嵌合非整倍体干细胞的选择，增殖和使用制造技术

细胞群中细胞核型的分布可决定干细胞的表型及其分化成为预期细胞类型，发挥正常功能的能力，并体现了癌症等不良事件的风险。因此，细胞群非整倍体嵌合情况的测定可用于鉴定和／或维持干细胞的预期特性以及消除不良特性，并在其染色体互补水平对其进行定义。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】嵌合非整倍体干细胞的选择，增殖和使用与相关专利申请的交叉引用本申请主张于2005年11月9日提交的美国临时专利 申请60/735,715的优先涉又，其全文在此引用作为参考。经联邦资助的研究和开发所形成专利技术的权利的声明本专利技术在政府资助下产生，该资助由国家卫生研究院 授予，资助号K02MH01723。 政府对本专利技术具有一定的权利。
技术介绍
干细月包具有在体内发育成为多种不同细月包类型的潜 力。干细胞理^仑上可无限制地分裂以补充其它细胞。当干细胞分 裂时，各新细胞既可能维持为干细胞，也可能成为具有特定功能的 其它细月包类型，例如月几肉细月包，红血细月包或脑细月包。干细月包通常 被分类为全能性或多能性。全能性干细胞具有完全的分化潜力 它可生成体内所有不同类型的细胞。受精卵细胞是全能性干细胞 的一个范例。多能性干细胞可生成体内来自于三个主要生殖细胞 层或胚胎本身的任何细胞类型。祖细胞还可分化成为特化细胞。 然而，与干细力包不同，-且细力包不能自我更新，且它们只能生成一种 或少lt几种细"包类型。 干细胞包括胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎干细胞来 自于胚胎。为进行研究，可从体外受精(例如在体外受精诊所)的卵子发育而成的胚胎获取胚胎干细胞，并在供体的知情同意下为 研究目的进行捐献。胚胎通常在四或五天呈中空樣"求状(成为胚嚢)时获取。胚嚢包括三个结构滋养层，即围绕胚嚢的细月包层； 嚢胚腔，即胚嚢内的空腔；以及内细胞团，在嚢胚腔一端约30个 细胞的群。举例来说，可通过分离内细胞团并在体外生长获得胚 胎干细月包。内细月包团通常生长于飼养细月包层(例如小鼠胚胎成纤干细胞具有多能性并可成为体内的任何细胞类型。 成体干细力包为未分化的细力包。该种细"包可/人组织或器 官中的分化细胞中鉴定得到。成体干细胞可自我更新，并能分化 成为组织或器官的特化细胞类型。人胚胎干细胞(HESCs)在基础科学和治疗策略(包括再 生医学中的移植)中具有极大的应用潜力(Amit M,等人AW 227:271-278 (2000))。 HESCs 4吏用上的一大挑战是维持稳定的细胞 系，特别是在延续传^之后(Amit M,等人5/o/ 227:271-278 (2000》Carpenter MK,等人Dev Z)， 229:243-258 (2004》Rosier ES， 等人Devi^" 229:259-274 (2004))。 事实上，最近才艮道了由非整倍 体干细月包克隆扩增导致的NM-资助的HESC系(例如Hl， H7, H9 ) 的染色体不稳定性(Draper JS，等人Nat Biotechnol 22:53-54 (2004); LakshmipathyU,等人5Vem Ce〃s 22:531-543 (2004); Pera MF， 7VW 5/o&c/wo/ 22:42-43 (2004》。 The most frequently reported chromosomal abnormalities were hyperploidies, particularly trisomies of chromosomes 12, 17 or 20 (Draper JS5 等人 Nat Biotechnol 22:53-54 (2004); Lakshmipathy U,等人 Stem Cells 22:531-543 (2004》Pera MF, Nat Biotechnol 22:42-43 (2004)), although thegenerality of chromosomal instability is uncertain (Thomson JA, 等人 Science 282:1145-1147 (1998); Amit M，等人Dev Biol 227:271-278 (2000); ReubinoffBE,等人 Nat Biotechnol 18:399-404 (2000); Thomson JA，等人Trends Biotechnol 18:53-57 (2000); Xu C,等人. Nat Biotechnol 19:971-974 (2001); Cheng L,等人Stem Cells 21 : 131-142 (2003》.此前，细胞遗传学家曾忽略了未能鉴定所有染色体的 细胞遗传学分析，因为人们认为缺失的染色体体现了细胞遗传学分析的不准确性，而非真的存在染色体缺失。事实上，遗传:技术人员协会的细胞遗传实—睑室手册指出如果在中期存在的染色体数量少于45条，可以^暇定部分 染色体在处理过程中遗失，且中期不适合进行分斗斤。参见Barch等人,(1997) The AGT Cytogenetics Laboratory Manual. Lippincott: Philadelphia。本专利技术指出了非整倍体在干细胞中的作用并提供了在 其它问题中干细胞使用和分析的工具。专利技术概述本专利技术提供了检测和定义干或祖细胞的非整倍体嵌合情况的方法。在一些实施方式中，该方法包括检测群中非整倍体嵌合体的存在，其中在群内的不同细胞中至少4企测到3种不同的核型。在一些实施方式中，其中对群内的至少30个细胞进行 非整倍性筛选。在一些实施方式中，对细胞的非整倍性进行记录。在一些实施方式中，在群内的不同细J包中至少才企测到 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20或更多种不同的核型。在一些实施方式中，该方法包括"险测具有净亚4咅体嵌 合核型的细月包，并乂人具有净亚倍体嵌合核型的细月包中筛选染色体中 至少部分为亚倍体的干或祖细胞系以进行分化，进一 步增殖或移 植。在一些实施方式中，该方法包括"险测具有净亚4咅体嵌 合核型的细胞，并从具有净亚倍体嵌合核型的细胞中筛选染色体中 至少部分为亚4咅体的干或3且细月包系以进4亍药物筛选。在一些实施方式中，该方法包括^r测具有净超倍体嵌 合核型的细胞，并从具有净超倍体嵌合核型的细胞中筛选染色体中 至少部分为超倍体的干或细l包系以进4亍分化，进一 步增殖或移 植。在一些实施方式中，该方法包括4全测具有净超倍体嵌 合核型的细胞，并从具有净超倍体嵌合核型的细胞中筛选染色体中 至少部分为超倍体的干或祖细胞系以进行药物筛选(例如，筛选可 以选择性抑制或杀死细胞的药物)。在一些实施方式中，该方法进一步包括在4企测步骤前 通过至少一个周期(例如，至少2， 5, 10, 20， 30， 40, 50, 60 70, 80, 100或更多)的细胞分裂对干细胞进行传代。在一些实施方式中，对细月包群中至少10%， 20%, 30%， 40%, 50%， 60%， 70%, 80%, 90%的细1包的核型进4亍了才企测。在一些实施方式中，该才企测步驶《包括了包含多重荧光 原位杂交在内的荧光原^立杂交(FISH)。 在一些实施方式中，该4企测 步骤包括了光谱核型分析技术(SKY)。 在一些实施方式中，该4企测 步骤包括了G显带。在一些实施方式中，该才企测步骤包括了 DAPI 或其它染色体可碎见化染色或才支术。在一些实施方式中，该4企测步 骤包括了流式细胞术。本专利技术还提供了与能够分化成为预期细胞类型的细本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测和定义干或祖细胞群的非整倍体嵌合情况的方法，该方法包括：　检测群中非整倍体嵌合体的存在，其中在群内的不同细胞中至少检测到３种不同的核型。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏珊娜厄尔林彼得森，云春容，史蒂文斯卡斯楚普雷汉，茹尔金威廉韦斯特拉，罗尔德军明曾，
申请(专利权)人：斯克利普斯研究院，
类型：发明
国别省市：US[美国]