一种亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包括三羟基甲基甲烷缓冲液100‑200mmol/L、甘氨酸缓冲液200‑260mmol/L、聚羧基乙二醇氨基1.0‑‑5.0g/L、甲酰胺30‑50mmol/L、IgG1.5‑2g/L、山梨酸20‑30mmol/L，辣根过氧化物酶50‑70mmol/L、其余为去离子水；所述R2试剂包括L‑亮氨酸对硝基苯胺15mmol/L、甘氨酸缓冲液150‑180mmol/L、哌嗪‑N,N‑二(2‑乙磺酸)1‑5mmol/L，其余为去离子水；制成一种亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒及其制备方法，其具有抗干扰能力强，同时具有稳定性高的效果。

A kit for the detection of leucine aminopeptidase and its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及一种亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
LAP是一种蛋白酶，肝内含量很丰富。肝内外胆淤时，LAP活力显著增高，尤其在恶性胆淤时，其活力随病情进展而持续增高。试剂对肝道梗阻及胰腺癌的诊断有价值。肝坏疽、肝肿瘤、肝炎、乳腺癌、肝癌、胆道癌、胰腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌明显增高。肝硬化、传染性肝炎可中度增高，常为参考值的2-4倍。阻塞性黄疸明显增高，常达参考值5倍以上，并出现在胆红素或ALP上升之前。LAP还可以检测尿液，在一些病例中可以检测尿液中LAP的变化，而不必采血，亮氨酸氨基肽酶(LAP)LAP在人体各组织中广泛存在，在毒性物质或疾病影响到富含LAP的近端小管时，尿LAP活性最高。肾小球基底膜通透性增高、肾小管上皮细胞损害、药物致中毒性肾损害和肾肿瘤时LAP增高。肿瘤治疗后尿LAP增高提示肿瘤复发。对各种肾脏病例进行分析，发现LAP阳性率最高。在亮氨酸氨基肽酶的检测中，其底物的稳定性至关重要，对其底物酶反应直接关系到实验所涉及到的准确性和特异性，而市面上所涉及到的底物一般采用L-亮氨酸对硝基苯胺，其稳定性对于试剂要说比较苛刻，因此，特申请一种亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒及其制备方法来对底物L-亮氨酸对硝基苯胺进行稳定性的控制，用以提高实验准确性。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种抗干扰能力强，同时具有稳定性高的亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒及其制备方法。为解决上述问题，本专利技术采用如下技术方案：一种亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包括三羟基甲基甲烷缓冲液100-200mmol/L、甘氨酸缓冲液200-260mmol/L、聚羧基乙二醇氨基1.0--5.0g/L、甲酰胺30-50mmol/L、IgG1.5-2g/L、山梨酸20-30mmol/L，辣根过氧化物酶50-70mmol/L、其余为去离子水；所述R2试剂包括L-亮氨酸对硝基苯胺15mmol/L、甘氨酸缓冲液150-180mmol/L、哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸)1-5mmol/L，其余为去离子水。进一步的方案为：所述R1试剂和R2试剂中甘氨酸缓冲液为25±1°，PH为6.6的溶液。进一步的方案为：所述R1试剂和R2试剂体积比为3:1。进一步的方案为：所述亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒的波长为410nm。进一步的方案为：所述IgG为驴或兔IgG。本专利技术还公开了一种亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：1)、将甘氨酸缓冲液和双甘肽进行搅拌混合，先静至10分钟，静至时温度控制在50-60℃，然后加入甲苯酸钠、枸盐酸钠和海藻糖和纯净水，然后再缓慢滴加IgG边搅拌，滴加的时候温度控制在25℃-30℃，制得R1试剂；2)、先把甘氨酸缓冲液和甘氨酰脯氨酰对硝基苯胺对甲苯磺酸混合，并放入到搅拌器内搅拌20分钟，去掉上清液后静置半小时，再把聚乙二醇、明胶以及纯净水进行混合，再把两者混合液倒入到一起制得R2试剂；3)、把R1试剂和R2试剂混合后即可制得亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒。本专利技术的有益效果是：本专利技术采用R1试剂和R2试剂，R1试剂中采用了三羟基甲基甲烷缓冲液和甘氨酸缓冲液复配，先把聚羧基乙二醇氨基加入到三羟基甲基甲烷缓冲液已得到一定的稳定性，然后把甲酰胺、山梨酸，辣根过氧化物酶加入到甘氨酸缓冲液进一步提高反应稳定性，再把两者混合，IgG作为免疫球蛋白可有效提高采集溶液稳定，进一步提高试剂性能，哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸)可有效提高L-亮氨酸对硝基苯胺在甘氨酸缓冲液中的稳定性，因此，制得的亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒具有抗干扰能力强和稳定性高的特点。