一种临床级NK细胞冻存液及其使用方法技术

本发明专利技术提供了一种临床级NK细胞冻存液及其使用方法，属于NK细胞冻存及复苏技术领域。本发明专利技术的临床级NK细胞冻存液中含有的成分均为注射级或临床级，可用于直接输注人体。并且，本发明专利技术降低了注射级白蛋白和DMSO的用量，降低了制备成本以适合大量生产，为临床级NK细胞的存储和临床应用提供了条件。存储和临床应用提供了条件。存储和临床应用提供了条件。

【技术实现步骤摘要】
一种临床级NK细胞冻存液及其使用方法


[0001]本专利技术涉及NK细胞冻存及复苏
，具体涉及一种临床级NK细胞冻存液及其使用方法。

技术介绍

[0002]NK细胞一般指自然杀伤细胞(naturalkillercell，NK)，是机体重要的免疫细胞，不仅与抗肿瘤、抗病毒感染和免疫调节有关，而且在某些情况下参与超敏反应和自身免疫性疾病的发生，能够识别靶细胞、杀伤介质。常见的NK细胞有外周血来源的NK细胞、脐血来源的NK细胞以及hPSC分化而来的NK细胞等。
[0003]近年来NK细胞已经被用于肿瘤免疫的细胞治疗，并在临床治疗肿瘤(如白血病，巴瘤和黑色素瘤)有很好的效果；但不论对第三方细胞库，还是对配送和应用临床管理说，NK细胞的长期有效储存始终是一个问题。现有技术主要通过冻存保存NK细胞活性和功能。
[0004]目前现有的NK细胞冻存液具有多种配方。例如，中国专利CN202010240894.7公开了一种NK细胞冻存液，冻存液配方包含葡聚糖、多聚赖氨酸(CPLL)和基础培养基，其中CPLL是通过试剂级的丁二酸酐和ε
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多聚赖氨酸溶液制备而成，其制备过程方法较复杂，易产生批次间差异，CPLL和基础培养基等成份属于试剂级，不能用于临床和直接输注。中国专利CN201510727721.7公开了一种培养后的NK细胞的冻存液，冻存液包含茶多酚、葡萄籽提取物、维生素C和自体血清，其中茶多酚、葡萄籽提取物、维生素C非临床级成份且提取物的成份不明确，不能用于临床和直接输注。中国专利CN201910274568.5公开了一种NK细胞的冻存方法，冻存液通过添加AB血浆和5
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麦谷蛋白
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醇来提高细胞冻存复苏后的活力。AB血浆成份不明确，存在批次间差异，不适合规模化和标准化的生产制备；5
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麦谷蛋白
‑3‑
醇非临床级成份，不能用于临床和直接输注。综上来看，现有技术中公开的冻存液仅可以作为科研级产品的保存用途，而不能用于临床注射。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种临床级NK细胞冻存液，本专利技术的临床级NK细胞冻存液的组分均为注射级和临床级药品，可用于临床注射。
[0006]本专利技术提供了一种临床级NK细胞冻存液，包括第一冻存液和第二冻存液；
[0007]所述第一冻存液包括临床级基础冻存液和非渗透性冷冻保护剂；所述第一冻存液中非渗透性冷冻保护剂的质量浓度≤10％；
[0008]所述第二冻存液包括临床级基础冻存液、非渗透性冷冻保护剂和渗透性冷冻保护剂；所述第二冻存液中非渗透性冷冻保护剂的质量浓度≤10％；所述第二冻存液中渗透性冷冻保护剂的质量浓度≤20％；
[0009]所述临床级基础冻存液包括右旋糖酐氯化钠注射液；
[0010]所述非渗透性冷冻保护剂包括注射级白蛋白；
[0011]所述渗透性冷冻保护剂包括注射级DMSO。
[0012]优选的，所述右旋糖酐氯化钠注射液包括质量浓度为10％的右旋糖酐氯化钠注射液或质量浓度为6％右旋糖酐氯化钠注射液。
[0013]优选的，所述右旋糖酐氯化钠注射液选自右旋糖酐40氯化钠注射液、右旋糖酐70氯化钠注射液或右旋糖酐20氯化钠注射液一种或多种。
[0014]优选的，所述第一冻存液和第二冻存液中非渗透性冷冻保护剂的质量浓度独立为1％～10％。
[0015]优选的，所述第二冻存液中渗透性冷冻保护剂的质量浓度为2％～20％。
[0016]本专利技术还提供了上述方案所述的临床级NK细胞冻存液在NK细胞冻存和/或iNK细胞冻存中的应用。
[0017]本专利技术还提供了上述方案所述的临床级NK细胞冻存液的使用方法，包括以下步骤：
