一种药代动力学早期成药性评估方法技术

本发明专利技术公开了一种药代动力学早期成药性评估方法，包括如下步骤：（1）建立MDR1‑MDCKII细胞筛选模型，研究药物的转运特性；（2）建立UHPLC‑MS/MS测定大鼠血浆中药物浓度的分析方法，测定药物的生物利用度；（3）建立体内外血浆蛋白结合率测定方法，研究药物体内外的血浆蛋白结合特性（4）通过“cocktail”肝微粒体体外孵育法考察药物对六种大鼠肝微粒体细胞色素P450酶亚型活性的影响；（5）通过肝微粒体法结合UHPLC‑MS/MS分离和分析药物的生物转化情况。本发明专利技术的方法可用于新化学实体药代动力学特性的快速筛选，为早期筛选提供重要决策信息，提高创新药物研发的效率和质量。

【技术实现步骤摘要】
一种药代动力学早期成药性评估方法
本专利技术属于药物研发评估
，具体地，涉及一种药代动力学早期成药性评估方法。
技术介绍
创新药物研发是一个周期长、耗资大、风险高、淘汰率高的领域。近年有统计显示，在新药研发过程中，因药代动力学性质不理想引起新化学实体(NCEs)的成药性失败率高达40％。药代动力学涉及药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄等过程，新化学实体药代动力学特性的早期成药性评估具有关键作用。药物吸收转运特性研究的技术主要包括体外法、在体法和体内法，其中体外法由于不需要大批的实验动物，耗资少，试验周期短，操作简单等优点而广泛用于新化合物早期筛选。体外法中的Caco-2细胞系和MDR1-MDCKII细胞系，在特定培养条件下可自发形成具有细胞极性和紧密连接性的细胞单层，并分泌表达各种载体，是目前应用较为广泛的药物体外口服吸收筛选模型。目前有许多药物吸收体外筛选模型，但没有一个体外模型能够完全模拟生物体内的复杂环境，因此，体内法仍然具有不可替代的地位，对于新化合物进一步的研究和开发，进行体内生物利用度研究具有重要的作用。新药的血浆蛋白结合特性研究对其进一步研发及合理应用具有重要的意义。该部分最常用的研究方法为超滤法和平衡透析法，相对于平衡透析法，超滤法具有设备简单、耗时短、血浆样品用量少等优点。细胞色素P450混合功能氧化酶系统(cytochromeP450CYPs)是肝脏中最重要的代谢酶，当一种药物引起CYPs的诱导或抑制时，就可能影响同服药物在生物体内的的处置情况，因而研究药物对药物代谢酶活性的影响具有重要的现实意义。在创新性药物的研究开发中，应研究药物对代谢酶特别是细胞色素P450(CYP450)酶的诱导或抑制效应。相关体外研究技术主要包括：肝微粒体、肝S9、原代肝细胞及P450重组酶等。生物转化研究是创新药物的研发不可或缺的重要内容，可进行药理毒理筛选，创新药物的进一步研究提供重要信息。目前，还没见有简单快速且全方位对新化学实体进行药代动力学早期成药性评估的方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术中新药药代动力学早期成药性评估技术的缺陷和不足，提供一种药代动力学早期成药性评估方法，有利于新化学实体药代动力学特性的快速筛选，初步考察创新药物的转运特性、绝对生物利用度、蛋白结合率、对体外CYP450药物代谢酶活性的影响、代谢产物等，从而实现为早期筛选提供重要决策信息的目标，为其下一步研发提供关键依据，可有力提高创新药物研发的效率和质量。本专利技术的目的是提供一种药代动力学早期成药性评估方法。本专利技术的上述目的是通过以下技术方案给予实现的。一种药物的药代动力学早期成药性评估方法，包括如下步骤：S1.先建立药物的UHPLC-MS/MS分析方法，再建立MDR1-MDCKII细胞筛选模型，考察P-gp抑制剂对药物的转运影响；S2.建立并验证UHPLC-MS/MS测定大鼠血浆中药物浓度的分析方法，并测定药物在大鼠体内的绝对生物利用度，计算动代动力学参数；S3.采用超滤法分离药物，结合UHPLC-MS/MS测定药物的体内外血浆蛋白结合率；S4.