【技术实现步骤摘要】
抗病原高免卵黄抗体及基于AAV载体疫苗制备的方法和制剂
本专利技术涉及病毒疫苗
，具体涉及一种抗病原高免卵黄抗体及基于AAV载体疫苗制备的方法和制剂。
技术介绍
病毒和细菌在千百年来，在地球上与人类共存，人类已经对许多病毒和细菌具有了免疫功能。但是对有些病毒仍然没有抵抗力，而且病毒也在随着时间发生变异和进化，比如对人体伤害较小的流感病毒，以及对人体具有致命伤害的鼠疫等。因此，为了抵抗病毒的袭击，已经出现了多种病毒疫苗。病毒疫苗一般为注射剂，注射一次或多次后体内产生病毒抗体，从而免于此类病毒的感染。2020年2月11日，国际病毒分类学委员会将新型冠状病毒英文名正式命名为SARS-CoV-2，其引起的肺炎也在同日被世界卫生组织正式命名为2019冠状病毒肺炎(COVID-19)。SARS-CoV-2属于冠状病毒科冠状病毒属，为单股正链RNA病毒，有包膜，包膜上有放射状排列的花瓣样或纤毛状突起，形似王冕，属于β类冠状病毒。由于新型冠状病毒的潜伏期长、传播力强、致病性强，给人民生命安全和社会公共健康带来极大威胁，...
【技术保护点】
1.基于AAV载体疫苗制备抗病原高免卵黄抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n从病原的基因组序列中，选取出含有抗原蛋白片段的第一基因序列，并通过家鸡密码子优化合成相应的病原保护性抗原基因；/n通过双酶切AAV载体疫苗的核心质粒pAAV-CMV-eGFP，获得载体片段；以所述抗原基因的抗原蛋白扩增引物，扩增获得两端含有双酶切位点的第二基因序列，再次双酶切所述第二基因序列，回收后分别与所述载体片段转染，获得到携带抗原蛋白的重组AAV载体疫苗；/n选用健康的产蛋母鸡，将所述重组AAV载体疫苗多点接种于鸡胸部肌肉，免疫后收集其鸡卵；/n利用所述鸡卵的卵黄液制备针对所述病原的抗病原高免卵黄抗体。/n
【技术特征摘要】
1.基于AAV载体疫苗制备抗病原高免卵黄抗体的方法，其特征在于，包括以下步骤：
从病原的基因组序列中，选取出含有抗原蛋白片段的第一基因序列，并通过家鸡密码子优化合成相应的病原保护性抗原基因；
通过双酶切AAV载体疫苗的核心质粒pAAV-CMV-eGFP，获得载体片段；以所述抗原基因的抗原蛋白扩增引物，扩增获得两端含有双酶切位点的第二基因序列，再次双酶切所述第二基因序列，回收后分别与所述载体片段转染，获得到携带抗原蛋白的重组AAV载体疫苗；
选用健康的产蛋母鸡，将所述重组AAV载体疫苗多点接种于鸡胸部肌肉，免疫后收集其鸡卵；
利用所述鸡卵的卵黄液制备针对所述病原的抗病原高免卵黄抗体。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述病原为新冠病毒，获取病原保护性抗原基因的步骤具体为：
从新冠病毒的基因组序列中，选取含有RBD结构域的刺突糖蛋白S1片段基因序列，通过家鸡密码子优化合成相应的病原保护性抗原基因。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，获得携带抗原蛋白的重组AAV载体疫苗的步骤具体为：
将所述核心质粒pAAV-CMV-eGFP用EcoRI及BamHI进行双酶切，回收获得载体片段AAV-CMV；
分别设计刺突糖蛋白S1及RBD的抗原基因的扩增引物，以新冠病毒的S1基因片段为模板，扩增获得两端含有EcoRI及BamHI酶切位点的S1抗原基因片段和RBD抗原基因片段，再用EcoRI及BamHI进行双酶切回收后，与载体片段AAV-CMV连接并转化DH5α感受态，获得第一核心质粒pAAV-CMV-S1及第二核心质粒pAAV-CMV-RBD；
无内毒素提取所述第一核心质粒pAAV-CMV-S1及第二核心质粒pAAV-CMV-RBD，并分别与两个辅助质粒，按照摩尔比1：1：1的比例，用阳离子转染试剂PEI共转染HEK293T细胞；
收取所述转染HEK293T细胞，反复冻融多次后收集上清液，并加入核酸酶孵育；
孵育后再次收集上清液，去除杂质蛋白及杂质，获得所述重组AAV载体疫苗rAAV-S1和rAAV-RBD。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，免疫收集鸡卵的步骤具体为：
选用健康的母鸡，按照1E+11vg/只剂量，将所述重组AAV载体疫苗rAAV-S1和rAAV-RBD多点接种于鸡胸部肌肉，免疫后收集其鸡卵；
对所述鸡卵的蛋壳消毒，蛋壳严重污染的，事先选出进行单独消毒，用清水冲洗干净后与净蛋一同浸入水温42℃的0.1％新洁尔灭水溶液中消毒15min，随后浸入90-95℃水浴中消毒5秒钟，快速取出后晾干，4℃环境下保...
【专利技术属性】
技术研发人员：闫科技，
申请(专利权)人：鲲羽生物科技江门有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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