一种大鼠血浆中人参皂苷的测定方法技术

本发明专利技术涉及血浆中药物代谢的检测，具体是一种检测大鼠血浆中五种人参皂苷的方法，其特征在于：采用甲醇沉淀蛋白后，二氯甲烷提取，固相萃取柱净化，通过气相色谱法实现血浆中Ra1、Rb1、Rh1、Re和Ro的检测。本方法相比现有技术的优点在于：准确度高，灵敏度高，重复性好，适用于血浆中上述五种人参皂苷的同时定量检测，可用于血浆中人参皂苷代谢途径的研究。

A method for the determination of Ginsenoside in rat plasma

【技术实现步骤摘要】
一种大鼠血浆中人参皂苷的测定方法
本专利技术涉及大鼠血浆中人参皂苷的检测方法，包括Ra1、Rb1、Rh1、Re和Ro五种人参皂苷的同时定量检测。
技术介绍
人参对中枢神经系统心血管内分泌免疫系统有着广泛的药理活性人参皂昔及其在肠道的水解产物被认为是亚洲人参、西洋参、三七中主要的药理活性成分，然而它们的作用机理仍不十分清楚，服用人参制剂后机体对皂昔类成分暴露水平的评估有助于揭开其药效物质基础。近年来，中药药代动力学研究在阐释中药复方药效物质基础及作用机制方面的应用越来越广泛中药药代动力学是利用动力学原理与处理方法，定量地描述中药有效成分有效部位单味中药和复方中药通过各种途径进入机体后吸收分布代谢和排泄等过程的动态变化规律，在阐明中药作用机制及其科学内涵设计及优选给药方案促进新药研发和剂型改进等方面起着重大作用。Ra1、Rb1、Rh1、Re和Ro五种人参皂苷是人参的代表性成分，代表人参的部分药效。现有技术中，研究血浆中人参皂苷的药代动力学的方法主要是液相色谱-串联质谱法，该法仪器成本较高，未有单纯采用气相色谱法对上述五种人参皂苷的研究报道。
技术实现思路
本专利技术的目的旨在提供一种具备准确且能够同时检测大鼠血浆中五种人参皂苷（Ra1、Rb1、Rh1、Re和Ro）的方法。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：一种检测大鼠血浆中人参皂苷的方法，具体步骤如下：（1）取大鼠血浆，置于离心管中，加入甲醇沉淀蛋白，涡旋，离心，取上清液置于另一干净的离心管中，加入二氯甲烷，涡旋，离心；（2）取OasisHLB柱，活化，加入上述上清液，甲醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，复溶，进样；（3）检测条件：色谱柱：DB-35MS；升温程序：初始温度60℃，以50℃/min的速率升至160℃，再以20℃的速度升至220℃；FID检测器检测。进一步的，所述沉淀蛋白步骤如下：取大鼠血浆100μL，置于2mL离心管中，加入200μL甲醇，涡旋1min，离心。进一步的，上述萃取步骤如下：取沉淀蛋白后的上清液，置于另一干净的2mL离心管，加入500μL二氯甲烷，涡旋1min，离心。进一步的，上述两次离心的条件为1000g，3min。进一步的，活化步骤如下：采用甲醇、水、二氯甲烷依次活化OasisHLB柱，加入提取后的上清液，采用3mL甲醇洗脱，收集洗脱液。进一步的，所述浓缩复溶步骤如下：取洗脱液，氮气吹至近干，残留物采用甲醇复溶。进一步的，色谱条件如下：DB-35MS，30m×0.25mm，0.25μm；升温程序：初始温度60℃，以50℃/min的速率升至160℃，再以20℃的速度升至220℃；进样口温度250℃；载气：氮气，纯度≥99.999%；流速1.2mL/min；进样量1μL；无分流进样。进一步的，检测条件如下：FID检测器，检测温度250℃，氢气和空气的流速分别为40、400mL/min。进一步的，人参皂苷包括Ra1、Rb1、Rh1、Re和Ro。本专利技术相比现有技术的优点在于：准确度高，灵敏度高，重复性好，加标回收率良好，范围在85.5-109%之间。综上可见，本专利技术适用于血浆中五种人参皂苷的同时定量检测，可用于人参皂苷代谢途径研究。具体实施方式本专利技术以下结合具体实施例做进一步描述，但并不限制本
技术实现思路