通过“cocktail”法测定药物对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶亚型活性的影响；S5.采用肝微粒法以及UHPLC-MS/MS分析药物的生物转化情况。优选地，上述药物的药代动力学早期成药性评估方法，包括如下步骤：S1.先建立待评估药物及阳性药的UHPLC-MS/MS分析方法，再建立并通过阳性药来验证MDR1-MDCKII细胞筛选模型，考察P-gp抑制剂对待评估药物的转运影响；S2.建立并验证测定大鼠血浆中待评估药物浓度的UHPLC-MS/MS分析方法，通过灌胃或/和静脉给药测定待评估药物在大鼠体内的绝对生物利用度，用非房室模型法计算动代动力学参数；S3.采用超滤法分离药物，结合UHPLC-MS/MS测定待评估药物的体内外血浆蛋白结合率；S4.建立并验证体外肝微粒体探针药物的UHPLC-MS/MS分析方法，结合阳性药考察待评估药物对六种大鼠肝微粒体细胞色素P450酶亚型活性的影响；S5.将待评估药物的体外肝微粒体孵育样本和大鼠静脉注射给药后的生物样本经固相萃取后进行UHPLC-MS/MS分析，测定待评估药物的结构及其代谢产物，研究分析待评估药物的生物转化。其中优选地，当待评估药物为靶向抗肿瘤Aurora激酶抑制剂Ly-7u或8-羟基喹啉衍生物83b1时，步骤S1所述阳性药为地高辛。优选地，当待评估药物为靶向抗肿瘤Aurora激酶抑制剂Ly-7u或8-羟基喹啉衍生物83b1时，步骤S1所述P-gp抑制剂为维拉帕米。优选地，当待评估药物为靶向抗肿瘤Aurora激酶抑制剂Ly-7u时：步骤S1或S2所述UHPLC-MS/MS分析方法中，：内标均为Ly-7z，质谱条件为：离子源ESI，选择反应监测模式，监测离子为ESI+：m/z410→353(Ly-7u)，m/z457→368(Ly-7z)；优选地，当待评估药物为靶向抗肿瘤Aurora激酶抑制剂Ly-7u时：步骤S1所述UHPLC-MS/MS分析方法中，液相条件为：分离柱XTerraMSC18色谱柱；流动相为：体积比1：9的0.1％甲酸水-甲醇，流速为300μL/min，柱温为室温，分析时间为3.0min；优选地，当待评估药物为靶向抗肿瘤Aurora激酶抑制剂Ly-7u时：步骤S2所述UHPLC-MS/MS分析方法中，液相条件为：分析柱hypersilgoldC18色谱柱；流动相为甲醇(A)-水(B)，水(B)中含0.1％甲酸和5mM的乙酸铵，A相、B相百分比之和为100％；流动相梯度洗脱条件为：以A相的百分比计，0～1min，5％～90％A；1～4min，90％～90％A；4～4.1min，90％～5％A；4.1～5min，90％～90％A；流速为300μL/min；柱温为室温，分析时间为5.0min。优选地，当待评估药物为8-羟基喹啉衍生物83b1时，步骤S1或S2所述UHPLC-MS/MS分析方法为：以氯雷他定为内标，质谱条件为：离子源ESI，选择反应监测模式，监测离子为ESI+：m/z321.96→m/z162.84(83b1)；m/z383.02→m/z259.12(氯雷他定)；液相条件为：色谱柱C18XTerraMS；流动相：体积比为9：1的乙腈-1％甲酸水；流速0.3mL·min-1；进样量5μL；柱温40℃，分析时间为2.0min。优选地，当待评估药物为8-羟基喹啉衍生物83b1时，步骤S1所述阳性药为地高辛，其UHPLC-MS/MS分析方法的条件如下：以洋地黄毒苷(digitoxin)为内标；质谱条件为：离子源ESI，选择反应监测模式(SRM)，监测离子为ESI-：m/z825→779(DG)，m/z809→763(digitoxin)；液相条件：C18HypersilgoldMS分析柱(5μm，2.1×100mm.Thermo,USA)；流动相为甲醇-水(含0.002％甲酸)(60/30，v/v)；300μL/min，柱温为室温。分析时间为3.0min。优选地，当待评估药物为靶向抗肿瘤Aurora激酶抑制剂Ly-7u或8-羟基喹啉衍生物83b1时，步骤S4所述UHPLC-MS/MS分析方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种药物的药代动力学早期成药性评估方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.