[0018]将待冻存的NK细胞和/或iNK细胞、第一冻存液和第二冻存液混合后，进行分段式降温，所述分段式降温后进行冻存。
[0019]优选的，所述待冻存的NK细胞和/或iNK细胞、第一冻存液和第二冻存液的混合为先将待冻存的NK细胞和/或iNK细胞与第一冻存液混合后，再与第二冻存液混合。
[0020]优选的，所述待冻存的NK细胞和/或iNK细胞的冻存终密度为1～8
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107/mL。
[0021]优选的，其特征在于，所述第一冻存液和第二冻存液体积比为(1～2)：(1～2)。
[0022]本专利技术提供了一种临床级NK细胞冻存液，包括第一冻存液和第二冻存液；所述第一冻存液包括临床级基础冻存液和非渗透性冷冻保护剂；所述第一冻存液中非渗透性冷冻保护剂的质量浓度≤10％；所述第二冻存液包括临床级基础冻存液、非渗透性冷冻保护剂和渗透性冷冻保护剂；所述第二冻存液中非渗透性冷冻保护剂的质量浓度≤10％；所述第二冻存液中渗透性冷冻保护剂的质量浓度≤20％；所述临床级基础冻存液包括右旋糖酐氯化钠注射液；所述非渗透性冷冻保护剂包括注射级白蛋白；所述渗透性冷冻保护剂包括注射级DMSO。本专利技术的临床级NK细胞冻存液中含有的成分均为注射级或临床级，可用于直接输注人体。并且，本专利技术降低了注射级白蛋白和DMSO的用量，降低了制备成本以适合大量生产，为临床级NK细胞的存储和临床应用提供了条件。本专利技术的临床级NK细胞冻存液冻存的细胞可直接输注人体，这极大地推进NK细胞产品的临床应用，不仅能够提高NK细胞制剂临床应用的安全性和稳定性，还能够避免细胞复苏后的离心重悬等操作带来的污染风险，避免细胞的损伤和因此而产生的输注前的质量差异，还能够降低细胞产品临床应用的门槛。临床输注点附近无需配备无菌操作设施和有经验的操作人员。
[0023]其次，本专利技术中的临床级NK细胞冻存保护液能维持NK细胞复苏后的高活率、高回收率，并维持NK细胞裂解肿瘤细胞的功能。本专利技术中的冻存液制备的细胞制剂复苏后的稳定性高，在高细胞密度下，于不同的温度条件下可长时间(8小时)维持细胞活率和回收率高于90％，保证了细胞制剂临床应用的稳定性。
[0024]另外，本专利技术提供的NK细胞冻存液降低了DMSO的使用浓度，可避免或减轻患者因输注大量DMSO而出现的不良反应。DMSO在短时间内大量输注到患者体内，易造成不良反应，主要有全身副反应：头痛、恶心、眩晕，其次有DMSO敏感的患者出现呼吸障碍和轻度的心脏毒性，出现高血压或心动过缓，因此降低临床注射细胞中DMSO的含量可以减少细胞输注产生的不良反应。同时，DMSO在常温下对细胞有一定毒副作用，减低DMSO的含量有助于复苏后
细胞活率和功能的维持。并且，常用冻存液因需要复苏细胞后离心去除DMSO操作而造成造成大量细胞损失和细胞活力、增殖能力、分化能力的降低的问题，降低冻存液中DMSO的含量，能够省略离心步骤，不仅能够简化操作，而且有利于后续的细胞分化和增殖，减少细胞产品生产过程中的污染等问题。
[0025]再次，本专利技术中的临床级NK细胞冻存液冻存细胞密度高，待冻存的NK细胞的冻存终密度能够达到8～10
×
107/mL。NK细胞临本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种临床级NK细胞冻存液，包括第一冻存液和第二冻存液；所述第一冻存液包括临床级基础冻存液和非渗透性冷冻保护剂；所述第一冻存液中非渗透性冷冻保护剂的质量浓度≤10％；所述第二冻存液包括临床级基础冻存液、非渗透性冷冻保护剂和渗透性冷冻保护剂；所述第二冻存液中非渗透性冷冻保护剂的质量浓度≤10％；所述第二冻存液中渗透性冷冻保护剂的质量浓度≤20％；所述临床级基础冻存液包括右旋糖酐氯化钠注射液；所述非渗透性冷冻保护剂包括注射级白蛋白；所述渗透性冷冻保护剂包括注射级DMSO。2.根据权利要求1所述的临床级NK细胞冻存液，其特征在于，所述右旋糖酐氯化钠注射液包括质量浓度为10％的右旋糖酐氯化钠注射液或质量浓度为6％右旋糖酐氯化钠注射液。3.根据权利要求1或2所述的临床级NK细胞冻存液，其特征在于，所述右旋糖酐氯化钠注射液选自右旋糖酐40氯化钠注射液、右旋糖酐70氯化钠注射液或右旋糖酐20氯化钠注射液一种或多种。4.根据权利要求1所述的临床级NK细胞冻存液，其特征在于，所述第一冻存液和第二冻存液中...

【专利技术属性】
技术研发人员：高雅丽，周桃，俞君英，张颖，焦璐琰，
申请(专利权)人：安徽中盛溯源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：