具体实施方式下面对本专利技术的优选实施例进行详细阐述，以使本专利技术的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本专利技术的保护范围做出更为清楚明确的界定。实施例一一种亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包括三羟基甲基甲烷缓冲液180mmol/L、甘氨酸缓冲液230mmol/L、聚羧基乙二醇氨基3g/L、甲酰胺45mmol/L、IgG2g/L、山梨酸30mmol/L，辣根过氧化物酶50mmol/L、其余为去离子水；所述R2试剂包括L-亮氨酸对硝基苯胺15mmol/L、甘氨酸缓冲液180mmol/L、哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸)3mmol/L，其余为去离子水。实施例二一种亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包括三羟基甲基甲烷缓冲液100mmol/L、甘氨酸缓冲液200mmol/L、聚羧基乙二醇氨基2g/L、甲酰胺40mmol/L、IgG1.5g/L、山梨酸20mmol/L，辣根过氧化物酶50mmol/L、其余为去离子水；所述R2试剂包括L-亮氨酸对硝基苯胺15mmol/L、甘氨酸缓冲液150mmol/L、哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸)1-5mmol/L，其余为去离子水。实施例三一种亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒，包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包括三羟基甲基甲烷缓冲液200mmol/L、甘氨酸缓冲液260mmol/L、聚羧基乙二醇氨基3g/L、甲酰胺50mmol/L、IgG2g/L、山梨酸30mmol/L，辣根过氧化物酶70mmol/L、其余为去离子水；所述R2试剂包括L-亮氨酸对硝基苯胺15mmol/L、甘氨酸缓冲液180mmol/L、哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸)1-5mmol/L，其余为去离子水。特取以实施例一为例，并取12组样品进行检测，正常范围值为30-60U/L，其中4组为正常值范围，其余的8组为偏离值范围，采用不同液体包括血清，前后相隔60S进行检测，并采用连续监测法实施，对比产品X也采用连续监测法实施，和为前两侧监测数据的中间值，DXi和DYi为前两侧监测的相差值，如下表所示：结果为本专利技术产品与对比产品相比，本专利技术的产品稳定性更好。以上所述，仅为本专利技术的具体实施方式，但本专利技术的保护范围并不局限于此，任何不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本实用新保护范围为准。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒，其特征在于：包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包括三羟基甲基甲烷缓冲液100-200mmol/L、甘氨酸缓冲液200-260mmol/L、聚羧基乙二醇氨基1.0--5.0g/L、甲酰胺30-50mmol/L、IgG1.5-2g/L、山梨酸20-30mmol/L，辣根过氧化物酶50-70mmol/L、其余为去离子水；所述R2试剂包括L-亮氨酸对硝基苯胺15mmol/L、甘氨酸缓冲液150-180mmol/L、哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸)1-5mmol/L，其余为去离子水。/n

【技术特征摘要】
1.一种亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒，其特征在于：包括R1试剂和R2试剂，所述R1试剂包括三羟基甲基甲烷缓冲液100-200mmol/L、甘氨酸缓冲液200-260mmol/L、聚羧基乙二醇氨基1.0--5.0g/L、甲酰胺30-50mmol/L、IgG1.5-2g/L、山梨酸20-30mmol/L，辣根过氧化物酶50-70mmol/L、其余为去离子水；所述R2试剂包括L-亮氨酸对硝基苯胺15mmol/L、甘氨酸缓冲液150-180mmol/L、哌嗪-N,N-二(2-乙磺酸)1-5mmol/L，其余为去离子水。


2.根据权利要求1所述的一种亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒，其特征在于：所述R1试剂和R2试剂中甘氨酸缓冲液为25±1°，PH为6.6的溶液。


3.根据权利要求1所述的一种亮氨酸氨基肽酶检测试剂盒，其特征在于：所述R1试剂和R2试剂体积比为3:1。


4.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱静，朱天明，徐俊侠，
申请(专利权)人：金华市强盛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33