分析仪的两个白细胞检测通道——即白细胞四分类DIFF通道，及嗜碱细 胞BASO通道的散点图。图2是用两种本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备五分类白细胞质控物的方法，所述方法包括：１）使浓缩血细胞与溶血剂和／或渗透压调节剂接触；２）在上述反应混合液中加入固定剂，进行快速固定；３）用等渗溶液调节上述混合液中溶血剂、固定剂的浓度；４）加入固定剂，进行强化固定。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郭晓楠，
申请(专利权)人：深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]