染色体非整倍体(T21、T18、T13)检测试剂盒的质控品及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种染色体非整倍体(T21、T18、T13)检测试剂盒的质控品。该质控品包括阳性参考品和阴性参考品，所述阳性参考品是由P21溶液、P18溶液和P13溶液组成的成套参考品，所述P21溶液、P18溶液和P13溶液均由溶质和溶剂组成，所述P21溶液、P18溶液和P13溶液的溶剂均为正常溶液，所述正常溶液为染色体核型分析结果为46，XX的正常未孕女性的离体血浆；所述P21溶液的溶质为PL21，所述P18溶液的溶质为PL18，所述P13溶液的溶质为PL13。本发明专利技术的质控品经济、简便、有效地解决了染色体非整倍体(T21、T18、T13)检测试剂盒的质量检定和性能评价问题。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物领域中一种染色体非整倍体（T21、T18、T13)检测试剂盒的质控 品及其应用。
技术介绍
染色体疾病主要指由于染色体数目、结构异常所引起的疾病，临床上以21-三体、 18-三体、13-三体等染色体非整倍体疾病最为常见，患儿多表现为智力障碍、发育迟缓、多 发畸形或成年后生育障碍等，目前尚无有效的治疗手段。产前筛查胎儿染色体非整倍体疾 病对于预防出生缺陷和优生优育具有重要的意义。目前对于胎儿染色体非整倍体疾病的检 测主要基于血清学筛查、超声检查和侵入性产前诊断。传统的基于血清学和超声的无创产 前筛查方法不仅受孕妇的年龄和孕周的限制，而且假阳性率较高，检出率较低。基于绒毛膜 穿刺、羊水穿刺、脐带血穿刺的侵入性产前诊断，准确性高，但是取样过程中存在流产、宫内 感染、致畸等风险，且检测周期较长。 1997年，Lo等人（Lo Y. M. et al. 1997. Lancet)通过用PCR法扩增母体外周血浆 中Y染色体特异的DNA片段，证明在怀有男性胎儿的母血浆中存在胎儿游离DNA (ce 11-free fetal DNA，cffDNA)。2010 年，Lo 等人又在 Science Translational Medicine 杂志发表文 章，第一次证明母血外周血浆存在胎儿的全基因组cffDNA序列，使得从理论上可以利用母 体外周血浆进行针对胎儿的几乎全部染色体非整倍体的无创产前检测。 胎儿游离DNA (cell-free fetal DNA，cffDNA)片段在母体血浆中稳定存在并随孕 周增加含量有所增高，随孕妇分娩而快速消失，是无创产前诊断的理想材料。但是，由于母 体外周血血浆中胎儿游离DNA含量极低且受大量来源于母体背景的游离DNA的干扰，需要 非常灵敏和稳定的检测技术才能对胎儿游离DNA的各种遗传状态做出准确判断。随着新一 代测序技术的出现，其高通量并行化序列分析的技术特点使得通过母血检测胎儿游离DNA 更加简便、快速和稳定，无创产前基因检测技术应运而生。它是一项安全、准确、简单、快速 的新型胎儿染色体疾病检测技术，具有远高于血清学产前筛查、基本接近产前诊断的准确 性，同时具有非侵入性特点，是目前产前诊断技术体系的补充。 目前，无创产前基因检测技术作为一种产前辅助诊断已在多个国家和地区快速、 广泛的开展。国内的多家厂商均已研制出基于无创产前基因检测技术的染色体非整倍体 (T21、T18、T13)检测试剂盒，由于孕中期孕妇外周血中胎儿DNA的含量（胎儿游离DNA占 外周血中游离DNA总量的质量百分含量）通常在10%的左右，上述检测试剂盒的检出率均 以这一数据为基础。博奥生物集团有限公司已开发出最低检出限为5%的检测试剂盒。但 是，这些已有的试剂盒均未提供配套的质控品用于试剂盒的质量检定和性能评价。目前，只 有"高通量测序用外周血胎儿染色体非整倍体（T21、T18和T13)国家参考品"能够用于相 关试剂盒的性能评价，但是，它的售价较高（180万/套），使用成本较高。市面上尚无其它 相关广品。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种染色体非整倍体（T21、T18、T13)检测 试剂盒的质控品，该质控品可替代高通量测序用外周血胎儿染色体非整倍体（T21、T18和 T13)国家参考品。 