【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细胞冻存，具体涉及一种多巴胺能神经前体细胞冻存液、和冻存方法。
技术介绍
1、帕金森病(parkinson’s disease，pd)是最为普遍的神经退性疾病之一，全球目前约有600万患者，中国的pd患者人数居世界第一。我国65岁以上的老年人中pd发病率约为1.7％，每年新发病例近十万人。世界卫生组织专家预测，中国2030年的pd患者将达到500万人。随着pd发病人数的逐年增加，pd用药市场规模不断扩大，现有治疗方案主要是通过补充多巴胺来缓解pd患者的症状，无法治愈或逆转pd病程的发展，并且有严重的毒副作用，因而急需引入新的治疗方法。pd的典型病理特征是中脑黑质区域多巴胺能神经元的丢失，因此利用细胞移植治疗pd是目前最有希望治愈和控制该疾病的方法。
2、人多能干细胞具有无限增殖能力，并且在体外能够分化为几乎所有功能细胞，包括神经细胞。因此，可以利用人多能干细胞诱导分化为多巴胺能神经前体细胞，从而应用于临床研究，通过细胞移植来治疗pd。
3、细胞冷冻技术作为一种细胞存储的有效方法，是再生医学细胞药物保存的主要研究方向之一。冷冻保存可以实现在任何时候都及时使用细胞，同时降低微生物污染的风险。神经细胞，尤其是多能干细胞诱导分化而来的多巴胺能神经前体细胞，不仅要考虑冻存细胞复苏后的活率和回收率，还要考虑复苏后细胞的纯度和分化状态，以及是否仍具有继续成熟分化的潜能。用现有的细胞冻存保护液冻存复苏后，细胞活率和回收率都会较冻存前出现明显下降，导致复苏之后的活细胞数量较少从而并不适合直接做细胞移植。现有冻
4、因此，开发一种无血清、成分简单明确且能够同时确保复苏后的神经细胞活率和回收率且维持细胞功能的冻存保护液，是拓展神经干细胞临床应用的重要课题。
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术提供了一种多巴胺能神经前体细胞冻存液，其不含血清和动物源成分，所述多巴胺能神经前体细胞冻存液包含临床级冻存基础液、非渗透性冷冻保护剂和渗透性冷冻保护剂，其中所述非渗透性冷冻保护剂的质量浓度小于10％且所述渗透性冷冻保护剂的质量浓度小于15％，所述非渗透性冷冻保护剂为注射级人血清白蛋白(hsa)，所述渗透性冷冻保护剂为注射级dmso，所述临床级冻存基础液为右旋糖酐氯化钠注射液，所述多巴胺能神经前体细胞冻存液还包含能够提高多巴胺能神经前体细胞回收率的添加剂。
2、优选的，所述多巴胺能神经前体细胞冻存液由右旋糖酐氯化钠注射液、注射级hsa和注射级dmso以及所述能够提高多巴胺能神经前体细胞回收率的添加剂组成。
3、优选的，所述能够提高多巴胺能神经前体细胞回收率的添加剂的浓度为0.2-100μg/ml。
4、更优选的，所述能够提高多巴胺能神经前体细胞回收率的添加剂的浓度为0.2-60μg/ml。
5、优选的，所述能够提高多巴胺能神经前体细胞回收率的添加剂为y-27632、抗坏血酸和维生素e中的至少一种。
6、更优选的，所述能够提高多巴胺能神经前体细胞回收率的添加剂为y-27632与抗坏血酸的组合。
7、优选的，所述多巴胺能神经前体细胞冻存液中注射级dmso的质量浓度等于或大于5％且小于15％，注射级hsa的质量浓度等于或大于1％且小于10％。
8、更优选的，所述多巴胺能神经前体细胞冻存液中注射级dmso的质量浓度为7.5％-10％，注射级hsa的质量浓度为1％-5％。
9、本专利技术提供了一种多巴胺能神经前体细胞的冻存方法，包括以下步骤：使用本专利技术提供的多巴胺能神经前体细胞冻存液将多巴胺能神经前体细胞进行冻存。
10、优选的，所述多巴胺能神经前体细胞在所述多巴胺能神经前体细胞冻存液中的冻存密度为4×106-10×106个/ml。
11、有益效果
