【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种基于Ion?ProtonTM测序平台的小片段DNA文库的构建方法,包括以下步骤:(1)样品DNA提取;(2)末端修复:将样品DNA与试剂I混合,室温下孵育进行反应;(3)片段筛选:对步骤(2)所得的混匀DNA液进行片段筛选及纯化,得到片段集中的平末端DNA片段;(4)接头连接:将步骤(3)所得到的DNA片段与试剂II、接头、特异标签序列反应后纯化,得到加了接头的DNA片段;(5)PCR扩增:将步骤(4)所得到的DNA片段加入试剂III,进行PCR扩增,纯化,得到小片段DNA文库;(6)文库检测:将步骤(5)所得到的扩增产物采用Q?PCR和Agilent?Bioanalyzer2100检测文库浓度及文库片段大小;(7)高通量测序:对步骤(6)所得到的合格文库进行高通量测序,优选采用Ion?ProtonTM测序平台;其中,步骤(2)中的试剂I的pH值为7.4~7.6,溶剂为水,溶质为:5mM~20mM缓冲盐溶液、50mM~200mM可溶性盐溶液、1mM~5mM二硫苏糖醇、8mM~12mM?ATP、10mM?dNTPs混合液和End?Repair酶;其中缓冲盐溶液为Tris?HCl、磷酸 ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:糜庆丰,罗东红,陈治,李君宝,饶兴蔷,陈样宜,
申请(专利权)人:广州爱健生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:
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