先建立待评估药物的UHPLC‑MS/MS分析方法，再建立MDR1‑MDCKII细胞筛选模型，考察P‑gp抑制剂对待评估药物的转运影响；S2.建立并验证UHPLC‑MS/MS测定大鼠血浆中药物浓度的分析方法，并测定药物在大鼠体内的绝对生物利用度，计算药代动力学参数；S3.采用超滤法分离药物，结合UHPLC‑MS/MS测定药物的体内外血浆蛋白结合率；S4.通过“cocktail”法测定药物对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶亚型活性的影响；S5.采用肝微粒法以及UHPLC‑MS/MS分析药物的生物转化情况。

【技术特征摘要】
1.一种药物的药代动力学早期成药性评估方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.先建立待评估药物的UHPLC-MS/MS分析方法，再建立MDR1-MDCKII细胞筛选模型，考察P-gp抑制剂对待评估药物的转运影响；S2.建立并验证UHPLC-MS/MS测定大鼠血浆中药物浓度的分析方法，并测定药物在大鼠体内的绝对生物利用度，计算药代动力学参数；S3.采用超滤法分离药物，结合UHPLC-MS/MS测定药物的体内外血浆蛋白结合率；S4.通过“cocktail”法测定药物对大鼠肝微粒体细胞色素P450酶亚型活性的影响；S5.采用肝微粒法以及UHPLC-MS/MS分析药物的生物转化情况。2.根据权利要求1所述药物的药代动力学早期成药性评估方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.先建立待评估药物及阳性药的UHPLC-MS/MS分析方法，再建立并通过阳性药来验证MDR1-MDCKII细胞筛选模型，考察P-gp抑制剂对待评估药物的转运影响；S2.建立并验证测定大鼠血浆中待评估药物浓度的UHPLC-MS/MS分析方法，通过灌胃或/和静脉给药测定待评估药物在大鼠体内的绝对生物利用度，用非房室模型法计算动代动力学参数；S3.采用超滤法分离药物，结合UHPLC-MS/MS测定待评估药物的体内外血浆蛋白结合率；S4.建立并验证体外肝微粒体探针药物的UHPLC-MS/MS分析方法，结合阳性药考察待评估药物对六种大鼠肝微粒体细胞色素P450酶亚型活性的影响；S5.将待评估药物的体外肝微粒体孵育样本和大鼠静脉注射给药后的生物样本经固相萃取后进行UHPLC-MS/MS分析，测定待评估药物的结构及其代谢产物，研究分析待评估药物的生物转化。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S1所述阳性药为地高辛。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S1所述P-gp抑制剂为维拉帕米。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，当待评估药物为靶向抗肿瘤Aurora激酶抑制剂Ly-7u时：步骤S1或S2所述UHPLC-MS/MS分析方法中，：内标均为Ly-7z，质谱条件为：离子源ESI，选择反应监测模式，监测离子为ESI+：m/z410→353(Ly-7u)，m/z457→368(Ly-7z)；步骤S1所述UHPLC-MS/MS分析方法中，液相条件为：分离柱XTerraMSC18色谱柱；流动相为：体积比1：9的0.1%甲酸水-甲醇，流速为300μL/min，柱温为室温，分析时间为3.0min；步骤S2所述UHPLC...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵真真，姜福林，陈江英，钟国平，黄民，
申请(专利权)人：广州中大南沙科技创新产业园有限公司，中山大学，
类型：发明
国别省市：广东,44