本专利技术所提供的染色体非整倍体检测试剂盒的质控品，包括阳性参考品和阴性参 考品； 所述阳性参考品是由P21溶液、P18溶液和P13溶液组成的成套参考品，所述P21 溶液、P18溶液和P13溶液均由溶质和溶剂组成，所述P21溶液、P18溶液和P13溶液的溶 剂均为正常溶液，所述正常溶液为染色体核型分析结果为46, XX的正常未孕女性的离体 血浆；所述P21溶液的溶质为PL21，所述P18溶液的溶质为PL18,所述P13溶液的溶质为 PL13 ;所述PL21由下述方法制备：提取染色体核型分析结果为47，XN，+21的人基因组DNA， 对所述人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，对所述扩增产物采用酶切法进行片 段化，用磁珠回收大小为150bp-200bp区间内的DNA片段，所述回收的大小为150bp-200bp 区间内的DNA片段即为PL21 ;所述PL18由下述方法制备：提取染色体核型分析结果为47， XN，+18的人基因组DNA，对所述人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，对所述扩增 产物采用酶切法进行片段化，用磁珠回收大小为150bp-200bp区间内的DNA片段，所述回收 的大小为150bp-200bp区间内的DNA片段即为PL18 ;所述PL13由下述方法制备：提取染色 体核型分析结果为47, XN，+13的人基因组DNA，对所述人基因组DNA进行全基因组扩增得 到扩增产物，对所述扩增产物采用酶切法进行片段化，用磁珠回收大小为150bp-200bp区 间内的DNA片段，所述回收的大小为150bp-200bp区间内的DNA片段即为PL13 ; 所述阴性参考品为选自下述二十四种溶液中的N种溶液，N为小于等于24且大于 等于1的一个自然数：所述正常溶液、T1溶液、T2溶液、T3溶液、T4溶液、T5溶液、T6溶液、 T7溶液、T8溶液、T9溶液、T10溶液、T11溶液、T12溶液、T14溶液、T15溶液、T16溶液、T17 溶液、T19溶液、T20溶液、T22溶液、XXY溶液、X0溶液、XXX溶液和XYY溶液；所述二十四种 溶液中，除所述正常溶液外的其它23种溶液的溶剂均为所述正常溶液；所述T1溶液的溶质 为NT1，所述T2溶液的溶质为NT2,所述T3溶液的溶质为NT3,所述T4溶液的溶质为NT4， 所述T5溶液的溶质为NT5,所述T6溶液的溶质为NT6,所述T7溶液的溶质为NT7,所述T8 溶液的溶质为NT8,所述T9溶液的溶质为NT9,所述T10溶液的溶质为NT10,所述T11溶液 的溶质为NT11，所述T12溶液的溶质为NT12,所述T14溶液的溶质为NT14,所述T15溶液的 溶质为NT15,所述T16溶液的溶质为NT16,所述T17溶液的溶质为NT17,所述T19溶液的溶 质为NT19,所述T20溶液的溶质为NT20,所述T22溶液的溶质为NT22,所述XXY溶液的溶质 是NXXY，所述X0溶液的溶质是NX0,所述XXX溶液的溶质是NXXX，所述XYY溶液的溶质是 NXYY ； 所述NT1由方法1制备，所述方法1为：提取染色体核型分析结果为47, XN，+1的 人基因组DNA，对所述人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，对所述扩增产物采用 酶切法进行片段化，用磁珠回收大小为150bp-200bp区间内的DNA片段，所述回收的大小为 150bp-200bp区间内的DNA片段即为NT1 ; 所述 NT2、NT3、NT4、NT5、NT6、NT7、NT8、NT9、NT10、NT11、NT12、NT14、NT15、NT16、 NT17、NT19、NT20、NT22、NXXY、NX0、NXXX、NXYY的制备方法与所述方法1的区别仅在于将所 述方法1中的染色体核型分析结果为47, XN，+1的人基因组DNA分别替换为染色体核型分 析结果为47, XN，+2的人基因本文档来自技高网...