12、本专利技术的多巴胺能神经前体细胞冻存液各组分相互配合，能够大大减少冻存过程中对细胞的伤害并确保高细胞活率，显著提高细胞复苏后回收率，尤其是复苏后培养24小时的回收率，并维持细胞的纯度和继续成熟分化的潜能。此外，本专利技术的多巴胺能神经前体细胞冻存液组分简单，均采用临床级试剂，不含血清和动物源成分，无羟乙基淀粉等大分子物质，冻存后仅需少量洗涤即可直接注射，从而显著减少洗涤过程所带来的细胞损失，更适于临床级多巴胺能神经前体细胞的存储，使用本专利技术冻存液冻存的多巴胺能神经前体细胞在复苏后能直接用于细胞移植，并能显著改善6-ohda造模裸大鼠的行为学，因此本专利技术细胞冻存液为神经系统再生医学药物的保存及临床应用提供了重要工具。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种多巴胺能神经前体细胞冻存液，其不含血清和动物源成分，所述多巴胺能神经前体细胞冻存液包含临床级冻存基础液、非渗透性冷冻保护剂和渗透性冷冻保护剂，其中所述非渗透性冷冻保护剂的质量浓度小于10％且所述渗透性冷冻保护剂的质量浓度小于15％，所述非渗透性冷冻保护剂为注射级HSA，所述渗透性冷冻保护剂为注射级DMSO，所述临床级冻存基础液为右旋糖酐氯化钠注射液，所述多巴胺能神经前体细胞冻存液还包含能够提高多巴胺能神经前体细胞回收率的添加剂。
2.根据权利要求1所述的多巴胺能神经前体细胞冻存液，其特征在于，所述多巴胺能神经前体细胞冻存液由右旋糖酐氯化钠注射液、注射级HSA和注射级DMSO以及所述能够提高多巴胺能神经前体细胞回收率的添加剂组成。
3.根据权利要求1或2所述的多巴胺能神经前体细胞冻存液，其特征在于，所述能够提高多巴胺能神经前体细胞回收率的添加剂的浓度为0.2-100μg/ml。
4.根据权利要求3所述的多巴胺能神经前体细胞冻存液，其特征在于，所述能够提高多巴胺能神经前体细胞回收率的添加剂的浓度为0.2-60μg/ml。
5.根
6.根据权利要求5所述的多巴胺能神经前体细胞冻存液，其特征在于，所述能够提高多巴胺能神经前体细胞回收率的添加剂为Y-27632与抗坏血酸的组合。
7.根据权利要求1或2所述的多巴胺能神经前体细胞冻存液，其特征在于，所述多巴胺能神经前体细胞冻存液中注射级DMSO的质量浓度等于或大于5％且小于15％，注射级HSA的质量浓度等于或大于1％且小于10％。
8.根据权利要求7所述的多巴胺能神经前体细胞冻存液，其特征在于，所述多巴胺能神经前体细胞冻存液中注射级DMSO的质量浓度为7.5％-10％，注射级HSA的质量浓度为1％-5％。
9.一种多巴胺能神经前体细胞的冻存方法，其特征在于，包括以下步骤：使用权利要求1-8任意一项所述的多巴胺能神经前体细胞冻存液将多巴胺能神经前体细胞进行冻存。
10.根据权利要求9所述的冻存方法，其特征在于，所述多巴胺能神经前体细胞在所述多巴胺能神经前体细胞冻存液中的冻存密度为4×106-10×106个/mL。
...【技术特征摘要】
1.一种多巴胺能神经前体细胞冻存液，其不含血清和动物源成分，所述多巴胺能神经前体细胞冻存液包含临床级冻存基础液、非渗透性冷冻保护剂和渗透性冷冻保护剂，其中所述非渗透性冷冻保护剂的质量浓度小于10％且所述渗透性冷冻保护剂的质量浓度小于15％，所述非渗透性冷冻保护剂为注射级hsa，所述渗透性冷冻保护剂为注射级dmso，所述临床级冻存基础液为右旋糖酐氯化钠注射液，所述多巴胺能神经前体细胞冻存液还包含能够提高多巴胺能神经前体细胞回收率的添加剂。
2.根据权利要求1所述的多巴胺能神经前体细胞冻存液，其特征在于，所述多巴胺能神经前体细胞冻存液由右旋糖酐氯化钠注射液、注射级hsa和注射级dmso以及所述能够提高多巴胺能神经前体细胞回收率的添加剂组成。
3.根据权利要求1或2所述的多巴胺能神经前体细胞冻存液，其特征在于，所述能够提高多巴胺能神经前体细胞回收率的添加剂的浓度为0.2-100μg/ml。
4.根据权利要求3所述的多巴胺能神经前体细胞冻存液，其特征在于，所述能够提高多巴胺能神经前体细胞回收率的添加剂的浓度为0.2-60μg/ml。
5.根据权利要求1或2所述的多巴胺能神...
【专利技术属性】
技术研发人员：请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，请求不公布姓名，
申请(专利权)人：安徽中盛溯源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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