本发明专利技术提供了一种无创产前检测胎儿21、18和13三体综合征的阳性质控品及其制备方法，属于胎儿染色体非整倍体的无创产前检测范畴。本发明专利技术的制备步骤包括：将患有21、18、13三体综合征胎儿流产组织的DNA均打断成长度为160～200bp的DNA片段；按比例分别将打断后回收的流产组织DNA片段加入到混合血浆中；最后提取血浆游离总DNA，超纯水稀释后制备成不同浓度的阳性质控品。本发明专利技术为一种白色透明DNA溶液，具有稳定、易保存、便捷、无毒等优点，且能够有效的避免同一批次其它样本的检测结果的偏差，增加21、18和13三体综合征无创产前检测的准确性和可靠性。
【技术实现步骤摘要】
【专利说明】一种无创产前检测胎儿21、18和13三体综合征的阳性质控 品及其制备方法 所属领域 本专利技术属于生物制品
，属于胎儿染色体非整倍体的无创产前检测范畴， 涉及21、18、13三体综合征检测的阳性质控品及其制备方法。 专利技术背景 染色体非整倍体是指相对于人的正常的46条染色体而言，细胞中的某一条或几 条染色体数目增加或减少，与婴幼儿期显著的发病率和死亡率有着密切关系。该类疾病的 发病率随着孕妇年龄的增高而增高。据文献报道我国每年出生染色体异常的新生儿约10 万人，在活婴儿中染色体异常者占0. 3%，而其中21三体、18三体、13三体综合征是临床最 常见和最易出现的染色体异常疾病。新生儿中染色体异常的发病率为1/160,其中21三体 综合征（唐氏综合征，DS)、18三体综合征（爱德华氏综合征）和13三体综合征（帕陶氏 综合征）是三种最主要常染色体非整倍体疾病，在新生儿中发病率分别为1/800?1/600、 1/7000?1/3500和1/6000?1/5000。目前对21三体、18三体、13三体综合征的治疗缺 乏有效方法，因此普及染色体疾病的产前筛查和产前诊断，对降低出生缺陷的发生有着非 常重要的意义。这有利于提高人口质量，实现优生优育，尤其对高龄孕妇（大于35岁）的 胎儿进行产前筛查，以防止染色体异常患儿的出生。 在现有染色体异常检测方法中，染色体核型分析技术是检测染色体异常的"金标 准"，但核型分析在很大程度上又要依赖于细胞样品的质量。如果样本细胞量小或被污染， 则很难或不能检测出结果。目前，国内外广泛采用孕妇血清标记物来大面积筛查DS胎儿。 由于DS胎儿的孕妇血清甲胎蛋白（AFP)和雌三醇（uE3)低于平均水平，而绒毛膜促性腺激 素（HCG)高于平均水平，因此，利用"三联筛查"方法对妊娠期（孕15?21周）孕妇进行 这三项指标的检测。该方法检出率为48%?83%，假阳性率约为5%。这些检测偏差的结 果将会给染色体异常新生儿家庭带来痛苦，增加社会的负担。因此，开发一种准确性、灵敏 度和可靠性都很高的染色体疾病的产前筛查和产前诊断的方法就会显得尤为重要和迫在 眉睫。 那么，利用高通量测序技术对胎儿染色体非整倍体进行检测的方法相比传统方法 具有明显优势。该方法只需抽取母体外周血进行检测，可避免传统的侵入性方法可能给孕 妇和胎儿带来的危害；另外直接检测母亲和胎儿的DNA序列，相比于检测血清蛋白标志物 和超声波检测，准确性、灵敏度及可靠性都大大提高。因此，通过深度测序，能够对孕妇血浆 微量胎儿游离DNA进行准确检测，可以克服传统检测方法因胎儿游离DNA含量过低而导致 检测结果假阴性过高的缺点。 目前，市场上基于高通量基因测序法检测21、18和13三体综合征的诊断产品非 常少，且基本没有提供配套的阳性质控品，这严重影响染色体疾病的产前筛查和诊断的准 确性和可靠性。本专利技术以高通量测序技术用于孕妇血浆游离胎儿DNA的染色体非整倍体 (T21、T18和T13)国家标准品为溯源，然后将患有21三体、18三体、13三体综合征胎儿流产 组织的DNA都打断成长度为160?200bp的DNA片段，按照特定比例将上述打断的DNA片 段加入到正常未孕女性血浆中并混匀，最后提取混匀血浆游离DNA，制备阳性质控品。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种无创产前检测胎儿21、18、13三体综合征的阳性质控品及 其制备方法。为了实现本专利技术目的，专利技术了一种基于高通量测序无创产前检测胎儿染色体 非整倍体21、18和13三体综合征的阳性质控品。 