【技术保护点】
染色体非整倍体检测试剂盒的质控品，包括阳性参考品和阴性参考品；所述阳性参考品是由P21溶液、P18溶液和P13溶液组成的成套参考品，所述P21溶液、P18溶液和P13溶液均由溶质和溶剂组成，所述P21溶液、P18溶液和P13溶液的溶剂均为正常溶液，所述正常溶液为染色体核型分析结果为46，XX的正常未孕女性的离体血浆；所述P21溶液的溶质为PL21，所述P18溶液的溶质为PL18，所述P13溶液的溶质为PL13；所述PL21由下述方法制备：提取染色体核型分析结果为47，XN，+21的人基因组DNA，对所述人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，对所述扩增产物采用酶切法进行片段化，用磁珠回收大小为150bp‑200bp区间内的DNA片段，所述回收的大小为150bp‑200bp区间内的DNA片段即为PL21；所述PL18由下述方法制备：提取染色体核型分析结果为47，XN，+18的人基因组DNA，对所述人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，对所述扩增产物采用酶切法进行片段化，用磁珠回收大小为150bp‑200bp区间内的DNA片段，所述回收的大小为150bp‑200bp区间内的DNA片段即为PL18；所述PL13由下述方法制备：提取染色体核型分析结果为47，XN，+13的人基因组DNA，对所述人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，对所述扩增产物采用酶切法进行片段化，用磁珠回收大小为150bp‑200bp区间内的DNA片段，所述回收的大小为150bp‑200bp区间内的DNA片段即为PL13；所述阴性参考品为选自下述二十四种溶液中的N种溶液，N为小于等于24且大于等于1的一个自然数：所述正常溶液、T1溶液、T2溶液、T3溶液、T4溶液、T5溶液、T6溶液、T7溶液、T8溶液、T9溶液、T10溶液、T11溶液、T12溶液、T14溶液、T15溶液、T16溶液、T17溶液、T19溶液、T20溶液、T22溶液、XXY溶液、XO溶液、XXX溶液和XYY溶液；所述二十四种溶液中，除所述正常溶液外的其它23种溶液的溶剂均为所述正常溶液；所述T1溶液的溶质为NT1，所述T2溶液的溶质为NT2，所述T3溶液的溶质为NT3，所述T4溶液的溶质为NT4，所述T5溶液的溶质为NT5，所述T6溶液的溶质为NT6，所述T7溶液的溶质为NT7，所述T8溶液的溶质为NT8，所述T9溶液的溶质为NT9，所述T10溶液的溶质为NT10，所述T11溶液的溶质为NT11，所述T12溶液的溶质为NT12，所述T14溶液的溶质为NT14，所述T15溶液的溶质为NT15，所述T16溶液的溶质为NT16，所述T17溶液的溶质为NT17，所述T19溶液的溶质为NT19，所述T20溶液的溶质为NT20，所述T22溶液的溶质为NT22，所述XXY溶液的溶质是NXXY，所述XO溶液的溶质是NXO，所述XXX溶液的溶质是NXXX，所述XYY溶液的溶质是NXYY；所述NT1由方法1制备，所述方法1为：提取染色体核型分析结果为47，XN，+1的人基因组DNA，对所述人基因组DNA进行全基因组扩增得到扩增产物，对所述扩增产物采用酶切法进行片段化，用磁珠回收大小为150bp‑200bp区间内的DNA片段，所述回收的大小为150bp‑200bp区间内的DNA片段即为NT1；所述NT2、NT3、NT4、NT5、NT6、NT7、NT8、NT9、NT10、NT11、NT12、NT14、NT15、NT16、NT17、NT19、NT20、NT22、NXXY、NXO、NXXX、NXYY的制备方法与所述方法1的区别仅在于将所述方法1中的染色体核型分析结果为47，XN，+1的人基因组DNA分别替换为染色体核型分析结果为47，XN，+2的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+3的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+4的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+5的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+6的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+7的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+8的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+9的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+10的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+11的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+12的人基因组DNA、、染色体核型分析结果为47，XN，+14的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+15的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+16的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+17的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+19的人基因组DNA、染色体核型分析结果为47，XN，+20的...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郭弘妍，田婕，刘新新，王晓杰，郭晓丹，周禹稀，邢婉丽，
申请(专利权)人：博奥生物集团有限公司，清华大学，
类型：发明
国别省市：北京;11