一种ATAC-seq测序文库的构建方法技术

本发明专利技术属于分子生物学技术领域，具体涉及一种ATAC‑seq测序文库的构建方法。本发明专利技术提供的ATAC‑seq测序文库的构建过程主要包括细胞裂解提取细胞核，转座反应及纯化，PCR富集及纯化，文库质检及上机等过程。本发明专利技术提供的ATAC‑seq测序文库适用于细胞、动物、植物组织，操作简单方便，所需的细胞数量少且测序通量高。

【技术实现步骤摘要】
一种ATAC-seq测序文库的构建方法
本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种ATAC-seq测序文库的构建方法。
技术介绍
众所周知，大多数基因组中的染色质是紧密盘绕在细胞核内的，仅有一小部分区域比较松散，这部分无核小体的裸露DNA区域称为开放染色质(openchromatin)，DNA复制和基因转录往往在这些区域发生。ATAC-seq(AssayforTransposase-AccessibleChromatinwithhigh-throughputsequencing，染色质易开放区测序)是利用Tn5转座酶切割染色质开放区，并加上测序引物进行高通量测序，通过生物信息分析鉴定转录因子结合位点和核小体区域位置，从而为研究基因调控、DNA印记等提供有效的方法。获得处于开放状态的DNA序列可用于研究基因表达的调控机制，是表观遗传学研究的热点，ATAC-seq则是这类研究的最佳利器。目前，大多数ATAC-seq测序实验对细胞起始量有一定的要求，一般要求的起始量都是50000个细胞，但是不同生物50000个细胞所含有的DNA量不尽相同本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种ATAC-seq测序文库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS1、细胞裂解提取细胞核；/nS2、转座反应及纯化；/nS3、PCR富集及纯化；/nS4、文库质检及上机。/n

【技术特征摘要】
1.一种ATAC-seq测序文库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、细胞裂解提取细胞核；
S2、转座反应及纯化；
S3、PCR富集及纯化；
S4、文库质检及上机。


2.如权利要求1所述ATAC-seq测序文库的构建方法，其特征在于，步骤S1中所述细胞裂解细胞核的提取过程为：对于细胞样本，复苏解冻细胞，进行细胞裂解提取细胞核；对于动物、植物组织样本，制备细胞悬液并进行细胞裂解提取细胞核。


3.如权利要求2所述ATAC-seq测序文库的构建方法，其特征在于，步骤S1所述细胞裂解细胞核的具体过程为：对于细胞样本，要将样品置于37℃水浴中进行复苏解冻，500rpm，4℃，离心5min，置冰上，小心吸弃上清，接着加裂解液重悬细胞，500rpm，4℃，离心5min；对于动物、植物组织样本，则取约30-50mg组织液氮下研磨成粉末，置于2mLEP管中，迅速加入重悬液，充分重悬粉末，冰上孵育10min；40uM细胞筛过滤，吸取滤液1-1.5mL于新的无菌2mLEP管中，500rpm，4℃，离心5min，弃上清保留沉淀；重悬沉淀，加碘克沙醇溶液混匀，摆动式离心机1000rpm，4℃，离心20min，弃上清，再加入重悬液，轻轻吹吸混匀即可。


4.如权利要求1所述ATAC-seq测序文库的构建方法，其特征在于，步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏昊强，周煌凯，高川，艾鹏，邢燕，
申请(专利权)人：广州基迪奥生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44