【技术实现步骤摘要】
一种线粒体靶向光敏剂Sarm1-mtKR及其制备方法和应用
本专利技术属于光动力疗法
，涉及到一种光敏剂，具体涉及一种线粒体靶向光敏剂Sarm1-mtKR及其制备方法和应用。
技术介绍
光动力疗法(PhotodynamicTherapy，PDT)是一种联合利用光、光敏剂和氧分子，通过光动力反应选择性地治疗肿瘤、老年黄斑变性、鲜红斑痣等血管性疾病，以及组织体局部增生和感染的靶向疗法，甚至应用于医学美容。激发光、光敏剂和组织氧含量是PDT的三大要素，缺一不可，光敏剂的靶向性及氧的产量等性能决定着PDT的疗效。随着第一个光敏剂PoifrmeSodium于1993至1997年在美国、加拿大、欧盟、日本及韩国陆续被批准上市，PDT领域的研究、开发和应用迅速活跃起来。迄今全世界合成或提取的光敏剂约15000种，但是批准临床应用的仅有十几个，这主要是因为这些光敏剂都存在一定的的局限性，不能很好的满足临床使用的要求，其中表现最突出的问题就是生物相容性不好。为了解决生物相容性的问题，现在急需开发一种具有主动靶向功能的光敏...
【技术保护点】
1.一种线粒体靶向光敏剂Sarm1-mtKR，其特征在于：所述线粒体靶向光敏剂Sarm1-mtKR的融合蛋白序列大小为810bp，序列如SEQ ID NO 1所示。/n
【技术特征摘要】
1.一种线粒体靶向光敏剂Sarm1-mtKR，其特征在于：所述线粒体靶向光敏剂Sarm1-mtKR的融合蛋白序列大小为810bp，序列如SEQIDNO1所示。
2.根据权利要求1所述的一种线粒体靶向光敏剂Sarm1-mtKR的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)线粒体靶向蛋白选择性雄激素受体调节剂Sarm1基因引物设计：根据Sarm1基因的线粒体定位序列设计上游引物和下游引物，上游引物(NotⅠ)5ˊ-AAGGAAAAAAGCGGCCGCAATGGTCCTGACGCTG-3ˊ，下游引物(EcoRⅠ)5ˊ-CGGAATTCCCGATCGGCGCCCGGCCGTG-3ˊ；
(2)KillerRed和mcherry引物设计：根据mcherry的基因序列设计上游引物和下游引物，mcherry上游引物(EcoRⅠ)5ˊ-GGAATTCGCCACCATGGTGAGCAAGGG，mcherry下游引物(BamHⅠ)5ˊ-CGGGATCCTTACTTGTACAGCTCGTCCATG-3ˊ；根据KillerRed的基因序列设计上游引物和下游引物，KR上游引物(EcoRⅠ)5ˊ-GGAATTCATGGGTTCAGAGGGC-3ˊ，KR下游引物(BamHⅠ)5ˊ-CGGGATCCCTAGATCTCGTCG-3ˊ；
(3)目的片段扩增：分别以pGW1-Myc-SARM1质粒、plxsp-TetA-mcherry质粒和plxsp-TetA-killerRed质粒为模板，以步骤(1)和(2)中设计上游引物和下游引物进行PCR扩增，获得目的片段Sarm1、mcherry和KR；所述目的片段Sarm1、mcherry和KR的序列分别见序列表SEQIDNO8、SEQIDNO9、SEQIDNO10；
(4)plxsp-flag-mcherry载体构建及鉴定：将plxsp-flag空载体利用EcoRⅠ酶和BamHⅠ酶进行双酶切得到载体1，将步骤(3)获得的所述目的片段mcherry插入连接到载体1上，获得plxsp-flag-mcherry载体；之后通过测序的方法对所述plxsp-flag-mcherry载体进行鉴定，确认序列正确后进行后续步骤；
(5)plxsp-flag-Sarm1-mcherry载体构建：将所述plxsp-flag-mcherry载体利用NotⅠ酶和EcoRⅠ酶进行双酶切得到载体2，将步骤(3)获得的所述目的片段Sarm1插入连接到载体2上，获得plxsp-flag-Sarm1-mcherry载体；之后通过测序的方法对所述plxsp-flag-Sarm1-mcherry载体进行鉴定，确认序列正确后进行后续步骤；
(6)plxsp-flag-Sarm1-KR载体构建：将所述plxsp-flag-Sarm1-mcherry载体利用EcoRⅠ酶和BamHⅠ酶进行双酶切得到载体3，将步骤(3)获得的所述目的片段KR插入连接到载体3上，获得plx...
【专利技术属性】
技术研发人员：王志成，于雷，方芳，李鑫，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22
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