一种从人多能干细胞分化为自然杀伤细胞的方法及应用技术

本发明专利技术涉及干细胞生物学领域，具体涉及一种从人多能干细胞分化为自然杀伤细胞的方法及应用。本发明专利技术公开了一种多能干细胞来源的自然杀伤细胞，其表达CD56、Nkp30、Nkp44和Nkp46，还表达成熟自然杀伤细胞的标志物CD16和CD94。本发明专利技术还公开了一种制备自然杀伤细胞的方法，包括以下步骤：S1：形成拟胚体；S2：拟胚体向造血祖细胞分化；S3：造血祖细胞向NK细胞分化；S4：NK细胞的成熟和扩增。本发明专利技术提供的分化方法，基于成分明确的培养基和优化的细胞因子组合，能够快速、高效、简便且成本较低的诱导多能干细胞分化为自然杀伤细胞。

A method of differentiation from human pluripotent stem cells to natural killer cells and its application

【技术实现步骤摘要】
一种从人多能干细胞分化为自然杀伤细胞的方法及应用
本专利技术涉及干细胞生物学领域，尤其涉及多能或多潜能干细胞的谱系特异性分化，具体涉及一种从人多能干细胞分化为自然杀伤细胞的方法及应用。
技术介绍
2018年全国最新癌症报告显示2014年全国恶性肿瘤估计新发病例数380.4万例，平均每天超过1万人被确诊为癌症。肿瘤发病率为278.07/10万，0-74岁累积发病率为21.58％，累积死亡率为12.00％。2013年《科学》杂志将肿瘤免疫治疗列为十大科学突破之首，免疫治疗成为继手术、化疗、放疗、肿瘤靶向治疗后的新一代的肿瘤治疗手段，为肿瘤病人的治疗带来了新的希望。自然杀伤细胞(naturalkillercell，NK)是先天免疫系统的主力军，是机体防御感染和抗击肿瘤的第一道防线，可通过恶性病变细胞表面的“自我缺失”(missing-self)模式或“压力诱导”(stress-induced)模式识别并杀伤病变细胞。NK细胞的激活依赖于其细胞表面的活化型和抑制型受体信号平衡的结果。活化的NK细胞可通过多种机制杀伤肿瘤细胞：NK细胞可释放穿孔素本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多能干细胞来源的自然杀伤细胞，其表达CD56、Nkp30、Nkp44和Nkp46，还表达成熟自然杀伤细胞的标志物CD16和CD94。/n

【技术特征摘要】
1.一种多能干细胞来源的自然杀伤细胞，其表达CD56、Nkp30、Nkp44和Nkp46，还表达成熟自然杀伤细胞的标志物CD16和CD94。


2.一种制备自然杀伤细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：形成拟胚体；
S2：拟胚体向造血祖细胞分化；
S3：造血祖细胞向NK细胞分化；
S4：NK细胞的成熟和扩增。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述S1包括：
S11：将人多能干细胞的细胞悬液置于摇床上摇动培养过夜，形成拟胚体。


4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述S2包括：
S21：去除拟胚体上清液，加入新鲜的第一步骤分化培养基进行细胞培养；其中，所述第一步骤分化培养基是在基础分化培养基中添加小分子GSK3β抑制剂，以及至少一种以下成分：BMP信号通路激活剂、VEGF、bFGF、SCF、Flt3L、IL3、IL6、insulin、IGF-1和TPO；
S22：去除第一步骤分化培养基，加入第二步骤分化培养基进行细胞培养；其中，所述第二步骤分化培养基是在基础分化培养基中添加VEGF、bFGF，以及至少一种以下成分：BMP信号通路激活剂、Noda抑制剂、SCF、Flt3L、IL15、IL3、IL6、insulin、IGF-1和TPO的细胞因子；
S23：去除第二步骤分化培养基，加入第三步骤分化培养基进行细胞培养，得到造血祖细胞；其中，所述第三步骤分化培养基是在基础分化培养基中添加生长因子和集落刺激因子。


5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述生长因子选自EGF、VEGF、bFGF、insulin、IGF-1、PGF和PDGF中的一种或多种；所述集落刺激因子选自G-CSF、M-CSF、GM-CSF、multi-CSF(IL-3)、EPO、TPO、SCF和Flt-3L中的一种或多种。


6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，在S3中，去除第三步骤分化培养基，将细胞接种于包被有基质蛋白的细胞培养容器，加入第四步骤分化培养基进行细胞培养；
所述基质蛋白至少包括Notch通路激活蛋白或整合蛋白中的一种；其中，所述第四步骤分化培...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：安徽中盛溯源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34