本专利技术的阳性质控品制备方法如下： (1)取5?10例正常未孕女性血浆混合，抽提血浆游离DNA后测定DNA浓度； (2)分别提取21、18和13三体综合征胎儿流产组织DNA，超声波打断成片段后 E-gel电泳回收160?200bp的片段并测DNA浓度； (3)将各回收的流产组织DNA片段分别按下列公式加入混合血浆中；【主权项】1. ，其特 征在于阳性质控品由四种DNA和超纯水组成，分别为正常未孕女性血浆游离DNA、21三体综 合征胎儿流产组织DNA、18三体综合征胎儿流产组织DNA、13三体综合征胎儿流产组织DNA 片段；且阳性质控品的其制备方法为： (1) 取5?10例正常未孕女性血浆混合，抽提血浆游离DNA后测定DNA浓度； (2) 分别提取21、18和13三体综合征胎儿流产组织DNA，超声波打断成片段后E-gel 回收160?200bp的片段并测DNA浓度； (3) 将各回收的流产组织DNA片段分别按比例加入混合血浆中； (4) 提取（3)中血浆游离总DNA，溶解入超纯水后制备成不同浓度的阳性质控品。2. 根据权利要求1所述的阳性质控品，其特征还在于所述"正常未孕女性血浆"为20? 40周岁的染色体结构正常未孕女性的外周静脉血浆。3. 根据权利要求1所述的阳性质控品，其特征还在于制备方法步骤（3)中所述"混合 血浆"为5?10例正常未孕女性血浆混合后的总血浆，步骤（4)中所述"血浆游离总DNA" 为分别将21、18、13三体综合征胎儿流产组织DNA片段按比例加入到混合血浆后所得血浆 中的所有DNA。4. 根据权利要求1和3所述的阳性质控品，其特征还在于将回收的各流产组织DNA片 段分别按下列公式加入混合血浆中：(其中：DNAT21、DNAT18、DNAn3分别为21、18、13三体综合征胎儿流产组织DNA打断回收 后加入混合血浆中的DNA量，DNAMix为正常未孕女性混合血浆中游离的DNA量）。【专利摘要】本专利技术提供了，属于胎儿染色体非整倍体的无创产前检测范畴。本专利技术的制备步骤包括：将患有21、18、13三体综合征胎儿流产组织的DNA均打断成长度为160～200bp的DNA片段；按比例分别将打断后回收的流产组织DNA片段加入到混合血浆中；最后提取血浆游离总DNA，超纯水稀释后制备成不同浓度的阳性质控品。本专利技术为一种白色透明DNA溶液，具有稳定、易保存、便捷、无毒等优点，且能够有效的避免同一批次其它样本的检测结果的偏差，增加21、18和13三体综合征无创产前检测的准确性和可靠性。【IPC分类】C12Q1-68【公开号】CN104531842【申请号】CN201410712021【专利技术人】李明, 高旭年, 杨学习, 雷孝锋, 朱安娜, 杨旭, 李尔华 【申请人】中山大学达安基因股份有限公司【公开日】2015年4月22日【申请日】2014年11月27日本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种无创产前检测胎儿21、18和13三体综合征的阳性质控品及其制备方法，其特征在于阳性质控品由四种DNA和超纯水组成，分别为正常未孕女性血浆游离DNA、21三体综合征胎儿流产组织DNA、18三体综合征胎儿流产组织DNA、13三体综合征胎儿流产组织DNA片段；且阳性质控品的其制备方法为：(1)取5～10例正常未孕女性血浆混合，抽提血浆游离DNA后测定DNA浓度；(2)分别提取21、18和13三体综合征胎儿流产组织DNA，超声波打断成片段后E‑gel回收160～200bp的片段并测DNA浓度；(3)将各回收的流产组织DNA片段分别按比例加入混合血浆中；(4)提取(3)中血浆游离总DNA，溶解入超纯水后制备成不同浓度的阳性质控品。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李明，高旭年，杨学习，雷孝锋，朱安娜，杨旭，李尔华，
申请(专利权)人：中山大学达安基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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