。主要实验材料，仪器与试剂：气相色谱仪，带FID检测器（安捷伦公司）；OasisHLB柱（Waters公司）。人参皂苷Ra1、Rb1、Rh1、Re和Ro，纯度均≥98%；SD大鼠；其他试剂均为市售分析纯。实施例1取大鼠血浆100μL，置于2mL离心管中，加入200μL甲醇，涡旋1min，离心。取上清液，置于另一干净的2mL离心管，加入500μL二氯甲烷，涡旋1min，离心。上述两次离心的条件为1000g，3min。采用甲醇、水、二氯甲烷依次活化OasisHLB柱，加入提取后的上清液，采用3mL甲醇洗脱，收集洗脱液。取洗脱液，氮气吹至近干，残留物采用甲醇复溶。色谱条件如下：DB-35MS，30m×0.25mm，0.25μm；升温程序：初始温度60℃，以50℃/min的速率升至160℃，再以20℃的速度升至220℃；进样口温度250℃；载气：氮气，纯度≥99.999%；流速1.2mL/min；进样量1μL；无分流进样。检测条件如下：FID检测器，检测温度250℃，氢气和空气的流速分别为40、400mL/min。记录五个物质的色谱图，标准曲线法定量。实施例2标准曲线绘制在离心管中分别加入不同体积的人参皂苷对照品溶液，水浴吹干之后，加入空白血浆，配成含不同浓度人参皂苷的血浆样品，采用实施例1的前处理-分析方法进行分析，得到色谱图，记录峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。人参皂苷Ra1、Rb1、Rh1、Re和Ro的回归曲线依次如下：y=0.057x+0.027、y=0.007x+0.215、y=0.098x-0.125、y=0.105x-0.024、y=0.0127x+0.114。方法的回收率为了验证方法的回收率，在高中低三个水平分别进行了加样回收实验。加入的物质随后被萃取并定量。高中低三个水平分别进行三个重复。结果表明，在4、20、100μg/mL三个水平中，回收率在87%~105%之间。以上所述仅为本专利技术的优选实施例，不能认定本专利技术的具体实施只局限于这些说明。对于本专利技术所属
的相关技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，其中所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测大鼠血浆中人参皂苷的方法，其特征在于，具体步骤如下：/n（1）取大鼠血浆，置于离心管中，加入甲醇沉淀蛋白，涡旋，离心，取上清液置于另一干净的离心管中，加入二氯甲烷，涡旋，离心；/n（2）取Oasis HLB柱，活化，加入上述上清液，甲醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，复溶，进样；/n（3）检测条件：色谱柱：DB-35 MS；升温程序：初始温度60℃，以50℃/min的速率升至160℃，再以20℃的速度升至220℃；FID检测器检测。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测大鼠血浆中人参皂苷的方法，其特征在于，具体步骤如下：
（1）取大鼠血浆，置于离心管中，加入甲醇沉淀蛋白，涡旋，离心，取上清液置于另一干净的离心管中，加入二氯甲烷，涡旋，离心；
（2）取OasisHLB柱，活化，加入上述上清液，甲醇洗脱，收集洗脱液，浓缩，复溶，进样；
（3）检测条件：色谱柱：DB-35MS；升温程序：初始温度60℃，以50℃/min的速率升至160℃，再以20℃的速度升至220℃；FID检测器检测。


2.根据权利要求1所述的一种检测大鼠血浆中人参皂苷的方法，其特征在于，所述沉淀蛋白步骤如下：取大鼠血浆100μL，置于2mL离心管中，加入200μL甲醇，涡旋1min，离心。


3.根据权利要求2所述的一种检测大鼠血浆中人参皂苷的方法，其特征在于，上述萃取步骤如下：取沉淀蛋白后的上清液，置于另一干净的2mL离心管，加入500μL二氯甲烷，涡旋1min，离心。


4.根据权利要求3所述的一种检测大鼠血浆中人参皂苷的方法，其特征在于，上述两次离心的条件为1000g，3min。


5...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋蓉，
申请(专利权)人：蒋蓉，
类型：发明
国别省市：湖南;43